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線粒體的活體染色的及電鏡照片觀察2015/08/13

實驗原理線粒體是細胞內一種重要細胞器，是細胞進行呼吸作用的場所。細胞的各項活動所需要的能量，主要是通過線粒體呼吸作用來提供的?；铙w染色是應用無毒或毒性較小的染色劑真實地顯示活細胞內某些結構而又很少影響細胞生命活動的一種染色方法。詹納斯綠B是線垃體的專一性活體染色劑。線粒體中細胞色素氧化酶使染料保持氧化狀態呈藍綠色，而在周圍的細胞質中染料被還原，成為無色狀態。實驗試劑1.l／300詹納斯綠B染液2.Ringer氏液(哺乳類用)實驗設備1.顯微鏡2.手術器材一套3.解剖盤4.小平皿5.載片6.蓋片7

成年豬胰島分離純化方法的優化2015/08/13

實驗試劑膠原酶V，512kut/mg(Sigma公司)，DNA酶(Sigma公司)，胎牛血清(Gibco公司)，RPMI1640培養液(Gibco公司)，Dextran(Pharmacia公司)，Hanks平衡鹽溶液(Gibco公司)。實驗設備離心機，注射器，顯微鏡，超凈工作臺等。實驗材料成年雜種豬，豬齡12mo，體質量150kg左右，豬被屠宰放血后，在相對無菌條件下迅速取出胰腺，保存于4℃Hanks液中送至實驗室，熱缺血時間少于10min，冷缺血時間少于90min。實驗步驟1.胰島分離胰腺取回

小麥總RNA的提取2015/08/13

實驗步驟1.所有容器高溫滅菌兩次，DEPC高溫滅菌，所有的試劑用DEPC配制，高溫滅菌。2.在一滅菌2mL管中加入：5mol/L異硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0)0.1mL。3.稱取0.2g小麥黃化苗的葉片，迅速在液氮中研磨成粉末，轉入已準備好的離心管中，劇烈震蕩。4.混勻，冰浴30min。5.4℃，12000rpm，10min。6.上清至另一離心管中加0.4mL氯仿，劇烈震蕩。冰浴放置5min。7.4℃，12000rpm，10min。8.棄有機相(下層)加入0.4mL

葡萄糖在小鼠克隆胚胎發育中的作用2015/08/05

實驗步驟1.克隆胚胎制備和胚胎培養卵母細胞在含有5.5mM葡萄糖的CZB培養液中培養。用含有5.5mM葡萄糖和2.5ug/ml細胞松弛素B的HEPES-CZB液(HCZB)作為工作液，卵母細胞在此液中被去掉紡錘體-染色體復合體；用卵丘細胞作為核供體。用注射針反復吸入、吹出卵丘細胞，以除去其細胞膜和大部分細胞質，然后用注射針將裸卵的核注入去除紡錘體-染色體復合體的卵母細胞中。孤雌胚胎所用的卵母細胞與用于制備核移植胚胎的卵母細胞來源相同。孤雌胚胎和核移植胚胎用不含Ca2、卻含10mMSr2和細胞松弛

小鼠角質細胞的分離和培養2015/08/05

實驗試劑HBSS：NaCl8g/LKCl400mg/LKH2PO460mg/L無水Na2PO447.86mg/L無水葡萄糖1000mg/LNaHCO3350mg/L實驗材料妊娠期BALB/c小鼠實驗步驟1.將1~2天齡新生裸鼠窒息后，置于培養皿中，用1%碘聚乙烯吡咯烷酮液洗凈裸鼠，流水*沖洗，然后用70%乙醇洗兩次。小鼠應立即使用，若待處理的小鼠數量較多，可置冰上30min。2.去除小鼠的四肢和尾巴。3.將小鼠從尾巴至鼻子的皮膚作一簡單切口，用大鼠牙齒鑷輕輕將整個身體的皮膚剝下，用一把鑷子夾住身

質粒DNA的大量提取、純化及棉花的遺傳轉化2015/08/05

實驗試劑1.STE[0.1mol/LNaCI、10mmol/LTris-HCl(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0)]2.溶液I[50mmol/L蔗糖、25mmol/LTris-HCl(pH8.0),10mmol/LEDTA(pH8.0)]3.溶液II(0.4mol/LNaOH和2%SDS等量混勻)4.溶液III(3mol/LKac,pH4.8)5.異丙醇6.4mol/LLiCI7.RNase8.苯酚、酚-氯仿、氯仿9.乙醇實驗設備1.搖床2.制冰機3.高速離心機4.水浴鍋5.超凈

麻醉大鼠動脈血壓的測定（直接測定法）2015/07/23

實驗試劑1.20%氨基甲酸乙酯（Urethane）注射液或者1.5%戊巴比妥鈉（PhentobarbitalSodium）注射液2.1%普魯卡因注射液3.0.3%肝素生理鹽水注射液實驗設備1.常用實驗器械一套2.家兔或者大鼠實驗臺一個3.用于家兔或者大鼠的聚乙烯醫用塑料導管（家兔用導管外徑為2mm，內徑為1.5mm；大鼠用導管外徑為1mm，內徑為0.8mm）4.壓力換能器及其多通道生理信號采集記錄儀器實驗材料家兔，體重為2kg左右；大鼠，體重為200～250g左右。實驗步驟1.頸總動脈測量動脈血

細胞傷口愈合實驗2015/07/23

實驗試劑DMEM培養基胎牛血清PBSBD24孔細胞培養板Raininpipettips,1ml戊二醛乙醇結晶紫實驗設備細胞培養儀：37°Cand5%CO2實驗材料人MDA-MB-231cell實驗步驟1.細胞在含有10%FBS的DMEM培養基中生長。2.細胞以一定密度接種到24孔細胞培養板中，生長24小時后，單層細胞融合度應達到70-80%。3.不要更換培養基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養細胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑

細胞計數與存活測試2015/07/23

實驗材料0.4%w/vtrypanblue(GibcoBRL15250-061)Erythosinbluishstain取0.1gramErythrosinbluish(SigmaE-9259)及0.05grampreservativemethylparaben(SigmaH-3647)溶于100mlCa/Mgfreesaline血球計數盤及蓋玻片(Hemocytometerａndcoverslip)計數器(counter)低倍倒立顯微鏡粒子計數器(Coultercounter,CoulterE

冷凍組織切片的制作2015/07/08

實驗試劑液氮，干冰，1％明膠，4％多聚甲醛，PBS，含1％NP-40的PBS，3％BSA／PBS稀釋抗體，辣根過氧化物酶標記的二抗，DAB／金屬鹽試劑，3％過氧化氫，0.3％(W／V)氯化鎳貯存液，Harris蘇木精，乙醇實驗設備載玻片，Whatman1＃濾紙，低倍光學顯微鏡實驗材料未受損傷的組織實驗步驟1.將未受損傷的組織切剖成小樣本，約lcmXIcmX0.4cm。2.將標本放在卡片的一端。標記該卡片，將帶有標本的一端浸入液氮中。60s后，取出標本并放在干冰上。修剪卡片，使其大小剛好比組織塊稍

麻醉家兔、大鼠中心靜脈壓的測定2015/07/08

實驗原理中心靜脈壓（centralvenouspressureCVP）是用來反映右心房內壓力變化的一個指標。右心房內壓力的變化受到兩個因素的影響：*是上下腔靜脈回流的情況，比如大量失血或者丟失體液而發生低血容量性休克時，回心血量明顯減少，右心房內壓力會降低，中心靜脈壓降低；第二是右心室內壓力變化的情況，比如肺動脈高壓時，右心室內壓也增高，右心房內血液進入右心室受阻，右心房內壓增高，中心靜脈壓增高。實驗試劑1.20%氨基甲酸乙酯注射液或者1.5%戊巴比妥鈉注射液2.1%普魯卡因注射液3.0.3%肝

干擾素的制備及檢測實驗2015/07/08

實驗原理干抗素是干擾素誘生劑作用于有關生物細胞所產生的一類高活性、多功能蛋白質。它從細胞產生和釋放出來以后，又作用于相應的其它同種細胞，使其獲得抗病毒及抗腫瘤等多方面的免疫力。所謂干擾素誘生劑，是指能誘導有關生物細胞產生干擾素的一類物質。能誘導有關生物細胞產生α和β干擾素者稱甲類干擾素誘生劑，如各種動物病毒、細胞內寄生的微生物等；可誘導T細胞產生γ干擾素的稱為乙類干擾素誘生劑，如脂多糖、鏈球菌毒素、腸毒素A等。在實際工作中，制備干擾素多采用兩種方法。一是用干擾素誘生劑誘導某些生物細胞產生干擾素，

煙草轉化實驗流程2015/07/08

實驗材料煙草細胞：BY-2實驗步驟1.BY-2細胞培養BY-2細胞懸浮培養在搖床上，避光，溫度260C，轉速130rpm，每7天將1ml細胞轉入20ml新鮮的液體培養基中繼續培養。BY-2愈傷組織生長在固體培養基上，每3-4周繼代一次。轉基因的懸浮細胞和愈傷組織生長在含相應抗生素的培養基中。2.用干轉化的農桿菌GV3101的準備(1)接種農桿菌單菌落到2ml新鮮的YEB液體培養基中，28“培養過;(2)取200ul培養物加到l0ml新的培養基中繼續培養3-4小時:(3)'5000rpm,離心5m

單克隆抗體的克隆化方法2015/07/08

實驗原理經過抗體測定的陽性孔，可以擴大培養，進行克隆，以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體?？寺〉臅r間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長，互相爭奪營養和空間，而產生抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早，太早細胞性狀不穩定，數量少也易丟失?？寺』年栃噪s交瘤細胞，經過一段時期培養之后，也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失，使部分細胞喪失產生抗體的能力，所以需要再次或多次克隆化培養?？寺』螖档亩嗌儆煞置谀芰娙鹾涂乖拿庖咝詮娙醵鴽Q定。一般說，免疫性強的抗原克

柱離心法純化質粒DNA2015/06/25

實驗原理1.離心柱結構：特殊硅基質吸附材料，特異性吸附DNA，而RNA與蛋白質穿過。在正常情況下，核酸表面覆蓋了一層由水分子組成的親水薄膜，以維持其水溶性。高濃度鹽離子的加入破壞了核酸表面親水薄膜的相對有序排列，形成了疏水環境。在此環境中，核酸與硅膠膜能有效結合，而蛋白質、代謝產物和其他污染物則不能結合。2.堿變性抽提的原理是在pH高于12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，破壞了堿基配對，導致雙螺旋結構解開而變性，但閉環的質粒DNA鏈由于處于拓撲纏繞狀態而不能彼此分開。當pH調至中性時，

轉化克隆的篩選和鑒定2015/06/25

實驗原理利用轉化后宿主菌所獲得的抗菌素抗性性狀篩選出獲得質粒的菌落克隆。再從這些菌落中鑒定出質粒上帶有外源基因插入片段的克隆菌落。實驗試劑1.LB培養基(加抗菌素)2.PCR用試劑3.引物4.質粒提取用試劑5.酶切需要的限制性內切酶及其緩沖液，70%甘油(70%甘油，0.1mol/LMgSO4，0.025mol/LTris-HClpH8.0)。6.100mg/ml氨芐青霉素實驗設備1.旋渦混合器2.小鑷子3.微量移液取樣器4.移液器吸頭5.1.5ml微量離心管6.雙面微量離心管架7.干式恒溫氣浴

免疫組織化學染色方法2015/06/25

實驗原理免疫細胞化學（immunocytochemistry）是根據免疫學原理，利用抗體同特定抗原專一結合，對抗原進行定位測定的技術?？乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子相結合的小分子；抗體則是由漿細胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結合上標記物，再與組織中的抗原發生反應，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。常用的標記物有熒光素和酶。熒光素標記的稱為免疫熒光法（immunofluorescenttechnique），常用的螢光素有異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothioc

小鼠胸腺細胞增殖3H-TdR摻入法檢測IL-1的生物活性2015/06/25

實驗試劑1.75%酒精2.5%FCS-RPMI-1640*培養液與RPMI-1640*培養液3.ConA或PHA4.IL-1標準品：倍比稀釋成至少6個不同濃度值。實驗設備1.3H-TdR、β-液閃汁數儀，微量細胞收集儀2.解剖刀、剪、單皿、研磨工具(玻璃勻漿器，不誘鋼網或者毛玻璃片，用于研磨小鼠胸腺)3.96孔細胞培養板4.刻度吸管，毛細吸管，刻度離心管、離心機、細胞計數板，倒置顯微鏡，加樣器(頭)，50%CO2培養箱，超凈工作臺實驗材料1.小鼠：BALB/C或C57BL/6小鼠，6-10周齡，

大鼠血清、血漿及相關液體樣本中膽囊收縮素（CCK）含量的測定2015/06/25

實驗試劑1.大鼠膽囊收縮素(CCK)定量檢測試劑盒(ELISA)2.蒸餾水實驗設備1.37℃恒溫箱2.標準規格酶標儀3.精密移液器及一次性吸頭4.一次性試管5.吸水紙實驗步驟1.準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。2.配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3.加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋

抗原的制備方法2015/06/08

實驗步驟一、抗原的提取抗原的制備是一件十分細致的工作，要制備一個高純度的抗原，需要付出艱巨的努力，制備工作涉及物理學、化學和生理學等許多領域的知識。根據物理或化學特性建立起來的分離、純化方法的主要原理不外乎科二個方面：①利用混合物中幾個組分分配率的差別將他們分配到可用機械方法分離的兩或幾個物相中，如鹽析、有機溶劑抽提、層析和結晶等；②把混合物置于單一物相中，通過物理力場的作用使各組分分配于不同的區域而達到分離的目的，如電泳、超速離心和超濾等。由于組織細胞內存著許多分子結構和理化性質不同的抗原物質