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優異的檢測靈敏度
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一、產品簡介:
本試劑盒是化學發光系統,用于檢測固定在膜上的蛋白或核酸,靈敏度高,背景低,檢測靈敏度可達低飛克(femtogram)級乃至飛克級以下,適用于檢測極痕量蛋白或核酸。發光信號持續時間較長,半小時以后仍可維持75%的發光,便于反復曝光操作。與其他 ECL 化學發光底物相比,可顯著減少樣本及一抗和二抗的使用量。
二、原理:
極敏型ECL化學發光底物試劑盒用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體、抗原或者核酸。蛋白質或核酸在電泳后轉移到印跡膜上,以HRP標記的抗體或探針結合膜上的目的蛋白或核酸,洗膜后置于用本產品配制的ECL工作液中,室溫孵育數分鐘,HRP使工作液中的魯米諾(Luminol)氧化并發光,試劑中添加的增強配方可以使這種發光得到*增強,從而能夠檢測更低表達量的蛋白質或核酸。此光經X光膠片或者電子裝置感光記錄下來,可清晰顯示蛋白質或核酸條帶。
三、產品優點:
低飛克級靈敏度——*的靈敏度,能快速檢測更廣泛的蛋白范圍,可檢測低飛克級乃至飛克以下的蛋白量。
信號穩定——發光時間較長,能進行多次曝光,半小時以后仍可維持75%的發光。
信號強——發光信號比對碘苯酚增強的 HRP-魯米諾檢測體系得到*增強。
穩定性較高——試劑盒可在4度穩定存放一年。
節約抗體——需要更少(稀釋更多)的一抗和二抗,特別節省抗體(*用量:一抗0.01-0.2 μg/mL,二抗2-10 ng/mL)。
四、使用方法:
1. 印跡膜制備:執行常規電泳、轉膜、HRP標記的抗體或者HRP標記的核酸探針孵育、洗膜;ECL工作液含有HRP催化的發光底物,檢測系統必須基于HRP酶標記的抗體或者核酸探針。充分的洗滌對于降低背景非常重要,所有步驟均在室溫下完成。
2. ECL工作液的配置:在使用前取等量A液和B液,充分混勻后盡快使用;將膜片置混合液中,于室溫下孵育約2分鐘,每平方厘米膜片至少使用0.1-0.2ml以覆蓋全膜片,注意不要在膜片表面形成氣泡。
3.蛋白或核酸信號顯現:
1). 用平頭鑷鉗住膜片,垂直置于吸水紙上以吸去過量試劑,僅留下少量液體覆蓋表面,不可讓膜*干燥;
2). 將膜片置于保鮮膜上,吸附蛋白面朝上,小心趕盡氣泡;
3). 用電子裝置感光,或在暗室中用X光片曝光;
4). 根據信號強弱適當調整曝光時間,也可選擇不同時間多次曝光,以取得更佳效果。