RNA甲基化修飾試劑盒
- 公司名稱 上海譽澄智能科技有限公司
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- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 代理商
- 更新時間 2018/4/26 12:36:37
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RNA甲基化修飾試劑盒
此品非常適合從細胞與組織等樣本中提取的總RNA,進行RNA甲基化修飾操作,整個實驗時間僅需3小時。
重點提示
使用必讀: 使用:采用RNA甲基化修飾試劑盒處理得到的轉(zhuǎn)化RNA對于像甲基化特異性PCR, MS-HRM,和亞硫酸鹽測序如:焦磷酸測序和深度測序是非常理想的。其中總RNA可以是 來自哺乳動物,植物,真菌,細菌和病毒等樣本中得到的。
RNA輸入量:對于每次亞硫酸鹽實驗RNA的輸入量是5 ng-1 ug.zui為理想的RNA的輸入 量應(yīng)該是200 – 500 ng。當使用做甲基化特異性RT-PCR時,RNA的 輸入量可以少至<10 ng,但是PCR循環(huán)數(shù)應(yīng)該多于45。RNA處理后的得率取決于RNA的輸 入量,自然的RNA量和起始材料來源。
起始材料:非常適合使用各種細胞和組織樣本,比如:來自培養(yǎng)瓶和微孔板培養(yǎng)的細胞, 新鮮和冷凍的組織,石蠟包埋組織,血液,體液樣本等等。
預(yù)防措施: 為了避免交叉污染,接下來的預(yù)防措施是非常有必要的。F-Spin Columns:仔細地吸 取樣本或溶液到 F-Spin Columns。使用滅菌的槍頭并在轉(zhuǎn)移完不同的溶液時隨時更換。在 將 F-Spin Columns 放到微型離心機前始終保證蓋子是蓋緊的。在整個操作步驟中必須帶干 凈的手套。為了避免手套接觸到樣本,應(yīng)該理科更換手套。
產(chǎn)品簡介
報道,5-甲基胞嘧啶(5-mC)不僅廣泛的存在于基因組 DNA 中,在 RNA 中也普 遍存在。但是,RNA 甲基化的功能仍不清楚。有些研究認為 RNA 甲基化在翻譯調(diào)控中起著 重要作用,而有些研究認為其在 RNA 的穩(wěn)定性及結(jié)構(gòu)中起著重要作用。在人類中, 5-mC 會 出現(xiàn)在各種不同形式的 RNA 分子上,包括 tRNAs,rRNAs,mNRAs,非編碼 RNA(ncRNAs)等。 至少有 10275 個的 5-mC 候選位點被發(fā)現(xiàn)在 mRNAs 和 ncRNAs,它覆蓋了 10.6%殘留在轉(zhuǎn) 錄組的總胞嘧啶。5-mC 似乎濃縮在某些類型的 ncRNA,但相對缺乏 mRNAs。然而,絕大多 數(shù)(83%)的候選位點中發(fā)現(xiàn)在mRNAs。在這些轉(zhuǎn)錄組上, 5-mC 似乎耗盡在蛋白質(zhì)編碼序列, 且濃縮在 5’和 3’UTRs。兩個不同的甲基轉(zhuǎn)移酶,NSUN2 和 DNMT2 已知催化 5-mC 修改在 真核生物的 RNA。zui近強有力的數(shù)據(jù)表明,RNA 胞嘧啶甲基化作用影響著調(diào)節(jié)各種生物過 程,如 RNA 穩(wěn)定性與信使核糖核酸(mRNA)的翻譯。此外,損失 5-mC 在 vault RNAs 導(dǎo) 致異常的處理成 Argonaute-associated 小 RNA 片段,可以作為小分子核糖核酸(即 microRNA) 。 因 此 , 受 損 的 處 理 的 vault ncRNA 可 能 與 導(dǎo) 致 人 類 疾 病 的 病 因 NSUN2-deficiency 人類疾病相關(guān)。亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化 RNA,緊接著是 RT-PCR 擴增、克隆和 可信的測序分析,來收集可靠的關(guān)于 RNA 胞嘧啶甲基化狀態(tài)的信息,變得尤為重要。由于 RNA 的不穩(wěn)定性,導(dǎo)致對于 RNA 的研究十分困難。為此,我公司給您強烈* RNA 甲基 化修飾試劑盒,解決了如上的問題。該產(chǎn)品包括了進行修飾所有必要組件,*設(shè)計的混合 液配方包含了 RNA 的保護劑,以防降解。這樣有效保證了胞嘧啶轉(zhuǎn)化成尿嘧啶,而甲基化 的胞嘧啶幾乎不受影響。
無毒的 RNA 緊緊的結(jié)合在離心柱基質(zhì)上, RNA 可以有效去除殘余的亞硫酸氫和鹽, 得到純凈的修飾 RNA。洗脫后的 RNA 可以用于做 qMSP(即 RT-PCR),克隆,MS-HRM 和測序分析(如:焦磷酸分析和深度測序)等各種 RNA 甲基化后續(xù)實驗分析。產(chǎn)品功能簡 介如下:
有效且高效地準備轉(zhuǎn)化好的RNA用于各種下游實驗分析。
。這個
工具是專門為亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和驗證RNA而設(shè)計的,具有如下的優(yōu)勢和特性:
l 快速簡便的操作流程僅需 3 小時 l 將未甲基化的 RNA 胞嘧啶(C)*轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(U),轉(zhuǎn)化率>99.9% ;不當或錯誤的轉(zhuǎn)化 率<0.1% (甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶)。 l 強給力的 RNA 保護劑有效防止了 RNA 的降解,保護了>90%的 RNA。 l 包括的對照引物是專門針對特異轉(zhuǎn)化后的 RNA 設(shè)計的,可以用來測試其是否*正確的實現(xiàn)了 亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化。 l 可用于亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的 RNA 低至每次反應(yīng) 5 ng l 簡單、可信和實驗條件始終如一。
原理/步驟
包括了所有定性修飾總RNA樣本的必要試劑。*轉(zhuǎn)化試劑包含了 RNA保護劑,有效防止了化學(xué)試劑和嗜熱試劑的降解。這樣提高了胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶的 效率,胞嘧啶脫氨基作用可以可以忽略不計。無毒的RNA捕獲溶液增強了RNA結(jié)合在柱基 質(zhì)上的能力,這樣轉(zhuǎn)化后的RNA可以有效地被洗脫同時將亞硫酸氫鹽和鹽分*清除。更 值得一提的是,在這個試劑盒中我們配套的提供了一對特異性的甲基化引物,*地方便了 您進行qMSP(甲基化定量PCR)分析。