m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒（比色法）  

 此品非常適合從細胞與組織等樣本中提取的總RNA，進行m6A RNA甲基化定量分析，整個實驗時間僅需3.5 小時。

重點提示

使用必讀：

使用：m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒（比色法） 專門為定量檢測總RNA中m6A RNA 甲基化水平而設計的。其中總RNA可以是來自哺乳動物，植物，真菌，細菌和病毒等樣本 中得到的。  

RNA輸入量：對于每次實驗RNA的輸入量是100-300 ng.zui為理想的RNA的輸入量應該 是200 ng，正如我們所知m6A通常不到總RNA的0.1%。

起始材料：非常適合使用細胞和組織樣本，比如：來自培養瓶和微孔板培養的細胞，新 鮮和冷凍的組織，石蠟包埋組織，血液，體液樣本等等。

內控：這個試劑盒中包括了陽性對照和陰性對照。使用0.02到1 ng 的m6A 繪制標準曲 線或可以把m6A作為單點陽性對照。因為不同的組織之間m6A的含量不一樣；正常的和病變 的部分；或處理和不處理的條件。我們建議使用二份樣本來做，這樣可以保證生成信號的可 信性。這個試劑盒容許實驗人員對于m6A進行定量并且取二份不同提取的RNA樣本對 于m6A進行相對定量分析。

預防措施:       為了降低后續 RT-PCR 擴增過程中的風險，在構建 RT-PCR 反應時，我們建議實驗人 員應帶一次性干凈的手套和使用帶濾芯的吸頭。

 產品簡介

*，在真核生物中，m6A (N6-methyladenosine)是在 RNA 分子中zui常見的和豐富存在的。這種修飾 是由 m6A 催化甲基轉移酶復雜 METTL3 和zui近發的 m6A RNA 去甲基轉移酶如 FTO 和 ALKBH5，這種 m6A RNA 去甲基是以 α-ketoglutarate m6A(α-KG)-和 Fe2+-方式進行的。 結果表明, 在許多生物過程中，如從生 命發展和代謝生育，METTL3,FTO 和 ALKBH5 扮演著重要角色。超過 80%的 m6A 是以 RNA 甲基化的形式存在

于不同的物種。 m6A 主要分布在 mRNA 和也發生在非編碼 RNA(ncRNA)如 tRNA,rRNA 和 snRNA。相對豐富的

m6A 在 mRNA 轉錄時已經表明影響核糖核酸代謝過程,如拼接,核出口,翻譯能力和穩定性,RNA 轉錄。異常甲

基化水平的 m6A 誘導缺陷甲基化酶和 m6A RNA 去甲基酶可能導致 RNA 功能障礙的和疾病發生。例如,異常低

水平在正常 m6A 目標由于增加患者 FTO 活動、FTO 基因突變,通過迄今還未通路,導致了肥胖和相關疾病的

發作。動態和可逆化學 m6A 修飾，在 RNA 中也可以作為一種新穎的表觀遺傳標記的生物學，意義深遠可以

預見。因此，更多的有用的信息，更好理解 m6A RNA 甲基化水平和分布對 RNA 轉錄、診斷和治療疾病非常

有益。

該產品中,總RNA必將結合在微孔板上，使用一種高特異性的RNA溶液方案。使用特異性較強的捕獲抗體和檢

測抗體來分析m6A。檢測產生的增強信號,然后通過讀取在微型板分光光度計波長為450 nm處吸光度進行比

色定量。m6A的數量與測量的OD值強度是成正比的。在這個試劑盒中包括陽性和陰性對照。繪制標準曲線 (范

圍:0.02到1 ng的m6A)或單點對照的m6A可以用作陽性對照。因為m6A的含量，在不同的組織,正常和病變的

部位,或在處理過以及未處理的條件下,我們建議運行2份樣品,以確保信號生成的可信心性。這套解決方案

將允許研究人員選擇定量一個數量的m6A或確定相對m6A RNA甲基化狀態的兩個不同的RNA樣品。

該款產品擁有一套完整的優化緩沖液和試劑體系，可以采用比色或熒光法來定量總RNA中的 m6A

(N6-methyladenosine)。對于總RNA(從哺乳動物，各種組織或細胞樣本如像培養瓶和培養皿培養的細胞，

新鮮和冷凍的組織，石蠟包埋組織，血液，體液，植物，真菌，細菌和病毒等任何樣本中提取的) 中m6A

直接定量檢測甲基化狀態是非常理想的。

在mRNA中m6A甲基化是可逆的（文獻1） 對于細胞與組織等樣本，（比色法） 具有以下優勢

特點：

l 類似于 Elisa 步驟的比色法檢測方便快速。整個操作步驟可在 3 小時 45 分鐘完成；熒光法更短。  l 高敏，檢測的zui低下限為 10 pg 的 m6A；熒光法更低 。

l *的結合液容許>70 nts 的 RNA緊緊的結合在孔上，可以定量檢測來自mRNA和ncRNA如tRNA， rRNA 和 snRNA。  l 優化的抗體和增強劑溶液可以特異的定量檢測 m6A，對于特定片段腺苷濃度范圍的未甲基化樣本 RNA 不會產生交叉反應。  l 包括的陰性和陽性對照，對于來自任何種屬的 m6A 都可以實現定量檢測。  l 96 孔可拆卸板模式使研究人員能根據自己需要選擇手工或是高通量模式分析。 l 操作簡便、可信、分析條件始終如一。

原理/步驟

（比色法）提供了所有定量檢測總RNA中m6A試劑。在這 個分析試劑盒中，使用高效RNA結合液將總RNA綁定在孔板上。使用捕獲和檢測抗體對于 m6A進行檢測。隨著信號的增強然后使用酶標儀讀取吸光值。m6A的量與測量的OD值成正 比。