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mRNA疫苗生產流程及具體步驟2023/02/08

mRNA疫苗生產流程及具體步驟Step1：將含病毒的核酸序列的質粒，注入到大腸桿菌中，這里的質粒可以是從病毒中提取，但更安全有效的方法是根據發表的核酸序列優化設計直接連接到質粒上，避免跟病毒直接接觸；Step2：在溫暖適宜的條件下，大量繁殖生長攜帶了質粒的大腸桿菌；Step3：將上述生長繁殖的大腸桿菌轉移至體積更大的營養液里，適宜條件下存放發酵，使其復制億萬級別的質粒；Step4：發酵結束后，加入酶或者其他化學物質分解大腸桿菌細胞壁，收集并純化質粒；Step5：檢測上述的質粒，確保質粒攜帶的基因

初代測序技術分類及原理2023/02/08

1977年Sanger和Gilbert分別提出雙脫氧鏈終止法和化學降解法測序法，標志著初代測序技術的誕生。初代測序技術分類Maxam-Gilbert化學降解法測序1.測序原理：先對DNA片段的5'或3'端進行放射性標記，再采用特異性化學試劑修飾和裂解特定的堿基位點，從而得到一系列有共同放射起點但長度不一的DNA片段混合物，通過對此混合物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳即可從放射自顯影片直接讀出DNA堿基序列。2.堿基序列的識讀：聚丙烯酰胺凝膠電泳可以將DNA片段混合物按片段大小分開，片段越小越接近凝膠底部

常見生物樣本的存儲和運輸條件匯總2023/02/08

常見生物樣本的存儲和運輸條件匯總生物樣本是醫學研究的重要資源，其質量在很大程度上決定著臨床結果的準確性和可靠性。目前生物樣本及其提取產物主要有深低溫和常溫兩大類保存方式，針對不同科研的需求，更多的樣本保存方式也相繼問世，本文將對常用的樣本保存方式及運輸條件進行小結，可以收藏保存備用。樣本儲存條件1.-196℃、-150℃深低溫凍存超低溫凍存是理想的樣本保存方法，目前液氮（-196℃）是靠譜的樣本保存方法，然而由于樣本浸沒在液氮中，游離的組織碎片可能帶來交叉污染的潛在風險，因此催生了氣相液氮（-1

下游生物技術的一般工藝流程2023/02/08

下游生物技術的一般工藝流程人們通常把工業生物技術產品的生產過程比作河流，通常稱微生物育種技術為上游技術，稱發酵技術為生物反應工程，而發酵液的產物分離到產品的制作技術稱為下游技術。由于工業生物技術產品眾多，原料廣泛，產品性質多樣，用途各異，因而分離、提取、精制的技術，生產工藝及相關裝備也是多種多樣的。根據不同的對象，可采用在生物工業中行之有效的化工單元操作技術，也可采用生物工業中*的下游新技術。某一具體產品的分離提取工藝還與下列情況有關：是胞內產物還是胞外產物；（2）原料中產物和主要雜質濃度；（3

免疫球蛋白的五大種類2023/02/08

免疫球蛋白的五大種類免疫球蛋白是一組具有抗體活性的球蛋白，存在于血清、體液、外分泌液和一些細胞膜上，免疫球蛋白一般常縮寫為Ig，通常可以分為五類，即IgA、IgG、IgM、IgD、IgE，各自具有不同的免疫學功能。這些免疫球蛋白由B細胞分泌，被免疫系統用來鑒別與中和外來物質如細菌、病毒，其廣泛存在于人體血液中，及B細胞的細胞膜表面，臨床上常用的是測定免疫球蛋白IgA、IgG、IgM三項。免疫球蛋白對于抵抗外來入侵的病原體或者異物等外來性的抗原，有非常重要的作用。IgMIgM對發現早期感染意義非常

生物反應器培養和搖瓶培養的區別2023/02/07

生物反應器培養和搖瓶培養的區別使用搖瓶在二氧化碳培養箱進行細胞培養，是細胞培養的基本方法。隨著現代生物科學研究發展進步，使用生物反應器進行商業化生產也變得越來越普遍，生物反應器的應用逐漸滿足小規模半生產能力的需求。同樣是進行細胞培養，什么情況下使用搖瓶培養？什么情況下使用生物反應器培養呢？與搖瓶培養相比生物反應器有哪些優勢呢？下面小編就總結一下從搖瓶轉向生物反應器培養的5個理由：一、生物反應器培養可獲得更高的收益率這是從搖瓶轉向生物反應器的主要原因之一—您通常可以在更短的時間內獲得更多目的產物。

超凈工作臺和生物安全柜的區別2023/02/06

很多從業者對超凈工作臺和生物安全柜之間的區別不了解，認為這兩者用途差不多。其實這是有很多誤區的，超凈工作臺和生物安全柜還是有很多區別的，首先我們從原理上對兩者之間進行一個定義。原理超凈工作臺的工作原理是將通過高效過濾器的凈化空氣向下吹或水平過工作區，用來保護樣本，由于工作區是正壓區，氣流通過操作窗口外溢，只保護樣本，而對操作人員和環境不提供保護，如果操作含有任何已知或潛在致病氣溶膠，都會給操作人員帶來極大隱患。生物安全柜是一種負壓凈化工作臺，可以防止操作者和環境暴露于實驗室過程中產生的有害氣溶膠

核酸提取試劑盒的工作原理2023/02/06

核酸提取試劑盒的工作原理子生物學實驗中qPCR、分子克隆、下一代測序等都需要進行DNA提取。如今，大多數實驗室都使用商業DNA提取試劑盒，這些試劑盒使用硅膠自旋過濾法來獲得高質量的DNA。這些可以快速有效地純化DNA（或RNA），在這里需要先了解一下DNA提取試劑盒的工作原理。核酸提取試劑盒的工作原理離心柱包含一種硅膠樹脂，可根據鹽條件和受提取方法影響的其他因素選擇性地結合DNA和RNA。這些DNA提取試劑盒使整個過程比舊的DNA分離方法更容易、更快。但是，使用套件的缺點是，如果您不了解套件的黑

DNA 提取實驗中的常見問題解析2023/02/06

分子生物中RNA和DNA提取會常常遇到一些問題，下面小編就RNA和DNA提取實驗中的通常遇到的幾個問題進行解析。1.提取產量低如果您遇到的DNA/RNA產量低于您對樣品的預期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個裂解問題。未裂解是產量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優質乙醇（100%200標準）稀釋緩沖液或添加到結合的步驟。劣質乙醇或舊庫存可能已經吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。2.提取低純度如果提取的DNA

生物實驗室操作技術規范2023/02/06

病原微生物實驗操作規范病原微生物接種的操作規范：做到以下4點能較大限度地減少接種時氣溶膠的產生。1.打開菌種管時，將安瓿管頸部燒熱，用冷的濕棉球使之突然破裂，才可以大大減小溶膠的產生。2.劃板時，瓊脂平板要選用表面光滑的；接種環應用彈性小的金屬絲制作，絲桿要短，環不宜過大，劃板動作要輕。3.接完種后，蘸有菌液的接種環應在含有消毒液的毛巾上吸干后再放到火焰上灼燒到紅。4.混勻微生物懸液的時候，旋轉式搖動，不能左右搖動；搖動時動作輕柔不要使懸液弄濕試管塞。生物樣本移液操作規范生物樣品的移液操作規范：

生命科學研究中常用的幾種實驗方法2023/02/06

生命科學研究時生物學的分支，下面介紹幾個關于生命科學常用的幾種實驗方法：一、BCA法測蛋白質濃度實驗原理：BCA(bicinchoninicacid，二辛可酸)法測定蛋白質即在堿性條件下蛋白質與Cu2+絡合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應使其由原來的蘋果綠形成穩定的紫藍色復合物，在562nm有強烈的光吸收，且吸光值和蛋白質濃度在廣泛范圍內有良好的線性關系，因此可用于蛋白質濃度測定。二、免疫組化原理:免疫組織化學，即免疫組化，是應用免疫學基本原理一-抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性

CCK-8法進行細胞毒性檢測的方法2023/02/03

CCK-8法進行細胞毒性檢測的方法CCK-8法是細胞活力和細胞毒性檢測常用的一種檢測方法，其具體操作方法如下：1.制備細胞懸液：選取生長狀態良好的對數生長期細胞制作細胞懸液，并計數。2.在96孔板中接種細胞懸液(100μL/孔)。3.將培養板置于培養箱中預培養（37℃，5%CO2）12-24小時，使細胞達到指數期（培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而異）。4.吸出各孔培養基，向培養板加入10μL不同濃度的待測藥物進行干預。（實驗組加入含不同濃度藥物的培養基，空白組加入不含藥物培養基

實時熒光定量 PCR技術2023/02/03

實時熒光定量PCR，簡稱RT-QPCR,屬于Q-PCR的一種，目前該技術已得到廣泛應用，如：擴增特異性分析、基因定量分析、基因分型、SNP分析等。熒光定量PCR常用的方法是DNA結合染料SYBRGreenⅠ的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法。SYBRGreenI是一種結合于所有dsDNA雙螺旋小溝區域的具有綠色激發波長的熒光染料，可與所有的各種序列的雙鏈DNA分子結合。在游離狀態下，SYBRGreenI發出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結合，嵌入至dsDNA，熒光大大增強。因此，S

如何選擇合適的細胞凋亡試劑盒2023/02/03

細胞調亡是細胞主動死亡的過程，并出現一系列特征變化。包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成，以及DNA特征性片段化、新的基因表達和特定的生物大分子合成等。流式細胞儀可以對不同細胞凋亡的過程進行定性和定量檢測，通過檢測細胞膜完整性來反應細胞凋亡是常用的流式檢測細胞凋亡常用方法之一。其原理是：①用AnnexinV檢測早期凋亡細胞：AnnexinV可以結合細胞膜上的磷酯酰絲氨酸，磷酯酰絲氨酸位于正常細胞膜內側，不會被檢測到，凋亡時外翻到細胞膜外表面，可以被檢測到。②用PI或者7AAD檢測晚期凋亡細胞：早期凋

CCK-8細胞活性檢測實驗步驟2023/02/03

CCK-8細胞活性檢測實驗步驟CCK-8實驗可用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測，或一些藥物誘導的細胞生長抑制檢測。使用酶標儀在450nm波長處測OD值，可間接性反應活細胞的數量。使用CCK-8試劑盒進行細胞活性檢測是一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK-8細胞活性檢測實驗步驟：一、實驗前準備：酒精燈、移液槍、酶標儀（帶有450nm濾光片）、96孔培養板、CO2培養箱、CCK-8、細胞計數板、PBS等。二、繪制曲線1.制備細胞懸液：選取生

CHO細胞外泌體的分離和表征2023/02/03

CHO細胞外泌體的分離和表征CHO細胞是一種廣泛用于生物制藥蛋白質生產的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術從分批培養中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動態光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標記物分析、RNA和脂質分析等。一、細胞培養1.培養基與細胞細胞可使用CHO系中的CHO-S細胞。培養基使用CD-CHO培養基（ThermoFisher）。在培養基中添加8mML-谷氨酰胺利于CH

如何選購合適的PCR耗材2023/02/02

如何選購合適的PCR耗材PCR耗材包括PCR管(EP管）、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質一般為聚丙烯PP材質，具有高品質、高純度、高透明的特點，一般都在潔凈空間生產加工。PCR耗材為什么一般都是PP材質的呢，為什么需要環境潔凈？因為PCR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸，而聚丙烯（PP）材質是生物學惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學耐性，及溫度耐受性（可以121℃高壓滅菌，也可以承受熱循環過程中的溫度變化）。這里強調一下耗材質量（是否干凈）的重要性。PCR耗材

實時定量PCR技術中常見問題匯總2023/02/02

實時定量PCR技術中常見問題匯總實時定量PCR技術（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最后通過特定數學原理對未知模板進行定量分析的方法。它是一項臨床上非常成熟的技術，目前在分子生物學領域，qPCR核酸定量的主要方法。目前仍在全球肆虐的病毒鑒定的“金標準”——核酸檢測就是通過qPCR原理進行的。那么拿到一個樣本，需要經過以下多項操作流程才能定量檢測到它的核酸含量。其中任何一個步驟操作失誤

使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術2023/02/02

使用生物反應器研究乳腺癌亞型細胞外囊泡產生技術使用傳統體外方法生產的EV的深入表征和驗證由于需要大面積的細胞單層和大量的培養基，培養可能具有挑戰性。該實驗方法使用貼壁細胞生物反應器系統以節省空間、資源和時間的方式同時培養多種不同亞型的乳腺癌細胞系，從而能夠持續生產大量用于下游實驗的EV。一、生物反應器接種、適應和維護培養基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養基B：AdvancedDMEM/F-12(Gibco)、2%C

細胞培養常見問題匯總2023/02/02

細胞培養常見問題匯總1冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2細胞冷凍管解凍培養時，是否應馬上去除DMSO？除少數特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞），在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中，待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之