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幾種常用免疫組織化學技術的原理2021/09/07

免疫組化技術的優點1、特異性強免疫學的基本原理決定了抗原與抗體之間的結合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示，如角蛋白(keratin)顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時才會出現交叉反應。2、敏感性高在應用免疫組化的起始階段，由于技術上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術，那時的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現在由于ABC法或SP法的出現，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結合，這樣高敏感性的抗體抗原反應

免疫熒光試劑盒檢測貼壁細胞與懸浮細胞操作指南2021/09/02

細胞，生物學名詞。構成生物體的基本單位。體形極微，在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣。主要由細胞核與細胞質構成，表面有薄膜。動植物細胞結構大致相同。植物細胞質膜外有細胞壁，細胞壁中常有質體，動物細胞質中常有中心體，而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養和繁殖等機能。貼壁細胞：1.取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用細胞培養級PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內，種入細胞培養過夜，使約為50%-80%滿。2.按照特定

探討有關標準品溶解問題2021/08/25

標準品(Standard)，即標準物品，是中藥標準對照品研究中心代理的作為一種衡量標準;用做藥物方面，則為含量測定中的標準含量。標準品包括化學計量標準品、冶金標準品和藥檢標準品。標準品溶解度溶解度：是指一定溫度下，溶解于一定體積的溶劑中的溶質的質量。通常認為溶解度良好或者溶解充分，是指溶液澄清無肉眼可見的不溶物質。影響溶解度的因素主要有3點：1、溶質（即所選標準物質）對于選定的標準品，溶質基本就是確定的（如果是混標的話，可能要考慮不同組分之間的干擾問題）。2、溶劑在選擇溶劑時要注意溶劑對于標準物

標記基因和報告基因分辨指南2021/08/19

一、標記基因和報告基因的概念標記基因(markergene)，是一種已知功能或已知序列的基因，能夠起著特異性標記的作用。標記基因是選擇標記基因的簡稱，是指其編碼產物能夠使轉化的細胞、組織具有對抗生素等的抗性，或者使轉化細胞、組織具有代謝的*性。在培養基中加入抗生素等選擇試劑的條件下，非轉化的細胞死亡或生長受到抑制，而轉化的細胞能夠繼續存活，從而將轉化的細胞、組織從大量的細胞或組織中篩選出來的一類基因。在基因工程意義上來說，它是重組DNA載體的重要標記，通常用來檢驗轉化成功與否；在基因定位意義上來

Elisa常見樣本處理方法2021/08/11

Elisa是一種快速、靈敏、準確可靠的定量分析方法。樣本的處理對于Elisa實驗的成功有舉足輕重的作用。利用ELISA進行檢測的樣本類型包括：血液（血清、血漿），組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清，皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、陰道分泌物等。下面我們就常見的樣本處理方法：血液采取后應盡快進行處理，使血清（漿）從與血細胞接觸的全血中分離出來。Q:血清與血漿的區別?A:血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿，故血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均等同于血清。

標準物質特性和基本要求2021/08/03

標準物質(RM)referencematerial(RM):是一種已經確定了具有一個或多個足夠均勻的特性值的物質或材料，作為分析測量行業中的"量具"，在校準測量儀器和裝置、評價測量分析方法、測量物質或材料特性值和考核分析人員的操作技術水平，以及在過程中產品的質量控制等領域起著*的作用。從定義可以看出標準物質具有三個顯著特點:(1)具有特性量值的準確性、均勻性、穩定性;(2)量值具有傳遞性;(3)實物形式的計量標準。準確性、均勻性和穩定性是標準物質量值的特性和基本要求：(1)準確性通常標準物質證書

八種抗體知識課堂2021/07/28

1、流式抗體流式抗體是經過流式實驗驗證的，一般是針對單一種屬的直接帶熒光標記的單克隆抗體，檢測的是單細胞懸液，結果通過流式細胞儀分析。2、免疫熒光抗體免疫熒光抗體是經過免疫熒光實驗驗證的單克隆或者多克隆抗體，抗體通常情況下一般不帶標記，通過FITC、CY3等熒光標記二抗顯色，結果通過熒光顯微鏡觀察。3、免疫組化抗體免疫組化抗體是經過免疫組化實驗驗證的單克隆或者多克隆抗體，抗體通常情況下一般不帶標記，通過酶標二抗催化底物顯色，結果通過普通光學顯微鏡觀察。4、熒光標記抗體熒光標記抗體一般指的是帶FI

培養基制備的操作方法2021/07/21

培養基制備的操作方法：1、培養基配方的選定同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標準方法，應嚴格按其規定進行配制外，一般均應盡量收集有關資料，加以比較核對，再依據自己的使用目的，加以選用，記錄其來源。2、培養基的制備記錄每次制備培養基均應有記錄，包括培養基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號，最終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等，記錄應復制一份，原記錄保存備查，復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。3、培養基成分的稱取培養基的各種成分必須精確稱取并要注

免疫熒光技術特點及常見問題分析2021/07/14

免疫熒光技術(Immunofluorescencetechnique)又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內抗原物質的定位。技術特點：該技術的主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是:非特異性染色問題尚未解決，結果判定的客觀性不足，技術程序也還比較復雜。熒光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，

大腸桿菌轉化實驗步驟2021/07/07

實驗材料準備：1.器材旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml微量離心管，雙面微量離心管架，干式恒溫氣浴(或恒溫水浴鍋)，制冰機，恒溫搖床，培養皿(已鋪好固體LB-Amp)，超凈工作臺，酒精燈，玻璃涂棒，恒溫培養箱。2.試劑培養基(不加抗菌素)，LB培養基(加抗菌素)，無菌ddH2O，IPTG，X-gal。3.材料處理無菌ddH2O，1.5ml離心管裝入鋁制飯盒(滅菌)、移液器吸頭裝入相應的吸頭盒(滅菌)，20%IPTG(M/V)，2%X-gal(M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配)。操

避免ELISA實驗失敗可注意以下七點2021/07/01

在實驗前閱讀并充分了解產品說明書，可以一定程度上避免出現意想不到的結果。參考以下提示來避免實驗出現問題。1.檢查試劑盒的保質期，保證所有試劑按說明書上的建議正確保存；2.檢查試劑溶液是否存在不穩定或降解跡象，如沉淀或變色等；3.底物溶液應為無色；4.試劑制備和保存時應使用干凈的一次性塑料吸量管、槍頭和容器。每次加液（樣品、標準品及其他試劑）時，及時更換槍頭，避免交叉污染；5.確保孵育時間和溫度與規定的高度一致；6.盒中試劑不能用其他試劑替代；7.建議樣本和標準品都做復孔，以提高實驗結果的準確性。

菌種的復蘇與保存2021/06/23

菌種的復蘇與保存應在超凈工作臺或生物安全柜內進行。一、菌種的復蘇把凍干菌種管、滅菌1mL滴管、雙碟、鑷子、營養肉湯培養基、營養瓊脂斜面數支，移入超凈工作臺或生物安全柜。先用砂輪將凍干菌種安瓶頸部挫出刻痕，再將凍干菌種管外壁用dian酒擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦凈，放在滅菌雙碟內，待干。點燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上，燒灼紅熱，用滅菌滴管吸取營養肉湯培養基，滴在灼熱的菌種管封口一端，使驟冷而炸裂。取滅菌鑷子，在火焰旁，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內，另取1支滅菌滴管，在火焰旁吸取營

如何區別標準滴定液和標準溶液2021/06/17

一般來說標準溶液與標準滴定溶液并不嚴格區分的，兩者都是已知準確濃度的溶液，只要是已知準確濃度的溶液都可以稱標準溶液，它包括了標準滴定溶液。標準滴定溶液是指已知準確濃度的用于滴定分析的溶液，標準滴定度是指每1mL某摩爾濃度的滴定液（標準溶液）所相當的被測藥物的質量（g/mL）。計算公式:滴定度TB/A每毫升標準溶液相當于被測物質的質量單位是g/ml或mg/mlTB/A=mA/VB（B指標液，A指被測物）物質的量濃度與滴定度之間的換算B的濃度=b/a乘以T再乘以1000再除以A的摩爾質量（a，b是反

ELISA實驗過程中的常見問題解答2021/06/09

科研ELISA實驗中會遇到很多問題，不是這有點小問題，就是那有點小問題。以下七點是我們在多年的實驗過程中遇到問題的總結：1、標曲不顯色或顯色很弱，樣本顯色溶解標準品以及倍比稀釋時，未渦旋震蕩或不夠充分。標準品溶解、倍比稀釋時均需要渦旋震蕩以保證充分混勻。單純依靠移液器反復吹打，效率較低、效果也不一定最佳。2、標曲和樣本均不顯色在孵育階段靜置在桌面上，這樣非常不利于抗原抗體之間的充分接觸，導致顯色偏弱，推薦孵育階段，使用ELISA專用的微孔板振蕩器，調至合適的頻率，使抗原抗體充分接觸，保證結合效果

ELISA實驗中造成假陽性的主要四點錯誤操作2021/05/26

ELISA實驗中造成假陽性的主要四點錯誤操作：1、加樣對于間接ELISA標本一般都要進行稀釋，如果加樣不準就會造成誤差，尤其當稀釋倍數大時，很小的誤差，會導致較大的相對誤差，使陰性（或弱陽性）標本呈陽性（或陰性）。加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。目前，大部分血站都已使用全自動酶免加樣系統處理標本，可較好地避免以上誤差。2、洗滌在ELISA中正確的洗滌是保證得到可重復結果的關健一步，應引起操作者重視。無論是手工操作還是機器操作，得出不正確的

ELISA試劑盒實驗前準備工作2021/05/17

為了使終究的ELISA試劑盒實驗效果就要較高的可靠性，應在實驗開端前有必要好的前期準備作業包括對實驗所需的儀器進行質控。使儀器堅持*作業狀況，應建立維護和校對儀器的標準操作程序，zui常見需求操控的儀器包括：移液器（加樣槍）、溫箱、洗板機和酶標儀。具體質控操作請參閱我司技能整理的如下要求：1）洗板機：每個設置洗板后的殘留液有各自的規矩，一般不逾越2μl；人工扣板時，墊紙不濕；守時檢查管孔是否阻塞。2）酶標儀：常常維護其光學部分，防止濾光片霉變，守時檢測校對，使其堅持出色的作業功能。3）移液器：E

其它類ELISA試劑盒操作步驟及優勢2021/04/28

其它類ELISA試劑盒操作步驟：1.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。2.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用3.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。4.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。5、底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。其它類ELISA試劑盒優勢：1、先進的優化方案----重復性高，可靠性強2、規范包被操作----吸附均勻，吸附性好，空白值低，孔底透明度高3、*抗體----高效、靈敏、

其它源細胞培養傳代及凍存方法2021/04/27

其它源細胞培養傳代及凍存：?細胞的復蘇培養:從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,同時不斷搖動使之迅速融化，然后用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內,稍微吹打混勻,去除上清,加入適量培養液,吹打成細胞懸液,以1×105/ml密度接種于25cm2培養瓶內，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養。?細胞傳代:原代培養的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%胰酶消化1～2min，將培養瓶再用手掌輕輕敲打

其它類ELISA試劑盒以下優勢幾點2021/04/22

其它類ELISA試劑盒操作步驟：1.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。2.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用3.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。4.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。5、底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。其它類ELISA試劑盒以下優勢：1、先進的優化方案----重復性高，可靠性強2、規范包被操作----吸附均勻，吸附性好，空白值低，孔底透明度高3、*抗體----高效、靈

ATCC細胞注意事項方法2021/04/21

ATCC細胞注意事項：1、首先肉眼觀察細胞培養基顏色，然后再借助顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照（建議收到時的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張），這樣做可方便后期的對比。2、一定要用75%的酒精消毒（75%的酒精的水要經過殺菌處理）。3、嚴格按照在無菌環境下操作的原則，打開細胞培養瓶。4、將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（要換新的培養基培養細胞）。5、用PBS2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.0