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2015
07-27

免疫熒光組織化學基本原理
免疫熒光組織化學(immunofluorescencehistochemistry)或免疫熒光細胞化學(immunofluorescencecytochemistry)是將熒光作為標記物的免疫組織化學技術。1942年，Coons等報道用異硫氰酸熒光素(FITC)標記抗體，檢查小鼠組織切片中的可溶性肺炎球菌多糖抗原，從此開創了免疫熒光組織化學技術的先河。隨著熒光標記技術和單克隆抗體技術的不斷發展和激光掃描共聚焦顯微鏡的應用，使免疫熒光組織化學的特異性、快速性和在細胞、分子水平定位的敏感性與準確性大
2015
07-24

免疫熒光組織化學雙重染色的應用
由于大腦中膽堿能神經元直接參與人類運動、學習和記憶．它的胚胎發生和發生機制一直是神經科學的熱點，因為這一問題的解決可能會找到治療膽堿能系統退行性疾病的有效途徑，也將闡明神經元如何發生這個神經科學的基本問題。要實現這一目標，首先要確定胚胎發生過程中膽堿能神經元的時空定位、胚胎來源以及如何獲得膽堿能表型的過程。關于膽堿能神經元在端腦的時空定位．20世紀80年代末美國幾個實驗室報道了幾乎一致的研究成果。而對于后兩個問題始終*莫展。有一天，在翻閱文獻時我發現了一個奇怪現象，U.E．Schambra(19
2015
07-22

非放射性標記探針的檢測
雜交體檢測又稱雜交體顯示，是指通過一定方法使雜交反應形成的雜交體(雜交信號)成為在顯微鏡下可識別的產物。對原位雜交反應信號進行顯示的方法因探針標記物不同而異。根據標記物的不同，非放射性標記探針原位雜交信號的顯示方法也不同，如果用熒光素標記探針，雜交信號可直接在熒光顯微鏡下觀察，如果用辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記探針，原位雜交信號可用相應底物的酶促反應來顯示。目前．常用非放射性標記物多為半抗原，以半抗原標記探針的原位雜交信號可通過免疫酶組織化學或親和組織化學技術顯示。如用生物素標記探針進行原位雜
2015
07-20

PNA寡聚體的特性
PNA寡聚體具有*的特性：1．由于PNA的電中性骨架，其分子中不含磷酸基團，因此PNA鏈更容易和帶有負電荷的互補序列的DNA或RNA鏈結合，而且形成的復合物分子較DNA／DNA雙鏈或DNA／RNA雜交鏈更為穩定。2。PNA與核酸雜交不僅具有很高的親和性，還有很高的特異性。PNA對互補DNA的錯配容忍程度比相應的DNA／DNA更低，一個15mer的PNA／DNA分子在其中間段出現一個錯配堿基，其Tm值下降8～20℃，兩個堿基錯配則*不能雜交。3．PNA不被目前已知的任何核酸酶或蛋白酶所降解。如在合
2015
07-17

常用測量參數的基本術語
長度對于形狀不規則的線形組織結構，一般方法很難計算出長度，如組織中的毛細血管和神經纖維，細胞超微結構中的各種膜性結構等，以往常用排列稀疏或密集等詞描述，圖像分析儀則可測出各種圖像周界線的長度。例如：在活檢組織的子宮頸上皮細胞電子顯微鏡照片上，測出一定范圍內的細胞膜長度為8128像素，橋粒長度為1229像素，計算出橋粒長度占細胞膜總長度的15％，用此方法觀察到癌細胞的橋粒值遠小于正常細胞，因此，則可以提出癌細胞轉移的原因之一可能與癌細胞之間的細胞連接減少有關。面積在光鏡或電鏡免疫組織化學標本觀察中
2015
07-15

冰凍切片
?冰凍切片是指將組織在冷凍狀態下直接切片。?在切片前組織不經過任何化學藥品處理或加熱過程。–縮短了制片時間–抗原性不受損失?對穩定性差的抗原，如淋巴細胞表面抗原尤其適合。?組織凍結過程中，細胞內、外的水分會形成冰晶，凍結的速度愈慢，冰晶顆粒愈大，可嚴重影響組織、細胞的形態結構。因此制備凍塊時要求低溫、速凍。1、冰凍組織塊的常用方法?液氮中冰凍：組織投入液氮中(一196?C)中10～20sec；?干冰中加入丙酮(或異戊烷)，液體立即氣化起泡，溫度降至一70?C，將組織投入，若在干冰丙酮中置一盛有異
2015
07-13

激光掃描共聚焦顯微鏡的光信號接收和成像方式
激光掃描共聚焦顯微鏡(laserscanningconfocalmicroscope,LSCM)是80年代發展起來的一項具有劃時代意義的新產品。實現了對細胞內部非侵入式光學斷層掃描成像，從而對被檢物體樣品從停留到表面單層，靜態平面的觀察進行到立體，斷層掃描、動態全面的觀察，在生命科學研究中得到迅速應用。儀器構成(1)計算機系統：控制著機械，光學、聲學系統及各種外圍設備。(2)激光照射系統：氬離子激光器和聲光調節器。光信號接收和成像方式(1)光信號接收生物樣品發出的熒光通常有二種接收方式：①由光電
2015
07-10

免疫學抗體實驗室方法
抗體作為實驗試劑已有很多年了。可以發展專門針對想要抗原的特殊抗體。另外，抗體試劑與抗原相互作用的結合通常具高親和力，這就使得檢測很少量靶抗原成為可能。典型的靶蛋白是：高度純化的蛋白質、糖蛋白、或這些分子復雜異質的混合物（如豚草屬花粉）。由于抗原結合區與效應分子的功能決定區在不同的區域，所以，免疫球蛋白（Igs）在基因和分子水平實際上是組合結構。例如，把編碼某一特定恒定區的基因和許多編碼可變區的基因中的任何一個相連，這一特定恒定區介導補體結合的能力能夠得以維持同時仍能被地定為靶目標。因此，無論是由
2015
07-08

免疫組化非特異性染色的因素
非特異性染色的主要因素組織的非特異性染色的機理很復雜，其產生的原因主要可分為以下幾點：（1）一部分熒光素未與蛋白質結合，形成了聚合物和衍化物，而不能被透析除去。（2）抗體以外的血清蛋白與熒光素結合形成熒光素脲蛋白，可與組織成分結合。（3）除去檢查的抗原以外，組織中還可能存在類屬抗原（如Forssman氏抗原），可與組織中特異性抗原以外之之相應抗體結合。（4）從組織中難于提純抗原性物質，所以制備的免疫血清中往往混雜一些抗其他組織成分的抗體，以致容易混淆。（5）抗體分子上標記的熒光素分子太多，這種過
2015
07-03

單細胞凝膠電泳的實驗原理
實驗原理在細胞核中，DNA是環狀附著在核基質上，細胞裂解過程中，核基質被溶解、抽提，DNA的結構則未發生變化。如果DNA鏈上存在缺口，則使DNA超螺旋變的松弛，DNA環向外展，同時由于暴露了陰電荷，在電場力的作用下，松動的DNA環向陽極遷移，但是由于這種松動的DNA環一端仍附著于核DNA，其遷移距離受到限制，因此尾長并不總是真實反映鏈缺口的多少。實際應當依靠尾長與尾部的熒光強度同時來進行分析。鏡檢和分析：1)在熒光顯微鏡下觀察，綠光激發吸收濾片590nm。必要時照相記錄。2)記數觀察的細胞，記錄
2015
07-01

SP法雙重染色步驟
SP法雙重染色步驟1～6步驟與SABC法相同，但無需使用生物素阻斷劑：7．切片加入A特異性抗體（如兔抗A抗體），4=C孵育后，PBS沖洗3次，每次5分鐘8.滴加生物素化二抗（如抗兔二抗），室溫孵育切片10分鐘，繼而PBS沖洗3次，每次5分鐘；9.滴加鏈霉菌抗生物素蛋白—堿性磷酸酶，室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘10．堿性磷酸酶顯色液（BCIP／NBT）顯色（紫藍色）．PBS沖洗3次，每次5分鐘；11．滴加0．05％鹽酸，室溫10分鐘（可避免已顯色的抗原褪色）；12．滴加抗小鼠二抗同
2015
06-29

種子蛋白質系統分析的實驗步驟
儀器、試劑和材料1．儀器(1）日本MRK公司產VS-KT-P自動定氮儀(2）樣品磨(3）玻璃層析柱2．試劑(1)50％異丙醇（V/V）或70％乙醇(2)3％硼酸(3)0.5mol/LNaCI(4)0.lmol/LNaOH操作步驟1．制樣谷物籽粒風干，用樣品磨粉碎，放干燥器中備用。2．裝柱在玻璃層析柱底部過濾篩板上置一層濾紙。稱取酸洗并經540℃高溫處理的石英砂60g，樣品2g裝入三角瓶中混勻，每個樣品重復3次，設空白對照。另稱取石英砂20g，其中10g置于層析柱底部，將三角瓶中混合物裝入柱內，再
2015
06-26

上皮細胞及腫瘤標記物的意義
細胞組織標記物意義鱗狀細胞癌ZM-0313CK5/6胞漿陽性鱗狀細胞癌、皮膚基底細胞癌、鼻咽和其他部位的“淋巴上皮癌”及子宮頸部的乳頭狀“鱗狀移行”癌均陽性表達，為鱗狀細胞標記的。ZM-0406P63胞核陽性表達于乳腺和其他部位肌上皮細胞、前列腺基底細胞和鱗狀細胞及其來源的腫瘤。腺癌ZM-0315CK8/18胞漿陽性是腺上皮來源腫瘤的標記物的，在鱗狀上皮無交叉反應。甲狀腺癌ZM-0250TTF-1胞核陽性表達于甲狀腺腺上皮、甲狀腺乳頭狀癌、甲狀腺濾泡癌、甲狀腺髓樣癌均陽性表達，注意必須pH8.0
2015
06-24

病理技術測定不過關的原因
醫生與技術的關系：1、很多人會說，技術員工作做的不好，和醫生沒什么關系，其實不然。zui簡單的如取材，如果醫生取材厚薄不均，組織就處理不好，HE切片和免疫組化質量都會有影響。技術員片子做的不好，醫生可以退片，要求重切，這是我們技術員應該做的；但是，如果醫生取材不好，技術員要退組織，大多數醫生是不會同意的。這里就存在一個不合理的現象。還有的醫生提出取材不好，技術員可以自己去修一下，我不同意這樣的做法，一是技術員有可能修去你需要的病變，這個責任誰負，這是一種醫療故是對病人的不負責；二是作為醫生你應該
2015
06-19

尿液蛋白分析和檢測
尿蛋白成份分析對腎病的診斷治療以及愈后觀察都具有重要意義，這些指標包括：（1）尿微量白蛋白檢測：a.腎小球損傷時，尿中白蛋白排出量明顯升高，其升高程度與腎小球損傷的程度相關；b.可對糖尿病性腎病，重金屬及藥物中毒等腎病早期發現、診斷和療效觀察提供參考依據；控制不良的糖尿病，常發生腎臟損害，尿中白蛋白排出量增加是zui早出現的指標之一，還可能通過檢測尿白蛋白濃度對糖尿病性腎病分期及愈后作出判斷。（2）尿中免疫球蛋白濃度測定及尿中游離輕鏈分析。尿中游離輕鏈（本周氏蛋白）的檢測對診斷輕鏈病是*的步驟，
2015
06-17

酶標抗體的保存和稀釋液
結合物的保存酶標抗體中的酶和抗體均為生物活性物質，保存不當，極易失活。高濃度的結合物較為穩定，冰凍干燥后可在普通冰箱中保存一年左右，但凍干過程中引起活力的減低，而且使用時需經復溶，頗為不便。結合物溶液中加入等體積的甘油可在低溫冰箱或普通冰箱的冰格中較長時間保存。早期的ELISA試劑盒中的結合物一般均按以上兩種形式供應，配以稀釋液（見3.2.5）臨用時按標明的稀釋度稀釋成工作液。現在較先進的ELISA試劑盒均已用合適的緩沖液配成工作液，使用時不需再行稀釋，在4-8℃保存期可達6個月。由于蛋白質濃度
2015
06-16

ELISA競爭法
在競爭法ELISA中，陰性孔呈色深于陽性孔。陰性呈色的強度取決于反應中酶結合物的濃度和加入競爭抑制物的量，一般調節陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間，此時反應zui為敏感。競爭法ELISA不易用自視判斷結果，因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩種，即陽性判定值法和抑制率法。a.ELISA陽性判定值法與間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同，但在計算公式中引入陽性對照A值，現舉某種檢測抗HBc的試劑盒為例。試劑盒中的陰性對照
2015
06-15

抗體芯片的特點
抗體芯片特點*整個分析過程可以在一天內完成*適用于包括組織、細胞系、體液在內的多種生物樣品*用熒光分析的方法比較兩個樣品之間378個蛋白質的相對豐度*試劑盒提供完整的樣品抽提制備、標記、孵育所需的Buffer，特別設計的樣品制備的過程能保持樣品的完整性和溶解性，保證制備樣品具有代表性和一致性。*芯片上的抗體分別經過特異性抗原、細胞系和組織的檢測，靈敏度高達pg/ml*芯片上的抗體包含針對信號傳導、癌癥、細胞周期調控、細胞結構、凋亡和神經生物學等廣泛的生物功能的相關蛋白，跨度大、適用范圍廣。*開放
2015
06-12

線粒體前體蛋白信號序列的特點
線粒體前體蛋白信號序列的特點是：①多位于肽鏈的N端，由大約20個氨基酸構成；②沒有帶負電荷的氨基酸，形成一個兩性α螺旋，帶正電荷的氨基酸殘基和不帶電荷的疏水氨基酸殘基分別位于螺旋的兩側，現在認為這個螺旋與轉位因子的識別有關；③對所牽引的蛋白質沒有特異性要求，非線粒體蛋白連接上此類信號序列，也會被轉運到線粒體。此外有些信號序列位于蛋白質內部，完成轉運后不被切除，還有些信號序列位于前體蛋白C端，如線粒體的DNA解旋酶Hmil。線粒體具有四個功能區隔，即外膜、內膜、膜間隙、基質。進入不同部位的蛋白具有
2015
06-11

ELISA成功誘使干細胞變成了精子和卵子
加州斯坦福大學的ELISA科學家將化學藥物和維生素混合，成功誘使干細胞變成了精子和卵子。他們培育出的精子有頭部和短小的尾部，被認為發育成熟，完夠使卵子受精。而卵子培育還處于研究初期，但仍然比其他科學家取得的成果要進步得多。根據世界衛生組織公布的數字，*不孕癥患者人數約為8000萬—1.1億，還有很多育齡夫婦由于癌癥治療而無法生育。的實驗成果會幫助他們成功生育出至少從生物學的角度是他們自己的子女。然而，這同時也引發了巨大的道德和倫理爭論，因為這可能會制作出*的人工嬰兒，眾多男女也會逐漸退出哺育后代

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