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豬超氧化物歧化酶（SOD）elisa試劑盒操作步驟2015/03/27

豬超氧化物歧化酶(SOD)elisa試劑盒操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。20U/mL5號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10U/mL4號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液5U/mL3號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.5U/mL2號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.25U/mL1號標(biāo)準(zhǔn)品150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分

小李教你如何配制及使用HEPES緩沖液2015/03/25

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。HEPES分子量為238.31，分子式:C8H18N2O4S。HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/rna提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對細(xì)胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mm

豚鼠血管緊張素Ⅱ檢測試劑盒操作說明2015/03/25

豚鼠血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)ELISA試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定豚鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管緊張素??（Ang??)含量。豚鼠血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)ELISA試劑盒實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豚鼠血管緊張素??（Ang??)水平。用純化的豚鼠血管緊張素??（Ang??)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管緊張素??（Ang??)，再與HRP標(biāo)記的血管緊張素??（Ang??)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色

小李教你如何用專業(yè)的方法凍存細(xì)胞2015/03/25

我們知道，在細(xì)胞培養(yǎng)檢測實驗在實驗儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細(xì)胞保存這個實驗步驟，將暫時多出來的細(xì)胞冰凍保存，以zui大程度保存細(xì)胞活力。一、細(xì)胞冷凍保存1.材料：生長良好之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO(SigmaD-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene5000-0020)、0.4%(w/v)trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球計數(shù)盤與蓋玻片、等速降溫機(jī)(KRYO10SeriesII)2、冷凍保存方法：(1)

無菌培養(yǎng)植物中的組織2015/03/23

一、目的要求通過實驗掌握植物組織培養(yǎng)中的無菌操作技術(shù)。學(xué)習(xí)培養(yǎng)基的配制及滅菌，掌握植物外植體表面消毒的常規(guī)方法。二、基本原理近年來，植物組織培養(yǎng)作為一種研究技術(shù)已被廣泛。植物組織培養(yǎng)是應(yīng)用無菌操作方法培養(yǎng)植物器官或組織地任何一部分，甚至單個細(xì)胞的觀察。植物組織培養(yǎng)中的無菌技術(shù)主要包括培養(yǎng)基的配制與滅菌。1．MS培養(yǎng)基的配制：對植物外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)時，培養(yǎng)基提供生長所需的營養(yǎng)成分等。不同材料對培養(yǎng)基的要求不同，適當(dāng)?shù)卦O(shè)計和選用培養(yǎng)基，對植物組織培養(yǎng)取得成功是至關(guān)重要的。另外，對組織培養(yǎng)物的脫分化

動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)及hanks液的配制2015/03/23

細(xì)胞生物學(xué)生物大實驗的時候有關(guān)動物細(xì)胞培養(yǎng)的大實驗，在這里詳細(xì)介紹了細(xì)胞培養(yǎng)中各種器皿的清晰和滅菌、培養(yǎng)基的配制、hanks液/d-hanks液等試劑的配制、細(xì)胞的傳代培養(yǎng)及其凍存與復(fù)蘇方法與操作步驟。細(xì)胞培養(yǎng)是用無菌操作的方法將動物體內(nèi)的組織(或器官)取出，模擬動物體內(nèi)的生理條件，在體外進(jìn)行培養(yǎng).使其不斷地生長、繁殖，人們借以觀察細(xì)胞的生長、繁殖、細(xì)胞分化以及細(xì)胞衰老等過程的生命現(xiàn)象。細(xì)胞培養(yǎng)的突出優(yōu)點，一是便于研究各種物理、化學(xué)等外界因素對細(xì)胞生長發(fā)育和分化等的影響;二是細(xì)胞培養(yǎng)便于人們對細(xì)

細(xì)胞培養(yǎng)中PBS緩沖液和Hanks緩沖液2015/03/23

我實驗時經(jīng)常用到pbs緩沖液，但是很多文獻(xiàn)里面也用到了Hanks緩沖液，不知道這兩種緩沖液在細(xì)胞培養(yǎng)方面有什么區(qū)別嗎?也就是說它分別適合于哪些情況?PBS：磷酸緩沖鹽溶液——具有pH緩沖作用的等滲鹽溶液。PBS溶液又稱磷酸鹽緩沖溶液，一般選擇K2HPO4和KH2PO4配制，因為鈉鹽溶解的較慢。根據(jù)不同pH的溶液，稱量不同質(zhì)量的磷酸鹽，也可以用pH計調(diào)溶液的pH。PBS一般用作支持電解質(zhì)。其配置方法如下：采用去離子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液，按以下步驟進(jìn)行：(1)配制

小李解答關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的技術(shù)問題2015/03/23

一、細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)問答1.BHK細(xì)胞就是指BHK21嗎?答：BHK細(xì)胞是指幼年敘利亞地鼠腎細(xì)胞(BabyHamsterSyrianKidney)，1961年建株。原始的細(xì)胞株是成纖維細(xì)胞，貼壁依賴性。1963年獲得單細(xì)胞克隆細(xì)胞。后經(jīng)無數(shù)次傳代后細(xì)胞可懸浮生長，它廣泛用于增殖各種病毒，生產(chǎn)獸用疫苗。zui常用的是BHK21的一個亞克隆細(xì)胞，即克隆13或C13。2.二倍體細(xì)胞有什么特點?答：二倍體細(xì)胞的染色體組型是2n核型;貼壁依賴接觸抑制;一般可傳代50代;無致瘤性。如W1-38：正常胚肺組織人二

ELISA技術(shù)測定單克隆抗體效價方法2015/03/21

一、實驗?zāi)康?.深入了解elisa法測定抗體效價的原理。2.掌握ELISA法測定單克隆抗體效價的方法。二、實驗原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標(biāo)記在抗體/抗原分子上，形成酶標(biāo)抗體/酶標(biāo)抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA法是免疫酶技術(shù)的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應(yīng)板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫

在ELISA實驗技術(shù)中的抗原抗體反應(yīng)2015/03/21

抗體1.抗體的結(jié)構(gòu)抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成。Ig的輕鏈?zhǔn)窍嗤模笑?kappa)和λ(Lambda)兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ(gamma)鏈和μ(mu)鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示

小鼠 IgG1 抗體亞型（IgG1）ELISA試劑盒使用說明2015/03/19

小鼠IgG1抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中IgG1抗體亞型（IgG1）表達(dá)。小鼠IgG1抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中小鼠IgG1抗體亞型（IgG1）表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中IgG1抗體亞型（IgG1）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)

維生素B12（VB12）ELISA試劑盒使用說明2015/03/19

維生素B12(VB12)ELISA試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定食品(牛奶等)相關(guān)樣本中維生素B12（VB12）含量。維生素B12(VB12)ELISA試劑盒實驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中維生素B12（VB12）水平。用純化的維生素B12（VB12）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入維生素B12（VB12），再與HRP標(biāo)記的維生素B12（VB12）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在

關(guān)于Elisa實驗中標(biāo)準(zhǔn)操作方法總結(jié)2015/03/17

elisa實驗方法操作標(biāo)準(zhǔn)，用于ELISA測定的臨床標(biāo)本zui為常用的是血清(漿)，有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標(biāo)本的收集，要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值出現(xiàn)：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放，因此，在測定此類激素時，有必要在

關(guān)于ELISA方法中的雙抗體夾心法2015/03/17

【原理】ELISA雙抗體夾心法(enzymelinkedimmunosorbentassay——sandwichtechnique)的原理是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體，然后和待檢血清中的相應(yīng)抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物，洗滌后再加酶標(biāo)記抗體，與免疫復(fù)合物中抗原結(jié)合形成酶標(biāo)抗體-抗原-固相抗體復(fù)合物，加底物顯色，判斷抗原含量。以檢測HbsAg為例。【材料】酶標(biāo)抗體(HRP-抗HBs-IgG)、抗HBs-IgG、待檢血清包被液pH9.50.05mol/LCB稀釋液pH7.40.02mol/L

關(guān)于ELISA的相關(guān)試劑2015/03/15

在臨床檢驗中一般采用商品試劑盒進(jìn)行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的elisa試劑盒包含以下各組分：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);(5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應(yīng)終止液。1.1免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試

ELISA實驗中血清標(biāo)本的采集、保存及注意事項2015/03/10

大部分elisa檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀

ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見問題以及解決方法2015/03/07

一.ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作要點：的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。（1）.elisa標(biāo)本的采取和保存大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)

ELISA試劑盒包被條件2015/03/07

包被的條件：Ph9.6碳酸鹽緩沖液；pH7.2磷酸鹽緩沖液；Ph7-8Tris-HCl緩沖液；加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置晝夜，37℃中保溫2小時。包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可能有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為10ng/mL-20ug/mL。封閉：在包被后，用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉讓大量無關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用的封閉劑：0.05%-0.5%BSA；10%的小牛血清或1%明膠

豬白細(xì)胞介素6（IL-6）檢測試劑盒注意事項2015/03/04

注意事項1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)

夾心法ELISA檢測白介素8的實驗方法2015/02/27

Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽，對嗜中性粒細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞、嗜鹼性粒細(xì)胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細(xì)胞，是一種重要的炎癥介質(zhì)。在嚴(yán)重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8。此外，近年來的研究表明，IL-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關(guān)。我們采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法ELISA用于檢測IL-8，敏感性可達(dá)156Pg/ml，操作簡單，重復(fù)性良好，可用于IL-8的基礎(chǔ)和臨床研究。一、原理：采用兩株識別不同表位的抗IL-8單克隆抗體，其中一株(4D