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豬超氧化物歧化酶（SOD）elisa試劑盒操作步驟2015/03/27

豬超氧化物歧化酶(SOD)elisa試劑盒操作步驟1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。20U/mL5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液10U/mL4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液5U/mL3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液2.5U/mL2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液1.25U/mL1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液2.加樣：分

小李教你如何配制及使用HEPES緩沖液2015/03/25

在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。HEPES分子量為238.31，分子式:C8H18N2O4S。HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/rna提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。對細胞無毒性作用。它是一種氫離子緩沖劑，能較長時間控制恒定的pH范圍。使用終濃度為10-50mm

豚鼠血管緊張素Ⅱ檢測試劑盒操作說明2015/03/25

豚鼠血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)ELISA試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定豚鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血管緊張素??（Ang??)含量。豚鼠血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)ELISA試劑盒實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豚鼠血管緊張素??（Ang??)水平。用純化的豚鼠血管緊張素??（Ang??)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管緊張素??（Ang??)，再與HRP標記的血管緊張素??（Ang??)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色

小李教你如何用專業(yè)的方法凍存細胞2015/03/25

我們知道，在細胞培養(yǎng)檢測實驗在實驗儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細胞保存這個實驗步驟，將暫時多出來的細胞冰凍保存，以zui大程度保存細胞活力。一、細胞冷凍保存1.材料：生長良好之培養(yǎng)細胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO(SigmaD-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene5000-0020)、0.4%(w/v)trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球計數(shù)盤與蓋玻片、等速降溫機(KRYO10SeriesII)2、冷凍保存方法：(1)

無菌培養(yǎng)植物中的組織2015/03/23

一、目的要求通過實驗掌握植物組織培養(yǎng)中的無菌操作技術(shù)。學習培養(yǎng)基的配制及滅菌，掌握植物外植體表面消毒的常規(guī)方法。二、基本原理近年來，植物組織培養(yǎng)作為一種研究技術(shù)已被廣泛。植物組織培養(yǎng)是應用無菌操作方法培養(yǎng)植物器官或組織地任何一部分，甚至單個細胞的觀察。植物組織培養(yǎng)中的無菌技術(shù)主要包括培養(yǎng)基的配制與滅菌。1．MS培養(yǎng)基的配制：對植物外植體進行離體培養(yǎng)時，培養(yǎng)基提供生長所需的營養(yǎng)成分等。不同材料對培養(yǎng)基的要求不同，適當?shù)卦O計和選用培養(yǎng)基，對植物組織培養(yǎng)取得成功是至關(guān)重要的。另外，對組織培養(yǎng)物的脫分化

動物細胞培養(yǎng)技術(shù)及hanks液的配制2015/03/23

細胞生物學生物大實驗的時候有關(guān)動物細胞培養(yǎng)的大實驗，在這里詳細介紹了細胞培養(yǎng)中各種器皿的清晰和滅菌、培養(yǎng)基的配制、hanks液/d-hanks液等試劑的配制、細胞的傳代培養(yǎng)及其凍存與復蘇方法與操作步驟。細胞培養(yǎng)是用無菌操作的方法將動物體內(nèi)的組織(或器官)取出，模擬動物體內(nèi)的生理條件，在體外進行培養(yǎng).使其不斷地生長、繁殖，人們借以觀察細胞的生長、繁殖、細胞分化以及細胞衰老等過程的生命現(xiàn)象。細胞培養(yǎng)的突出優(yōu)點，一是便于研究各種物理、化學等外界因素對細胞生長發(fā)育和分化等的影響;二是細胞培養(yǎng)便于人們對細

細胞培養(yǎng)中PBS緩沖液和Hanks緩沖液2015/03/23

我實驗時經(jīng)常用到pbs緩沖液，但是很多文獻里面也用到了Hanks緩沖液，不知道這兩種緩沖液在細胞培養(yǎng)方面有什么區(qū)別嗎?也就是說它分別適合于哪些情況?PBS：磷酸緩沖鹽溶液——具有pH緩沖作用的等滲鹽溶液。PBS溶液又稱磷酸鹽緩沖溶液，一般選擇K2HPO4和KH2PO4配制，因為鈉鹽溶解的較慢。根據(jù)不同pH的溶液，稱量不同質(zhì)量的磷酸鹽，也可以用pH計調(diào)溶液的pH。PBS一般用作支持電解質(zhì)。其配置方法如下：采用去離子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液，按以下步驟進行：(1)配制

小李解答關(guān)于細胞培養(yǎng)相關(guān)的技術(shù)問題2015/03/23

一、細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)問答1.BHK細胞就是指BHK21嗎?答：BHK細胞是指幼年敘利亞地鼠腎細胞(BabyHamsterSyrianKidney)，1961年建株。原始的細胞株是成纖維細胞，貼壁依賴性。1963年獲得單細胞克隆細胞。后經(jīng)無數(shù)次傳代后細胞可懸浮生長，它廣泛用于增殖各種病毒，生產(chǎn)獸用疫苗。zui常用的是BHK21的一個亞克隆細胞，即克隆13或C13。2.二倍體細胞有什么特點?答：二倍體細胞的染色體組型是2n核型;貼壁依賴接觸抑制;一般可傳代50代;無致瘤性。如W1-38：正常胚肺組織人二

ELISA技術(shù)測定單克隆抗體效價方法2015/03/21

一、實驗目的1.深入了解elisa法測定抗體效價的原理。2.掌握ELISA法測定單克隆抗體效價的方法。二、實驗原理ELISA是以免疫學反應為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。免疫酶技術(shù)是將酶標記在抗體/抗原分子上，形成酶標抗體/酶標抗原，稱為酶結(jié)合物。該酶結(jié)合物的酶在免疫反應后，作用于底物使之呈色，根據(jù)顏色的有無和深淺，定位或定量抗原/抗體。ELISA法是免疫酶技術(shù)的一種，其特點是利用聚苯乙烯微量反應板(或球)吸附抗原/抗體，使之固相化，免疫

在ELISA實驗技術(shù)中的抗原抗體反應2015/03/21

抗體1.抗體的結(jié)構(gòu)抗體是能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五類，即IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。與免疫測定有關(guān)的Ig主要為IgG和IgM。Ig由兩個輕鏈(L)和兩個重鏈(H)的單體組成。Ig的輕鏈是相同的，有κ(kappa)和λ(Lambda)兩種型別。五類Ig的重鏈結(jié)構(gòu)不同，這決定了它們的抗原性也不同。IgG和IgM的重鏈分別稱為γ(gamma)鏈和μ(mu)鏈。重鏈和輕鏈的N端的氨基酸排列順序因各種抗體而異，稱為可變區(qū)，分別用VH和VL表示

小鼠 IgG1 抗體亞型（IgG1）ELISA試劑盒使用說明2015/03/19

小鼠IgG1抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中IgG1抗體亞型（IgG1）表達。小鼠IgG1抗體亞型(IgG1)ELISA試劑盒實驗原理：本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠IgG1抗體亞型（IgG1）表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中IgG1抗體亞型（IgG1）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)

維生素B12（VB12）ELISA試劑盒使用說明2015/03/19

維生素B12(VB12)ELISA試劑盒使用目的：本試劑盒用于測定食品(牛奶等)相關(guān)樣本中維生素B12（VB12）含量。維生素B12(VB12)ELISA試劑盒實驗原理：本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中維生素B12（VB12）水平。用純化的維生素B12（VB12）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入維生素B12（VB12），再與HRP標記的維生素B12（VB12）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在

關(guān)于Elisa實驗中標準操作方法總結(jié)2015/03/17

elisa實驗方法操作標準，用于ELISA測定的臨床標本zui為常用的是血清(漿)，有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前臨床上使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集，要注意收集時間甚或體位有可能會對測定結(jié)果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4～6點之間，會有一峰值出現(xiàn)：生長激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放，因此，在測定此類激素時，有必要在

關(guān)于ELISA方法中的雙抗體夾心法2015/03/17

【原理】ELISA雙抗體夾心法(enzymelinkedimmunosorbentassay——sandwichtechnique)的原理是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體，然后和待檢血清中的相應抗原結(jié)合形成免疫復合物，洗滌后再加酶標記抗體，與免疫復合物中抗原結(jié)合形成酶標抗體-抗原-固相抗體復合物，加底物顯色，判斷抗原含量。以檢測HbsAg為例。【材料】酶標抗體(HRP-抗HBs-IgG)、抗HBs-IgG、待檢血清包被液pH9.50.05mol/LCB稀釋液pH7.40.02mol/L

關(guān)于ELISA的相關(guān)試劑2015/03/15

在臨床檢驗中一般采用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結(jié)合物和酶的底物等。完整的elisa試劑盒包含以下各組分：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)酶標記的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中);(5)酶聯(lián)物(結(jié)合物)及標本的稀釋液;(6)洗滌液;(7)酶反應終止液。1.1免疫吸附劑已包被抗原或抗體的固相載體在低溫(2~8℃)干燥的條件下一般可保存6個月以上。有些不完整的試

ELISA實驗中血清標本的采集、保存及注意事項2015/03/10

大部分elisa檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡。混濁或有沉淀

ELISA標準操作及技術(shù)服務的常見問題以及解決方法2015/03/07

一.ELISA標準操作要點：的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導率小于1.5μs/cm。（1）.elisa標本的采取和保存大部分ELISA檢測均以血清為標本。血清標本可按常規(guī)方法采集，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標記的ELISA測定中，溶血標本可能會增加非特異性顯色。血清標本宜在新鮮時檢測。如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)

ELISA試劑盒包被條件2015/03/07

包被的條件：Ph9.6碳酸鹽緩沖液；pH7.2磷酸鹽緩沖液；Ph7-8Tris-HCl緩沖液；加入包被液后，在4-8℃冰箱中放置晝夜，37℃中保溫2小時。包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可能有很大的變化，每批材料需通過實驗與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為10ng/mL-20ug/mL。封閉：在包被后，用高濃度的無關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過程。封閉讓大量無關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙，從而排斥ELISA后步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。常用的封閉劑：0.05%-0.5%BSA；10%的小牛血清或1%明膠

豬白細胞介素6（IL-6）檢測試劑盒注意事項2015/03/04

注意事項1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)

夾心法ELISA檢測白介素8的實驗方法2015/02/27

Il-8是一種分子量為8～10kD的多肽，對嗜中性粒細胞，T淋巴細胞、嗜鹼性粒細胞具有趨化作用，并可激活嗜中性粒細胞，是一種重要的炎癥介質(zhì)。在嚴重感染病人的血清中、炎癥局部滲出液中都可檢測到高水平的IL-8。此外，近年來的研究表明，IL-8可能與各種組織缺血后再灌注損傷的發(fā)生有關(guān)。我們采用兩株自制的單克隆抗體建立了夾心法ELISA用于檢測IL-8，敏感性可達156Pg/ml，操作簡單，重復性良好，可用于IL-8的基礎(chǔ)和臨床研究。一、原理：采用兩株識別不同表位的抗IL-8單克隆抗體，其中一株(4D