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細胞培養基的配制的小竅門2015/01/05

一、實驗目的熟練掌握培養基(RPMI1640和DMEM)的配制，了解其他培養基配制方法。二、實驗原理組織培養使用的培養基一般是由合成培養基和小牛血清配制而成。合成培養基有商品出售，它是根據細胞生長的需要按一定配方制成的粉狀物質。其主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機離子和其他輔助物質。它的酸堿度和滲透壓與活體內細胞外液相似。小牛血清含有一定的營養成分，更重要的是它含有細胞生長所必須得生長因子、激素、貼附因子等，這是合成培養基所無法替代的。此外它還能中和有毒物質的毒性。故一般體外培養細胞時要

細胞的細菌、真菌污染及排除的具體方法2015/01/02

細胞的細菌、真菌污染及排除真菌污染是細胞培養過程中zui常見的一種，尤其在梅雨季節進行細胞培養更易污染。污染培養細胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數在培養液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見，較易被發現，短期內培養液多不混濁，倒置顯微鏡下可見于細胞之間縱橫交錯穿行的絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲，并懸浮飄蕩在培養液中。很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形態呈卵形，散在細胞周邊和細胞之間生長。鏡下看時，要將培養瓶用酒精棉球擦干凈，以防止與瓶

細胞系的建立2015/01/02

一、概念1、細胞系(CellLine)：原代培養舞經傳代成功即成細胞系，由原先存在于原代培養物中的細胞世系(LineageofCells)所組成。2、細胞株(CellStrain)：通過選擇法或克隆形成法從原代培養物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物稱為細胞株。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養期間始終存在。如果不能繼續傳代或傳代數有限，稱為有限細胞株(finitecellstrain);如果可以連續傳代，稱為連續細胞株(continuouscellstrain)。對于人類腫瘤細胞，在體外培養

細胞培養需要具備的條件2015/01/02

(1)溫度溫度過低時細胞生長緩慢甚至不生長。利用冷凍保藏細胞可保持細胞的原有分裂分化能力。溫度過高導致細胞死亡。這主要是由酶和蛋白質所需要的zui適溫度決定的。多數生物大分子遇到高溫后容易導致空間結構改變或者喪失(變性)。細胞膜遇到高溫后容易變態。在自然界，既有耐高溫的細胞，也有耐低溫的細胞。在情況下生長的生物對付環境的機制研究在生物進化和農業、環保、發酵工業中意義重大。(2)pH過酸或過堿可導致細胞死亡。這主要與蛋白質的變性和細胞膜的結構受損有關。(3)滲透壓細胞內外可溶于水的物質比例和種類決

BSA等級的劃分及使用說明2014/12/31

一、使用等級劃分牛血清白蛋白等級從低到高：牛血清白蛋白，牛血清白蛋白第五組分，牛血清白蛋白(無必須脂肪酸)，牛血清白蛋白(無蛋白酶)，牛血清白蛋白(細胞培養級)，金標級牛血清白蛋白，交聯牛血清白蛋白。二、各等級BSA說明1、等級zui低的BSA，這個是普通意義上的BSA，只要主要成分是BSA的產品都可以成為牛血清白蛋白，所以他也涵蓋了其他等級的BSA，所以客戶要注意其純度。作用：一般是工業生產用。2、牛血清白蛋白第五組分，英文名稱：BSAV，這個是生物技術級的產品，適用范圍是zui廣的，有些廠家

細胞操作的注意事項2014/12/31

原代動物細胞培養：1、實驗材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存，并盡快進行細胞分離實驗。2、無菌操作。操作時用的培養液，可加平時細胞培養液5倍含量的青鏈霉素。3、用酶法分離細胞時，注意酶液的濃度和控制消化時間。貼塊法分離細胞時，注意動作要輕柔，不要傷到細胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利于細胞游離。4、培養液的選擇。不同的細胞有對培養液中營養的要求不同，根據所分離細胞的特性選擇。傳代細胞培養：1、無菌操作2、控制消化時間3、及時關注細胞生長狀態

PCR技術2014/12/29

PCR是現代分子生物學中的一種基本技術，所以它的任何創新或改進都受到研究人員的極大歡迎。PCR方法，范圍很廣，從基本老式PCR反應有效性和特異性的改進，到技術如數字PCR。1、一種強大的耐熱dna聚合酶鏈置換活性可顯著改善DNA擴增結果誰不喜歡一種多功能的工具呢?當你可以用有些奇怪但很方便、孩子喜歡的叉勺時，為什么還去用勺子和叉子呢?在8月刊的BioTechniques，Ignatov等人描述了DNA聚合酶的叉勺等價物，一種可用于常規PCR反應以及等溫擴增的DNA聚合酶。直到現在，這兩種擴增方法

STAP細胞或為胚胎干細胞2014/12/29

雖然一個長時間運行的干細胞研究慘敗，但日本理化學研究所(RIKEN)另一個調查委員會近日在東京發布了新報告。報告稱，所謂的刺激觸發采集功能(STAP)干細胞以及可能衍生自這些細胞的嵌合體小鼠和畸胎瘤，“都來源于受污染的(胚胎干)細胞培養，這個真相駁斥了兩篇論文的主要結論”。1月29日，這兩篇論文在線發表于《自然》雜志。該委員會斷定，3個假設的STAP干細胞系實際可能是3個預先存在的胚胎干(ES)細胞系。報告總結道：“不可能是被3種不同的ES細胞意外污染，人們懷疑污染是人為造成的。”但該委員會并沒

質粒提取純化試劑盒的使用方法2014/12/29

生物柱離心式泰去內毒素超純質粒小量抽提試劑盒說明書：washA,washB和washC:用前按照試劑瓶上標明的量分別加入分析純異丙純或95%的分析純乙醇，充分混勻，用后蓋緊蓋子。用1mlddH2O(滅菌)*溶解rna酶，將RNA酶放入水中煮，水沸后再煮沸20分鐘，關掉火，緩慢冷至室溫后，將RNA酶取出，全部加入solutionI，充分混勻后，將solutionI放入4℃保存.使用本試劑盒可從1—10ml過液培養菌液中抽提10—40ug超純度質粒(OD260/OD280≈1.8)。所得到質粒dna

ELISA實驗操作中注意事項小結2014/12/25

elisa實驗操作中常見問題分析由于ELISA(酶聯免疫試驗)具有靈敏度較高、特異性好的特點，已廣泛應用于各種傳染性疾病的篩查如肝炎、愛滋、優生優育等。雖然洗板只是ELISA實驗重要環節中的一個，但作為專業的洗板機生產廠家，我們必須對影響ELISA實驗結果各因素有一定的認識。的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。如不注意，就易出現白板、花板、色弱和假陽性等現象。尤其是花板現象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內質控孔結果正常，而標本孔的OD值卻明顯偏高)是各個廠

ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置2014/12/21

elisa實驗中是以抗原和抗體的免疫反應為基礎，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實驗，把各種ELISA配置方法匯總如下：(1)ELISA實驗包被緩沖液(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(2)ELISA實驗洗滌緩沖液(3)ELISA實驗稀釋液;(4)ELISA實驗終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實驗TMB(四甲基聯苯胺)使用液(7)ELISA實驗ABTS使用液(8)ELISC。試劑(1)ELISA實驗包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaHC

ELISA檢測試劑盒的組成和常用ELISA試劑盒2014/12/21

ELISA快速檢測技術越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測中，那么elisa試劑盒的主要組成成份是什么呢？根據ELISA試劑盒的應用范圍，可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢？完整的elisa試劑盒主要的組成成份如下：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)C的抗原或抗體(結合物);(3)酶的底物;(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標準品和控制血清(定量測定中);(5)結合物及標本的稀釋液;(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;

PTEN基因突變與遺傳性癌癥綜合征及其相關疾病的研究進展2014/12/19

PTEN基因是具有雙重特異性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂質磷酸酶活性降調PKB/Akt信號轉導,使細胞周期阻滯在G1期,誘導其凋亡.已證實在人類許多惡性腫瘤中存在體細胞PTEN基因突變,如神經膠質細胞瘤、子宮內膜癌、前列腺癌、腎癌、乳腺癌等.近年來的研究發現,PTEN基因種系突變與人類多種遺傳性癌癥綜合征有關.本文概括介紹了PTEN基因種系突變與人類遺傳性癌癥綜合征及其相關疾病的關系,重點介紹了考登綜合征(Cowdensyndrome,CS)、Bannayan-Riley-Ruvalcabasyn