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上海心語生物科技有限公司
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細(xì)胞培養(yǎng)基的配制的小竅門2015/01/05
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖炀氄莆张囵B(yǎng)基(RPMI1640和DMEM)的配制,了解其他培養(yǎng)基配制方法。二、實(shí)驗(yàn)原理組織培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基一般是由合成培養(yǎng)基和小牛血清配制而成。合成培養(yǎng)基有商品出售,它是根據(jù)細(xì)胞生長的需要按一定配方制成的粉狀物質(zhì)。其主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)離子和其他輔助物質(zhì)。它的酸堿度和滲透壓與活體內(nèi)細(xì)胞外液相似。小牛血清含有一定的營養(yǎng)成分,更重要的是它含有細(xì)胞生長所必須得生長因子、激素、貼附因子等,這是合成培養(yǎng)基所無法替代的。此外它還能中和有毒物質(zhì)的毒性。故一般體外培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)要
細(xì)胞的細(xì)菌、真菌污染及排除的具體方法2015/01/02
細(xì)胞的細(xì)菌、真菌污染及排除真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中zui常見的一種,尤其在梅雨季節(jié)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)更易污染。污染培養(yǎng)細(xì)胞的多為煙曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。霉菌污染后多數(shù)在培養(yǎng)液中形成白色或淺黃色漂浮物。一般肉眼可見,較易被發(fā)現(xiàn),短期內(nèi)培養(yǎng)液多不混濁,倒置顯微鏡下可見于細(xì)胞之間縱橫交錯(cuò)穿行的絲狀、管狀、及樹枝狀菌絲,并懸浮飄蕩在培養(yǎng)液中。很多菌絲在高倍鏡可見到有鏈狀排列的菌珠;念珠菌或酵母菌形態(tài)呈卵形,散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間生長。鏡下看時(shí),要將培養(yǎng)瓶用酒精棉球擦干凈,以防止與瓶
細(xì)胞系的建立2015/01/02
一、概念1、細(xì)胞系(CellLine):原代培養(yǎng)舞經(jīng)傳代成功即成細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系(LineageofCells)所組成。2、細(xì)胞株(CellStrain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物稱為細(xì)胞株。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限,稱為有限細(xì)胞株(finitecellstrain);如果可以連續(xù)傳代,稱為連續(xù)細(xì)胞株(continuouscellstrain)。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞,在體外培養(yǎng)
細(xì)胞培養(yǎng)需要具備的條件2015/01/02
(1)溫度溫度過低時(shí)細(xì)胞生長緩慢甚至不生長。利用冷凍保藏細(xì)胞可保持細(xì)胞的原有分裂分化能力。溫度過高導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要是由酶和蛋白質(zhì)所需要的zui適溫度決定的。多數(shù)生物大分子遇到高溫后容易導(dǎo)致空間結(jié)構(gòu)改變或者喪失(變性)。細(xì)胞膜遇到高溫后容易變態(tài)。在自然界,既有耐高溫的細(xì)胞,也有耐低溫的細(xì)胞。在情況下生長的生物對(duì)付環(huán)境的機(jī)制研究在生物進(jìn)化和農(nóng)業(yè)、環(huán)保、發(fā)酵工業(yè)中意義重大。(2)pH過酸或過堿可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。這主要與蛋白質(zhì)的變性和細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)受損有關(guān)。(3)滲透壓細(xì)胞內(nèi)外可溶于水的物質(zhì)比例和種類決
BSA等級(jí)的劃分及使用說明2014/12/31
一、使用等級(jí)劃分牛血清白蛋白等級(jí)從低到高:牛血清白蛋白,牛血清白蛋白第五組分,牛血清白蛋白(無必須脂肪酸),牛血清白蛋白(無蛋白酶),牛血清白蛋白(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)),金標(biāo)級(jí)牛血清白蛋白,交聯(lián)牛血清白蛋白。二、各等級(jí)BSA說明1、等級(jí)zui低的BSA,這個(gè)是普通意義上的BSA,只要主要成分是BSA的產(chǎn)品都可以成為牛血清白蛋白,所以他也涵蓋了其他等級(jí)的BSA,所以客戶要注意其純度。作用:一般是工業(yè)生產(chǎn)用。2、牛血清白蛋白第五組分,英文名稱:BSAV,這個(gè)是生物技術(shù)級(jí)的產(chǎn)品,適用范圍是zui廣的,有些廠家
細(xì)胞操作的注意事項(xiàng)2014/12/31
原代動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng):1、實(shí)驗(yàn)材料要新鮮,從活體分離材料后要低溫保存,并盡快進(jìn)行細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)。2、無菌操作。操作時(shí)用的培養(yǎng)液,可加平時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。3、用酶法分離細(xì)胞時(shí),注意酶液的濃度和控制消化時(shí)間。貼塊法分離細(xì)胞時(shí),注意動(dòng)作要輕柔,不要傷到細(xì)胞組織,組織塊邊緣盡量平整有利于細(xì)胞游離。4、培養(yǎng)液的選擇。不同的細(xì)胞有對(duì)培養(yǎng)液中營養(yǎng)的要求不同,根據(jù)所分離細(xì)胞的特性選擇。傳代細(xì)胞培養(yǎng):1、無菌操作2、控制消化時(shí)間3、及時(shí)關(guān)注細(xì)胞生長狀態(tài)
PCR技術(shù)2014/12/29
PCR是現(xiàn)代分子生物學(xué)中的一種基本技術(shù),所以它的任何創(chuàng)新或改進(jìn)都受到研究人員的極大歡迎。PCR方法,范圍很廣,從基本老式PCR反應(yīng)有效性和特異性的改進(jìn),到技術(shù)如數(shù)字PCR。1、一種強(qiáng)大的耐熱dna聚合酶鏈置換活性可顯著改善DNA擴(kuò)增結(jié)果誰不喜歡一種多功能的工具呢?當(dāng)你可以用有些奇怪但很方便、孩子喜歡的叉勺時(shí),為什么還去用勺子和叉子呢?在8月刊的BioTechniques,Ignatov等人描述了DNA聚合酶的叉勺等價(jià)物,一種可用于常規(guī)PCR反應(yīng)以及等溫?cái)U(kuò)增的DNA聚合酶。直到現(xiàn)在,這兩種擴(kuò)增方法
STAP細(xì)胞或?yàn)榕咛ジ杉?xì)胞2014/12/29
雖然一個(gè)長時(shí)間運(yùn)行的干細(xì)胞研究慘敗,但日本理化學(xué)研究所(RIKEN)另一個(gè)調(diào)查委員會(huì)近日在東京發(fā)布了新報(bào)告。報(bào)告稱,所謂的刺激觸發(fā)采集功能(STAP)干細(xì)胞以及可能衍生自這些細(xì)胞的嵌合體小鼠和畸胎瘤,“都來源于受污染的(胚胎干)細(xì)胞培養(yǎng),這個(gè)真相駁斥了兩篇論文的主要結(jié)論”。1月29日,這兩篇論文在線發(fā)表于《自然》雜志。該委員會(huì)斷定,3個(gè)假設(shè)的STAP干細(xì)胞系實(shí)際可能是3個(gè)預(yù)先存在的胚胎干(ES)細(xì)胞系。報(bào)告總結(jié)道:“不可能是被3種不同的ES細(xì)胞意外污染,人們懷疑污染是人為造成的。”但該委員會(huì)并沒
質(zhì)粒提取純化試劑盒的使用方法2014/12/29
生物柱離心式泰去內(nèi)毒素超純質(zhì)粒小量抽提試劑盒說明書:washA,washB和washC:用前按照試劑瓶上標(biāo)明的量分別加入分析純異丙純或95%的分析純乙醇,充分混勻,用后蓋緊蓋子。用1mlddH2O(滅菌)*溶解rna酶,將RNA酶放入水中煮,水沸后再煮沸20分鐘,關(guān)掉火,緩慢冷至室溫后,將RNA酶取出,全部加入solutionI,充分混勻后,將solutionI放入4℃保存.使用本試劑盒可從1—10ml過液培養(yǎng)菌液中抽提10—40ug超純度質(zhì)粒(OD260/OD280≈1.8)。所得到質(zhì)粒dna
ELISA實(shí)驗(yàn)操作中注意事項(xiàng)小結(jié)2014/12/25
elisa實(shí)驗(yàn)操作中常見問題分析由于ELISA(酶聯(lián)免疫試驗(yàn))具有靈敏度較高、特異性好的特點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于各種傳染性疾病的篩查如肝炎、愛滋、優(yōu)生優(yōu)育等。雖然洗板只是ELISA實(shí)驗(yàn)重要環(huán)節(jié)中的一個(gè),但作為專業(yè)的洗板機(jī)生產(chǎn)廠家,我們必須對(duì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果各因素有一定的認(rèn)識(shí)。的試劑,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。如不注意,就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽性對(duì)照以及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常,而標(biāo)本孔的OD值卻明顯偏高)是各個(gè)廠
ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置2014/12/21
elisa實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn),把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?1)ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(2)ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(2)ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(3)ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液;(4)ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7)ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液(8)ELISC。試劑(1)ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液):NaHC
ELISA檢測試劑盒的組成和常用ELISA試劑盒2014/12/21
ELISA快速檢測技術(shù)越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測中,那么elisa試劑盒的主要組成成份是什么呢?根據(jù)ELISA試劑盒的應(yīng)用范圍,可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢?完整的elisa試劑盒主要的組成成份如下:(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);(2)C的抗原或抗體(結(jié)合物);(3)酶的底物;(4)陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中);(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;(6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;
PTEN基因突變與遺傳性癌癥綜合征及其相關(guān)疾病的研究進(jìn)展2014/12/19
PTEN基因是具有雙重特異性磷酸酶功能的抑癌基因,其脂質(zhì)磷酸酶活性降調(diào)PKB/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),使細(xì)胞周期阻滯在G1期,誘導(dǎo)其凋亡.已證實(shí)在人類許多惡性腫瘤中存在體細(xì)胞PTEN基因突變,如神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、腎癌、乳腺癌等.近年來的研究發(fā)現(xiàn),PTEN基因種系突變與人類多種遺傳性癌癥綜合征有關(guān).本文概括介紹了PTEN基因種系突變與人類遺傳性癌癥綜合征及其相關(guān)疾病的關(guān)系,重點(diǎn)介紹了考登綜合征(Cowdensyndrome,CS)、Bannayan-Riley-Ruvalcabasyn
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