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ELISA 常見問題2012/07/19

ELISA常見問題ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在檢測過程中除正常反應外，有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：①標本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1．樣品稀釋酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應，如果血清不稀釋，不可避免會產生很強的非特異性反應，出現假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規定將血清稀釋至適當的倍數，以

膠體金技術2012/07/19

膠體金技術膠體金技術是七十年代推出的一門檢測技術，廣泛應用于生物學和醫學等領域，目前已成為一種常用的檢測技術。膠體金技術是以微孔膜作為固相，固相膜有很多孔，像濾紙一樣，常用的固相膜為硝酸纖維素膜，液體可以穿過流出，也可以通過毛細管作用在膜上向前移動。利用這兩種性能建立了兩種不同類型的快速檢測方法，前者叫免疫滲濾試驗，后者叫免疫層析試驗，兩者統稱為“金標”。膠體金也稱金溶膠，是由金鹽被還原成原子金后形成的金顆粒懸液。膠體金具有膠體性質、呈色性及光吸收性。因此可通過肉眼觀察結果，是zui簡單、方便的

酶標記抗體工作濃度的選擇2012/04/09

酶標記抗體工作濃度的選擇在免疫酶技術中，首先要確定的變異因素就是酶標記物的工作濃度。因為酶標記物濃度的很小變化，便可導致試驗結果產生很大的波動。另外，由于濃度過高，可使非特異性反應增加，而濃度過低又可影響測定的敏感性。因此，正式試驗前必須準確滴定其工作濃度。（一）酶標記抗體的滴定方法：將抗原（或抗體）物理吸附于固相載體上，然后將經過一系列稀釋的酶標抗體（或抗Ig抗體）與吸附在載體上的抗原（或抗體）起反應，以酶與底物的顯色反應程度來確定酶標記抗體的效價，或稱工作濃度。（二）步驟：先將抗原（或抗體）

HRP標記抗體之簡易過碘酸鈉法2012/04/09

HRP標記抗體之簡易過碘酸鈉法本法是以NaIO4先將HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再與Ig上的氨基相結合，所獲酶標記抗體的產率高，將近70%的HRP和Ig結合，99%的Ig與酶結合，酶與Ig的活性無重大損失，是目前zui常用的方法。1.原理經典的過碘酸鈉法中需采用二硝基氟苯封閉HRP上殘留的α-和ε氨基基以避免酶分子之間的交聯。后來Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP，從而省去了二硝基氟苯封閉HRP步驟。HRP經NaIO4氧化后形成的醛化酶可與抗體分子的氨基相連，形成斯夫氏鹼，

Folin－酚試劑法（又名Lowry）法2011/12/23

Folin－酚試劑法（又名Lowry）法Folin-酚試劑法zui早由Lowry確定了蛋白質濃度測定的基本步驟。以后在生物化學領域得到廣泛的應用。這個測定法的優點是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是費時間較長，要控制操作時間，標準曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質多。Folin-酚試劑法同時也適用于酪氨酸和色氨酸的定量測定。此法可測定范圍是20~250mg，檢測的zui低蛋白量可達5mg。Folin-酚法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，

蛋白質的定量測定實驗2011/12/23

蛋白質的定量測定實驗蛋白質定量是生物化學、食品檢驗和其它生命學科zui常涉及的分析內容，是臨床診斷的重要指標，也是許多生物制品、藥物、食品質量檢測的重要指標。生化實驗中，在對生化藥品，特別是蛋白質、酶、某些多肽或蛋白質激素的分離純化時，對蛋白質進行準確可靠的定量分析是非常重要的。然而蛋白質的種類很多，結構不均一，分子量又相差很大，功能各異，這給建立一個理想而又通用的蛋白質定量分析的方法帶來了很大的困難。目前測定蛋白質含量的方法有很多種，不同的方法各有其特點。紫外分光光度法是根據蛋白質的物理性質來

凱氏定氮法2011/12/23

凱氏定氮法凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽，然后在堿性條件下將銨鹽轉化為氨，隨水蒸氣餾出并為過量的酸液吸收，再以標準堿滴定，就可計算出樣品中的氮量。由于蛋白質含氮量比較恒定，可由其氮量計算蛋白質含量，故此法是經典的蛋白質定量方法。凱氏定氮法是基于待測天然含氮有機物與濃硫酸共熱時，會被氧化成為二氧化碳和水，然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定，根據酸的消耗量乘以換算系數，即為蛋白質含量。1.有機

血漿置換簡介2011/12/23

血漿置換簡介血漿置換是血液凈化療法之一。其方法是用血細胞分離機將全血分離成血漿和細胞成分（紅細胞、白細胞和血小板），然后根據臨床需要，將患者全血漿或血漿的亞成分或某種細胞成分去除，并用健康人血漿或血漿代用品予以替補，以達到治療疾病的目的。血漿置換液一般是正常人的血漿。如果血漿來源緊張，特別是遇突發大規模公共醫療事件，需要大量血漿時，可以部分使用706代血漿，或者用生理鹽水加白蛋白代替血漿，以緩解血漿來源的不足。血漿置換的量一般根據病情而定，通常以置換2000ml為宜。若患者病情嚴重，可反復做2～

血漿置換的作用機制及方法2011/12/23

血漿置換的作用機制及方法1、血漿置換的作用機制血漿置換可以有效地清除疾病相關性因子，如抗體、免疫復合物、同種異體抗原或改變抗原、抗體之間量的比例。這也是PE治療的主要機制。PE對致病因子的清除要較口服或靜脈內使用免疫抑制劑迅速而有效。血漿置換還有非特異性的治療作用，可降低血漿中炎性介質如補體產物、纖維蛋白原的濃度，改善相關癥狀。同時血漿置換還可以增加吞噬細胞的吞噬功能和網狀內皮系統清除功能。此外機體還可從置換液中補充機體所需物質。應該說明的是，血漿置換治療不屬于病因治療，因而不影響疾病的基本病理

HRP標記抗體之戊二醛二步法2011/12/23

HRP標記抗體之戊二醛二步法1.原理戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。2.試劑及器材（1）0.1MPH6.8磷酸緩沖鹽水（PBS）：取0.2MNa2HPO449ml,0.2MNaH2PO451ml，NaCl1.8克，加蒸餾水至200ml。（2）1.25%戊二醛液：取25%戊二醛50ml與PH6.8的PBS1ml混合。（3）1MPH9.5碳酸鹽緩沖液：取1M碳酸鈉3ml與1M碳酸氫鈉7ml混合。（4）0.2M賴氨酸溶液：稱賴氨

抗體的親和層析法純化技術2011/12/23

抗體的親和層析法純化技術實驗原理】如圖所示，親和層析的高度選擇性使得從某一初始材料中純化，富集某一含量較低的目的蛋白成為可能，因此親和層析是蛋白質分離純化過程中zui有效的方法之一。另外，如果配基與蛋白質的親和能力很強，也可同時進行樣品的濃縮。雖然多數情況下不需要將抗體與其他血清蛋白分開，但如果一旦需要，蛋白A親和層析是一種非常有效的分離方法。蛋白A是從Staphylococcusaureus中獲得，可與抗體重鏈的Fc片段相結合。現在已知蛋白A可與多種哺乳動物的IgG相結合也可與某些IgM和Ig

ABC-ELISA材料和方法2011/09/27

BAS酶聯免疫吸附試驗材料和方法（以篩選抗空腸彎曲菌共同抗原的單克隆抗體為例）1材料（1）空腸彎曲菌共同抗原提取物，自制。（2）生物素化羊抗鼠IgG（BSAMG），衛生部上海生物制品所。（3）ABC試劑，衛生部上海生物制品所。如ABC試劑需自己配制，可按說明要求，將親和素與酶標生物素按一定比例混合，置37℃孵育30min后使用。（4）被檢雜交瘤培養物上清液。（5）其他試劑及器材同常規ELISA法。2方法ABCELISA間接法程序（1）用包被液對空腸彎曲菌共同抗原提取物作適當稀釋（1∶16），加入

J.Immuno.：細菌提高免疫系統的機制2010/09/15

科學家很早就知道某些特定類型的細菌能夠提高免疫系統。現在芝加哥洛約拉大學的研究人員發現了細菌執行這項重要任務的機制。文章的*作者KatherineL.Knight博士和她的同事在6月15日的JournalofImmunology雜志上發表了這項研究結果。KatherineL.Knight是洛約拉大學斯特里奇醫學院微生物和免疫學系主任。人體中含有大量的細菌，在我們每個人體內，細菌細胞的數量大約是人體細胞的10倍。細菌可以生活在人體皮膚，呼吸道，消化道等地方。單獨消化道就大概是500至1000種細菌

BMC Immunology ：接種天花疫苗或可預防艾滋病2010/09/15

隨著天花在消失，天花疫苗已經在停止接種，但美國科學家研究發現，接種天花疫苗可能有效預防艾滋病傳播。如果這一研究成果得到證實，將使艾滋病防治工作進入一個新的階段。這一研究是由美國加利福尼亞大學洛杉磯分校以及喬治·梅森大學的研究人員共同完成的。研究人員對曾經接種天花疫苗和沒有接種天花疫苗的人進行了分析對比。結果發現，接種天花疫苗的人要比沒有接種天花疫苗的人更能有效抵御艾滋病病毒侵襲，后者感染艾滋病病毒的幾率要比前者高5倍。負責這項研究的喬治·梅森大學科學家雷蒙德·魏因施泰因說，關于目前艾滋病蔓延的解

水母，太陽能的未來？2010/09/15

據《大眾科學》報道，研究人員不再盯著植物作為樣板，轉而將目光投向擁有高超光伏轉化能力的水母，開發出提升收獲太陽能的技術。利用水母身上提取的綠色熒光蛋白（GFP），該小組制作的裝置可用這些“黏黏綠”將紫外光轉化為自由電子。該小組制造的電池由在二氧化硅基底上被一個小縫隔開的兩個簡單的鋁電極組成，GFP置于兩電極中間并起連接作用。當把紫外光放進來的時候，GFP不斷將光子抓走，并產生電子進入電路產生電流。同時，GFP非常廉價，不需要昂貴的添加劑或昂貴的加工，此外，它還能被封裝成獨立的不需要外光源的燃料電

衛生部副部長：中醫針灸已正式申遺2010/09/15

扶陽學派、嶺南羅氏婦科、新安醫學、海派醫學……這些你以前可能從未聽說的中醫學術流派昨日齊聚廣東，在國家中醫藥發展論壇“珠江論壇”上，就中醫藥發展展開“百家爭鳴”。記者從會上獲悉，我國中醫針灸正積極申請世界非物質文化遺產，申遺方案已提交。衛生部副部長、國家中醫藥管理局局長王國強，全國人大外事委員會副主任委員盧鐘鶴，省人大常委會副主任鐘陽勝，副省長雷于藍，省政協副主席、省衛生廳廳長姚志彬等出席會議。衛生部副部長、國家中醫藥管理局局長王國強接受記者采訪時說，衛生部正計劃將“中醫針灸”申請為世界非物質文

粉碎機的分類及應用2010/05/26

粉碎機的分類及應用粉碎機，顧名思義就是利用外來力量，克服物料的內聚力，將大顆粒固體物料變為小顆粒甚至微粉粒的一種機械設備。一、粉碎的目的物料粉碎主要由粉碎機（破碎機和研磨機）來完成，其目的如下：1、均化：隨著粉碎的進行，大顆粒物料破碎成細粉狀態，這樣才能使幾種化學成分不同的固體物料的混合得到良好的均勻效果。2、解離：隨著礦產資源的開發利用，而許多礦石的有用成分同雜質緊密地結合在一起，為使礦石中有效成分解離，只有將其充分粉碎，經過選礦才能將有用成分同雜質分開，并剔除雜質得到較純凈的精礦。3、粒度分

血清的成分與作用2010/05/26

血清的成分與作用離體的血液凝固之后，經血凝塊聚縮釋出的液體，即血清。血清可以抗病毒,增強抵抗力血清屬于生物制劑.小牛血清含在離開母體后自身產生的一些代謝物質，當然也包括一些生長激素，而胎牛血清絕大部分的物質來自于母體.血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點是與血漿zui大的

分子信標的發展2010/05/26

分子信標的發展分子信標是一種設計巧妙的熒光探針。在長度為15-30mer寡核昔酸探針的兩端分別加上5-8mer序列互補的莖桿區。在自由狀態時由于莖桿區互補序列的結合使探針分子形成發夾狀結構，所以又被稱為發夾探針。探針的5'端及3'端分別聯用熒光素分子及碎滅劑分子。為經典的分子信標結構，其中1-氨基蔡-8-叛酸（EDANS）為熒光素，二甲氨基偶氮苯甲酚（DABSYI.）為猝滅劑。自由狀態時，發夾結構的兩個末端靠近，使熒光分子與碎滅分子靠近（約為7-1Onm）。此時發生熒光共振能量轉移，使熒光分子發

細胞培養的污染類型2010/05/26

細胞培養的污染類型污染是細胞培養的大敵。預防和避免污染是細胞培養成功的關鍵之一。一開始就要十分重視，應積極采取措施，防止污染，否則會前功盡棄，不僅浪費時間，而且浪費人力、物力，甚至造成無法彌補的損失。*節污染的類型細胞培養過程中的污染不僅僅指微生物，而且還包括所有混入培養環境中的、對細胞生存有害或造成細胞不純的物質，包括生物和化學物質。一、細菌污染細菌污染是實驗室細胞培養中常見的污染，即使在細胞培養液中加入了抗菌素（一般為預防劑量），也可能因為操作不慎而引起污染。zui常見的有革蘭氏陽性菌，如枯