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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
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ELISA測定操作規(guī)程2012/07/19
（ELISA測定操作規(guī)程（以小鼠TNF-a為例）一、原理與意義通過抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象,對樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性和定量檢測。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,用抗小鼠TNF-a單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的TNF-a與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗小鼠TNF-a抗體,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素（Streptavidin）與生物素結(jié)合,加入酶底物鄰苯二胺（OPD）,出現(xiàn)黃色,加終止液濃硫酸,顏色變深,在492nm處測OD值,TNF-a
ELISA常見問題2012/07/19
ELISA常見問題ELISA操作常見問題ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，在檢測過程中除正常反應(yīng)外，有時常見到一些錯誤的結(jié)果。引起ELISA測定錯誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。1．樣品稀釋酶聯(lián)免疫反應(yīng)是一種敏感性很高的反應(yīng)，如果血清不稀釋，不可避免會產(chǎn)生很強(qiáng)的非特異性反應(yīng)，出現(xiàn)假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規(guī)定將血清稀釋至適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，以
125I標(biāo)記物的純化2012/07/19
125I標(biāo)記物的純化125I標(biāo)記物反應(yīng)后，標(biāo)記物需進(jìn)行分離純化以除去游離125I-和其他雜質(zhì)。純化標(biāo)記物的方法有利用分子篩機(jī)制的凝膠過濾法、利用游離125I-與標(biāo)記物分子極性差異進(jìn)行吸附解離的離子交換層析法、按分子所帶電荷和直徑不同在電場作用下分子遷移速率不同進(jìn)行分離純化的聚丙烯酰胺凝膠電泳法（PAGE）以及液相色譜法（HPLC）。以葡聚糖凝膠（如SephadexG-50）柱層析分離純化125I標(biāo)記物為例：標(biāo)記反應(yīng)混合液經(jīng)柱層析時，需定時或定量逐管收集層析洗脫液，并用丁計(jì)數(shù)儀測定每管的放射性強(qiáng)度
125I標(biāo)記物的鑒定2012/07/19
標(biāo)記物的鑒定1．放射化學(xué)純度是指單位標(biāo)記物中結(jié)合于被標(biāo)記物上的放射性占總放射性的百分率，一般要求大于95％。常用的測定方法是利用三氯醋酸將待測樣品中（預(yù)加白蛋白助沉淀）所有蛋白質(zhì)沉淀，離心后測定沉淀物（標(biāo)記物）的放射性并計(jì)算其占待測樣品總放射性的百分率。該項(xiàng)參數(shù)還是觀察在貯存期內(nèi)標(biāo)記物脫碘程度的重要指標(biāo)。2．免疫活性（immunoreactivity）指制備的標(biāo)記物與抗體結(jié)合的能力。它反映標(biāo)記過程中被標(biāo)記物免疫活性受損情況。測定方法是用少量的標(biāo)記物與過量抗體反應(yīng)，然后測定標(biāo)記物與抗體結(jié)合部分的放
DAB-12012/07/19
DAB染色試劑盒（藍(lán)）使用說明DABKIT（blue）貨號：Kit-DAB-1二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是辣根過氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產(chǎn)品采用特殊配方，靈敏度高，背景低，儲存穩(wěn)定，使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)、斑點(diǎn)印跡和生物芯片等的染色和顯色反應(yīng)。包裝試劑規(guī)格A液2ml（20X）B液2ml（20X）C液2ml（20X）用法使用前計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)需要的量（50-100ul每張切片），按1ml蒸餾水加A液，B液和C液各
DAB-22012/07/19
DAB染色試劑盒（黃）使用說明DABKIT（yellow）貨號：Kit-DAB-2二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是辣根過氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產(chǎn)品采用特殊配方，靈敏度高，背景低，儲存穩(wěn)定，使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)、斑點(diǎn)印跡和生物芯片等的染色和顯色反應(yīng)。包裝試劑規(guī)格A液2ml（20X）B液2ml（20X）C液2ml（20X）用法使用前計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)需要的量（50-100ul每張切片），按1ml蒸餾水加A液，B液和C
DAB KIT2012/07/19
DAB染色試劑盒（藍(lán)）使用說明DABKIT（blue）貨號：Kit-DAB-1二氨基聯(lián)苯胺（DAB）是辣根過氧化物酶zui敏感、zui常用的顯色底物，反應(yīng)產(chǎn)物為不溶于水、二甲苯和醇的棕色沉淀物。本產(chǎn)品采用特殊配方，靈敏度高，背景低，儲存穩(wěn)定，使用方便。適合于蛋白印跡、免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)、斑點(diǎn)印跡和生物芯片等的染色和顯色反應(yīng)。包裝試劑規(guī)格A液2ml（20X）B液2ml（20X）C液2ml（20X）用法使用前計(jì)算本次實(shí)驗(yàn)需要的量（50-100ul每張切片），按1ml蒸餾水加A液，B液和C液各
ELISA 標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見問題分析2012/07/19
一.ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。1.標(biāo)本的采取和保存大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會
ELISA 材料和方法（檢測豬流行性腹瀉病毒抗體）2012/07/19
ELISA材料和方法（檢測豬流行性腹瀉病毒抗體）1材料（1）聚苯乙烯塑料微量組織培養(yǎng)板：4×10孔，上海塑料三廠生產(chǎn)。（2）包被液（pH值96）：NaHCO3293g、Na2CO3195g，蒸餾水加至1000ml，置4℃保存。（3）洗滌液（001mol/L、pH值74PBS）：NaCl80g、KH2PO402g、Na2HPO4?12H2O29g、KCl02g、Tween2005ml，加蒸餾水至1000ml。（4）保溫液：牛血清白蛋白（BSA）01g、005%PBSTween20100ml，4℃保
ELISA 測定操作規(guī)程2012/07/19
（ELISA測定操作規(guī)程（以小鼠TNF-a為例）一、原理與意義通過抗原和抗體在體外特異結(jié)合后出現(xiàn)的各種現(xiàn)象,對樣品中的抗原或抗體進(jìn)行定性和定量檢測。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-ELISA法,用抗小鼠TNF-a單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的TNF-a與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗小鼠TNF-a抗體,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素（Streptavidin）與生物素結(jié)合,加入酶底物鄰苯二胺（OPD）,出現(xiàn)黃色,加終止液濃硫酸,顏色變深,在492nm處測OD值,TNF-a
ELISA中非特異性顯色原因分析2012/07/19
影響ELISA中非特異性顯色的原因很多，如試劑盒特異性、檢驗(yàn)標(biāo)本中含酶標(biāo)記物的干擾物，操作過程中的問題。本文就這一原因作一簡要分析,以便可以通過以上措施把非特異顯色降至zui低限度，從而提高檢測的特異性，并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?！娟P(guān)鍵詞】ELISA非特異性顯色酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）自1971年自問世以來，以其敏感性高，特異性強(qiáng)，操作簡便、安全，而廣泛應(yīng)用于臨床診斷，開創(chuàng)了免疫學(xué)診斷的新紀(jì)元。但同其它免疫診斷方法一樣酶免試劑在它的研究、生產(chǎn)及使用中常常會碰到非特異性問題，本文就在實(shí)驗(yàn)
ELISA原理與分類2012/07/19
ELISA的原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測定傷寒桿菌“O”抗體2012/07/19
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是用酶標(biāo)記的抗體（或SPA）檢測未知抗原或抗體的方法。此法敏感性高，特異性強(qiáng)。常用的是ELISA方法，間接法，雙抗體法和抗原法。本次試驗(yàn)介紹，酶聯(lián)葡萄球菌蛋白A免疫分析法。ELISA法原理如下，見圖91.加抗原使之吸附于固相載體（如塑料反應(yīng)板）2.洗滌加待測血清3.洗滌加酶標(biāo)記SpA4.洗滌加酶的底物。經(jīng)酶的催化產(chǎn)生有色產(chǎn)物。材料：1.聚乙烯塑料反應(yīng)板（PH9.6時可吸附蛋白Ag）2.抗原：傷寒桿菌O901煮沸或超聲波粉碎抗原3.待測血清4.凍干酶聯(lián)葡萄球菌A蛋白（HRD—pro
ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作及技術(shù)服務(wù)的常見問題分析2012/07/19
一.ELISA標(biāo)準(zhǔn)操作要點(diǎn)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的本公司要求使用的純化水電導(dǎo)率小于1.5μs/cm。1.標(biāo)本的采取和保存大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會增加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會
免疫標(biāo)記技術(shù)2012/07/19
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、熟悉酶免疫技術(shù)基本原理和方法、免疫熒光技術(shù)的基本原理。2、了解酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（間接法）的基本過程及其作用。目前應(yīng)用zui多的免疫酶技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)均在載體表面進(jìn)行，從而簡化了分離步驟，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實(shí)驗(yàn)方法包括間接法、夾心法及競爭法。為了檢測抗原可用夾心法。將特異性抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯制成的小管、小盤或小孔）上，然后加被測溶液，倘樣品中有相應(yīng)抗原，則與抗體在載體表面形成
酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）操作要點(diǎn)2012/07/19
標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)
多克隆抗體的免疫電泳技術(shù)2012/07/19
多克隆抗體的免疫電泳技術(shù)實(shí)驗(yàn)原理】免疫電泳又稱為γ球蛋白電泳或免疫球蛋白電泳技術(shù)，這是一種能夠判斷血液中三種免疫球蛋白IgM,IgG,IgA含量水平的實(shí)驗(yàn)方法。在這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)技術(shù)中，首先利用蛋白質(zhì)的分子量和所帶電荷的比值運(yùn)用水平瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)將蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，然后將特異性的抗體引入到與電泳方向平行的凹槽中，在抗原和抗體的擴(kuò)散過程中，抗原和抗體適當(dāng)比例的結(jié)合會導(dǎo)致沉淀的產(chǎn)生。0.85%鹽不僅可以終止擴(kuò)散過程也可用于洗去未結(jié)合的蛋白，抗原和抗體結(jié)合所形成的沉淀線即可以肉眼觀察也可利用染色方法觀察。免
多克隆抗體的概念及制備流程2012/07/19
多克隆抗體的概念及制備流程多克隆抗體科技名詞定義中文名稱：多克隆抗體英文名稱：polyclonalantibody定義1：由多個B細(xì)胞克隆所產(chǎn)生的抗體，可與不同抗原表位結(jié)合且免疫球蛋白類別各異。所屬學(xué)科：免疫學(xué)（一級學(xué)科）；免疫系統(tǒng)（二級學(xué)科）；免疫分子（三級學(xué)科）定義2：對特定抗原所產(chǎn)生的一組免疫球蛋白混合物，每種免疫球蛋白能識別抗原分子上的一個表位。所屬學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級學(xué)科）；總論（二級學(xué)科）定義3：多種抗原表位刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)后，機(jī)體產(chǎn)生的針對不同抗原表位的混合抗體。所屬學(xué)
ELISA 的概念、原理、操作步驟2012/07/19
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。（一）ELISA是酶原理ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、牽9體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多
ELISA 的操作要點(diǎn)2012/07/19
ELISA的操作要點(diǎn)的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。1標(biāo)本的采取和保存可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液、分泌物和排泄物）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作
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