二胺氧化酶（Diamine Oxidase ，DAO ）試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物（腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相關，能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷

程度。

測定原理

DAO催化尸胺產生醛和過氧化氫，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯茴香胺生成氧化型鄰聯茴香胺，在460nm 處有特征吸收峰，通過測定該波長吸光度增加速率，計算 DAO 活性。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 80mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 0.5mL×1 支，4℃保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提取

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1mL提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建

議 500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔 7秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。

測定操作表