丙二醛(malondialdehyde，MDA)含量試劑盒說明書

可見分光光度法

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸，生成過氧化脂質；后者逐漸分解為一系列復雜的化合物，其中包括 MDA。通過檢測 MDA 的水平即可檢測脂質氧化的水平。

測定原理：

MDA 與硫代*酸(thiobarbituric acid，TBA)縮合，生成紅色產物，在 532nm有大吸收峰，進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量；同時測定 600nm 下的吸光度，利用 532nm與 600nm 下的吸光度的差值計算 MDA 的含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配置：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；

注意事項：

臨用前注意試劑一是否*溶解，如未溶解，可以 70℃加熱，并振蕩以促進溶解。

MDA 提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、吸取 0.6mL試劑一于1.5mL 離心管中，再加入0.2mL 樣本, 混勻。

2、95℃水浴中保溫 30min（蓋緊，防止水分散失），置于冰浴中冷卻，10000g，25℃，離心

10min。

3、吸取上清液于1mL玻璃比色皿中，測定532nm和600nm處的吸光度，記為A532 和A600，

ΔA= A532-A600。（蒸餾水調零）