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2020
08-17

凍干保護(hù)劑之脫脂奶粉
脫脂奶粉是一種高分子復(fù)合保護(hù)劑,不論是單獨(dú)使用還是與其他保護(hù)劑混合使用,均有較好的保護(hù)效果。因?yàn)樵诶鋬龈稍飼r(shí),乳清蛋白能在菌體外形成蛋白膜,對(duì)細(xì)胞加以保護(hù),并可固定凍干酶類(lèi),且脫脂奶粉中其它成分也可提高菌體的冷凍干燥存活率,為凍干物提供輕而多孔的結(jié)構(gòu),增強(qiáng)菌粉的復(fù)水性。保護(hù)劑是如何制備的呢？預(yù)先把海藻糖、蔗糖、葡萄糖、麥芽糊精、D-山梨醇、甘油、谷氨酸鈉、VC、脫脂奶粉、硫酸錳分別取出一定量溶解于無(wú)菌水中,再置于帶塞玻璃瓶?jī)?nèi)滅菌30min。保護(hù)劑溶液用量為原發(fā)酵液10%。保護(hù)劑的濃度增加，提高了
2020
08-15

凍干保護(hù)劑之抗氧化劑
耐熱凍干保護(hù)劑有免疫活性但無(wú)藥理活性，可在凍干和保存時(shí)維持疫苗的穩(wěn)定性，初次干燥時(shí)在適宜的溫度下疫苗不倒塌，提高產(chǎn)品干燥能力并增大產(chǎn)品批次間的穩(wěn)定性。凍干保護(hù)劑按功能和性質(zhì)分為幾大類(lèi)，如抗氧化劑：一種是抗氧化劑的自身氧化，消耗凍干樣品內(nèi)部和環(huán)境中的氧，使凍干樣品物料不被氧化；另一種使抗氧化劑給出電子或氫離子，阻斷凍干樣品中的氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；還有一種方式是抗氧化劑通過(guò)抑制氧化的活性而防止凍干樣品的氧化變質(zhì)，如維生素E、維生素C、硫代硫酸鈉、硫脲。保護(hù)劑篩選要求:配液后成均勻混懸液或溶液，凍干后形成團(tuán)
2020
08-14

熒光PCR保護(hù)劑之非離子表面活性劑
非離子表面活性劑主要分為聚氧乙烯醚類(lèi)、多元醇酯類(lèi)、酰胺類(lèi)以及嵌段聚醚類(lèi)四種類(lèi)型。非離子表面活性劑具有好的穩(wěn)定性和相溶性,毒性和溶血作用小。不易受電解質(zhì)和溶液的影響,能與大多數(shù)藥物配合等。在藥劑中已作增溶劑、乳化劑、助懸劑、抗氧劑、滲透劑、清潔去污劑、消毒防腐劑等使用。非離子表面活性劑是怎樣應(yīng)用的？一同了解下在微球劑中的應(yīng)用。微球劑是一種將藥物分散或包埋于多聚物中,形成粒徑為微米級(jí)的球狀載體給藥系統(tǒng),這類(lèi)劑型的研究與開(kāi)發(fā),對(duì)于發(fā)展控釋與靶向給藥系統(tǒng)具有重要意義。其組成中的表面活性劑對(duì)水不溶性藥物起
2020
08-13

凍干保護(hù)劑及熒光PCR凍干
干燥蛋白質(zhì)藥物時(shí),保護(hù)劑緊密地包裹相鄰近的蛋白質(zhì)分子,形成一種在結(jié)構(gòu)上與冰相似的碳水化合物玻璃體,由于私度較高,其擴(kuò)散系數(shù)很低,蛋白質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)能力減某一蛋白質(zhì)的保護(hù)作用通常有的使用濃度(或使用量),所以選擇保護(hù)劑時(shí)還要合理選擇使用量。常用的保護(hù)劑種類(lèi)有多輕基化合物、糖、蛋白質(zhì)、聚合物、氨基酸、鹽、胺、表面活性劑等。多輕基化合物用作蛋白質(zhì)的抗凍劑由來(lái)已久,常見(jiàn)的該類(lèi)凍干保護(hù)劑有甘油、甘露醇、山梨醇、肌醇、硫醇、聚乙二醇等。甘油可促進(jìn)凍干處理的過(guò)氧化氫酶復(fù)性,且隨著甘油濃度上升至0.8%時(shí),過(guò)氧化氫
2020
08-12

鹽類(lèi)保護(hù)劑及藥品凍干
凍干保護(hù)劑按化學(xué)成分分為復(fù)合物、糖類(lèi)、鹽類(lèi)、酸類(lèi)、堿類(lèi)、聚合物等。如鹽類(lèi)在凍干中的作用溶液在結(jié)冰時(shí),其中的溶質(zhì)濃度必然會(huì)慢慢增大,鹽類(lèi)產(chǎn)生的電解質(zhì)離子可明顯降低其Tg值,比如在10%的葡聚糖、PVP、乳糖和蔗糖的溶液中加入2%的NaCl可使Tg值下降14~18℃。磷酸鈉對(duì)Tg值的影響較小,但是當(dāng)將10%的PVP溶液中加入1%~%的磷酸鈉可以引起在低溫?zé)崮芮€中的玻璃化,暗示了在凍干液中的相分離。電解質(zhì)誘導(dǎo)Tg值變化的可能的機(jī)制是它可以增加凍干液中非冰凍水的含量,而這非冰凍水起到了增塑劑的作用,并
2020
08-11

凍干保護(hù)劑之填充劑
填充劑能防止組分隨水蒸汽一起升華逸散，如甘露醇、明膠等。填充劑在選擇時(shí)要滿足以下幾點(diǎn)：有相當(dāng)好的溶解性；與生物制品中活性組分相容；沒(méi)有或者很小的毒性；以及具有較高共晶溫度。甘露醇和甘氨酸就是兩種常用填充劑。在生物制品配方中起到為終的凍干產(chǎn)品提供足夠的機(jī)械支撐作用；改進(jìn)凍干制品的外觀；提高配方的溶解度；防止凍干制品發(fā)生塌陷和溢出容器。另外在做生物制品凍干前必須在溶液中加入填充保護(hù)劑，使之成形。在需凍干的溶液中加入適量膠體物質(zhì)，可以防止凍結(jié)前溶液沉淀和凍干后發(fā)生破碎。可以使制品變得易于凍干或添加凍干
2020
08-08

熒光PCR凍干及蛋白質(zhì)類(lèi)凍干保護(hù)劑
常用的凍干保護(hù)劑種類(lèi)有多輕基化合物、糖、蛋白質(zhì)、聚合物、氨基酸、鹽、胺、表面活性劑等。蛋白質(zhì)類(lèi)凍干保護(hù)劑可分為兩種:一種是蛋白質(zhì)藥物自身，另一種為外來(lái)蛋白質(zhì)。一些蛋白質(zhì)經(jīng)凍融后的活性直接和蛋白質(zhì)的起始濃度有關(guān),起始濃度升高有時(shí)會(huì)促進(jìn)蛋白質(zhì)的復(fù)性一種常用的外來(lái)蛋白質(zhì)類(lèi)保護(hù)劑為血清白蛋白,它是一個(gè)經(jīng)典、優(yōu)良的蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑。例如,冷凍時(shí),1%牛血清白蛋白可使溶液的活性不受損失;人血清白蛋白則在更低濃度(0.05%一0.1%)時(shí)也能有效阻止蛋白質(zhì)表面的吸附，對(duì)凍干過(guò)程中多數(shù)蛋白都具有保護(hù)作用。當(dāng)干燥蛋白
2020
08-08

凍干蛋白常用的賦形劑和保護(hù)劑
賦形劑是在藥物制劑中除主要以外的附加物，也可稱(chēng)輔料。是一種不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的要用混合物，其中加入一種具有療效的藥物或者通過(guò)它使其他成分膠合在一起。在凍干蛋白中幾種常用的賦形劑有葡萄糖、葡聚糖、甘露醇、山梨醇等。都起到什么作用呢？如葡聚糖具有較高的玻璃轉(zhuǎn)化溫度，能在酶蛋白分子周?chē)纬刹ＡB(tài)，從而保護(hù)酶分子免受高溫所引起的損傷；甘露醇（20%-90%，w/w）作為載體可形成疏松結(jié)實(shí)的均勻骨架，改善了制劑產(chǎn)品的外觀；山梨醇與甘露醇相似，一般作為賦形劑；乳糖加入凍干溶液中可增加體積，并有助于凍干塊狀物的形
2020
08-07

熒光PCR凍干保護(hù)劑之羥乙基淀粉
冷凍保護(hù)劑可分為滲透性和非滲透性兩類(lèi)。滲透性冷凍保護(hù)劑可以滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是一些小分子物質(zhì)，主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。非滲透性冷凍保護(hù)劑不能滲透到細(xì)胞內(nèi)，一般是些大分子物質(zhì)，主要包括聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及羥乙基淀粉等。其中羥乙基淀粉是淀粉衍生物，羥乙基淀粉制備的幾種方法有水媒法制備、干法制備、溶媒法制備。羥乙基淀粉作為冷凍保護(hù)劑有什么作用呢？在紅細(xì)胞中可以防止紅細(xì)胞冷凍和溶解過(guò)程溶血，體內(nèi)支鏈淀粉羥乙基化后，抵抗淀粉酶。與二甲
2020
08-06

熒光PCR凍干保護(hù)劑之右旋糖苷
右旋糖苷是聚合物類(lèi)保護(hù)劑的其中一種，其保護(hù)劑還包括PVP,牛血清，聚乙二醇等。聚合物類(lèi)保護(hù)劑的作用具有能提高生物制品混合液的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度等。有些生物制品中會(huì)加入多種聚合物類(lèi)保護(hù)劑。右旋糖苷是若干葡萄糖分子脫水的聚合產(chǎn)物，又叫葡聚糖。其常作為生物制品冷凍干燥的低溫保護(hù)劑來(lái)選用。按分子量的不同，分為中分子和低分子及小分子等，以中分子右旋糖苷40為例介紹下其應(yīng)用。其分子量在4000左右。用作藥品凍干粉針劑的賦形劑在醫(yī)藥工業(yè)中廣泛使用。右旋糖苷40的加入使藥品形成均一蓬松的凍干塊，使藥品在凍干過(guò)程中不
2020
08-06

凍干工藝及優(yōu)化-蛋白
冷凍干燥作為蛋白類(lèi)藥物干燥常用的方法，能保持蛋白類(lèi)藥物的活性，干燥后能保持原形，體積幾乎不變，凍干藥品疏松多孔，呈海綿狀，復(fù)水性好。藥品脫水*能長(zhǎng)期保存。想要凍干藥品復(fù)水性好并且能長(zhǎng)期保存，凍干工藝及優(yōu)化很重要，例舉幾個(gè)方面如冷凍干燥過(guò)程中凍結(jié)中形成的冰晶形態(tài)和大小以及玻璃化程度不光影響干燥效率，還影響凍干藥品的質(zhì)量。在凍結(jié)過(guò)程中要考慮配方、凍結(jié)速率、凍結(jié)方式以及是否退火等問(wèn)題。配方中如果固體含量少于2%，藥品的性能就會(huì)不穩(wěn)定，尤其在干燥過(guò)程中，藥品微粒不能粘在基質(zhì)上，溢出的水蒸汽會(huì)把微粒帶到小
2020
08-05

熒光PCR凍干之Tris
Tris又叫三羥甲基氨基甲烷。是一種白色結(jié)晶或粉末，溶于乙醇和水，微溶于乙酸乙酯、苯，是一種有刺激性的化學(xué)物質(zhì)。其本身有很高的緩沖能力，在水中溶解度高，對(duì)很多酶呈惰性反應(yīng)，它的這一特性使得Tris成為用于許多生化目的非常滿意的緩沖液。用于穩(wěn)定反應(yīng)體系的pH，在pH7.5-9.0之間有較強(qiáng)的緩沖能力。其緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)可用于線蟲(chóng)核纖層蛋白的中間纖維的形成。其本身也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些藥物的中間物。熒光PCR凍干體系優(yōu)化方法：沒(méi)有經(jīng)驗(yàn)采用單
2020
08-03

熒光PCR凍干保護(hù)劑之甘油
多元醇類(lèi)凍干保護(hù)劑包括甘油、甘露醇、山梨糖醇、肌醇、木糖醇、叔丁醇、側(cè)金盞花醇等，這一類(lèi)凍干保護(hù)劑是比較常用較為普遍的凍干保護(hù)劑。以甘油作為凍干保護(hù)劑來(lái)介紹一下在蛋白質(zhì)凍干中的作用。甘油具有良好的滲透能力，可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部和胞內(nèi)大分子形成氫鍵以取代干燥脫除的水分，從而維持蛋白質(zhì)、碳水化合物及脂肪等大分子活性物質(zhì)的原有結(jié)構(gòu)。此外，甘油還可以起到降低細(xì)胞脫水皺縮和緩解復(fù)水腫脹的效果。另外醇和糖類(lèi)相似均具有醇和糖類(lèi)羥基官能團(tuán)，均能產(chǎn)生“優(yōu)先水化作用”以及改變體系的玻璃態(tài)轉(zhuǎn)變溫度等，故在發(fā)揮保護(hù)效果方面
2020
08-03

熒光PCR凍干之二糖
二糖又名雙糖,雙糖是碳水化合物的一種。它是由兩個(gè)單糖分子經(jīng)縮合反應(yīng)除去一個(gè)水分子而成的糖。例如乳糖由葡萄糖和半乳糖組成，蔗糖由葡萄糖和果糖組成，麥芽糖由兩個(gè)葡萄糖組成等。二糖作為常用的凍干保護(hù)劑，能夠有效增加蛋白凍干穩(wěn)定性，但是用它們作保護(hù)劑得到的無(wú)定形蛋白凍干固體具有較低的Tg，對(duì)儲(chǔ)存過(guò)程中的高溫和高濕條件耐受較差。大分子量糖能夠增加凍干后固體的Tg，增加凍干后穩(wěn)定性，但是對(duì)于低濃度蛋白活性保護(hù)作用不理想。例如蔗糖對(duì)蛋白質(zhì)具有保護(hù)作用，葡聚糖在冷凍和干燥過(guò)程中不能防止蛋白質(zhì)變性，而蔗糖與葡聚糖
2020
08-02

熒光PCR凍干之聚合物
聚合物又稱(chēng)加聚物。由一種單體經(jīng)聚合(加聚)反應(yīng)而成的產(chǎn)物。分子具有重復(fù)的結(jié)構(gòu)單位。包括晶態(tài)結(jié)構(gòu)、非晶態(tài)結(jié)構(gòu)、取向態(tài)結(jié)構(gòu)以及織態(tài)結(jié)構(gòu)。聚合物包括聚乙二醇、PVP、明膠、聚乙烯亞胺等。聚合物常用作為蛋白質(zhì)的冷凍保護(hù)劑，通常聚合物的穩(wěn)定作用取決于聚合物的多重性質(zhì),如優(yōu)先從蛋白質(zhì)表面析出、表面活性、使蛋白質(zhì)溶液私度升高從而阻止其他小分子(如糖及多輕基化合物)的結(jié)晶、抑制冷凍過(guò)程中pH值的劇烈變化等。不同聚合度及濃度的聚合物所提供的保護(hù)作用不同,如聚合度大的PvP有著較高的玻璃化溫度,隨著PvP濃度及分子
2020
08-01

熒光PCR凍干之氨基酸
氨基酸是含有氨基和羧基的一類(lèi)有機(jī)化合物的通稱(chēng)。目前發(fā)現(xiàn)的天然氨基酸就有300多種，基本氨基酸也有二十個(gè)品鐘。氨基酸應(yīng)用于食品行業(yè)、醫(yī)藥行業(yè)、化妝品行業(yè)等。氨基酸是常見(jiàn)的蛋白質(zhì)保護(hù)劑之一。在冷凍過(guò)程中,低濃度的甘氨酸可通過(guò)抑制10或100mmol/L磷酸緩沖鹽結(jié)晶所致pH值的改變而阻止蛋白質(zhì)藥物變性。無(wú)定型甘氨酸可阻止凍干過(guò)程中重組人生長(zhǎng)激素的聚集;結(jié)晶型甘氨酸能升高成品的塌陷溫度,阻止因塌陷而引起的蛋白質(zhì)藥物的破壞。常用的氨基酸類(lèi)蛋白質(zhì)保護(hù)劑有脯氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、肌氨酸、苯丙氨酸、
2020
07-29

熒光PCR之探針?lè)?/a>
熒光PCR的探針?lè)ǚ譃槿蚪M核酸探針、克隆探針、寡核苷酸探針、單鏈RNA探針、cDNA探針、蛋白質(zhì)探針以及酶探針。帶大家一起了解下寡核苷酸探針、cDNA探針、RNA探針的特點(diǎn)。寡核苷酸探針特異性較高，區(qū)別染色體上一個(gè)堿基的突變；由于其鏈短，分子量小，雜交時(shí)間較短（僅需1-2小時(shí)），可預(yù)測(cè)雜交條件，可直接利用DNA序列人工合成獲得特異片段而無(wú)需分子克隆，獲得探針相對(duì)容易。但是由于其鏈短致使標(biāo)記率較低，也影響了檢測(cè)的敏感性，僅能檢出含很少的標(biāo)本。cDNA探針以RNA為模板，用反轉(zhuǎn)錄酶合成單鏈cDN

2020
07-27

熒光PCR凍干之DMSO
二甲基亞砜（DMSO）是一種有機(jī)化合物，常溫下為無(wú)色無(wú)臭的透明液體，是一種吸濕性的可燃液體。具有高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性好、與水混溶的特性。可作有機(jī)溶劑、反應(yīng)介質(zhì)和有機(jī)合成中間體。也可用作合成纖維的染色溶劑、去染劑、染色載體,以及回收乙炔、二氧化硫的吸收劑。二甲基亞砜是一種既溶于水又溶于有機(jī)溶劑。廣泛用作溶劑和反應(yīng)試劑，具有很高的選擇抽提能力。二甲基亞砜是如何應(yīng)用的呢？下面簡(jiǎn)單介紹下，DMSO是一種重要的滲透型細(xì)胞保護(hù)劑。培養(yǎng)液中DMSO濃度為10%時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率近100%；1‰濃度時(shí)抑制率為35%
2020
07-26

熒光PCR凍干保護(hù)劑之甲酰胺
甲酰胺是一種化合物，無(wú)色透明液體，略有氨味，是合成醫(yī)藥、香料、染料等的原料，也可作為溶劑用于合成纖維的抽絲、塑料加工、木質(zhì)酪素墨水的生產(chǎn)等。通過(guò)甲酸甲酯和氨的反應(yīng)制備甲酰胺的方法。甲酰胺是可作為溶劑、有機(jī)合成原料、醫(yī)藥原料等的在工業(yè)上有用的物質(zhì)。甲酰胺是被較早發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用的PCR凍干保護(hù)劑之一，能促進(jìn)引物模板退火，能提高PCR反應(yīng)的特異性。分享下熒光PCR試劑凍干的示例：(1)將熒光PCR擴(kuò)增緩沖液、引物、探針、熱啟動(dòng)Taq酶、UNG酶、dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP、凍干保護(hù)劑
2020
07-25

熒光PCR凍干之PVP
聚乙烯吡咯烷酮簡(jiǎn)稱(chēng)PVP,是一種非離子型高分子化合物，是N-乙烯基酰胺類(lèi)聚合物中被研究得深、廣泛的精細(xì)化學(xué)品品種。應(yīng)用于醫(yī)藥、化妝品、食品等行業(yè)。可做粘合劑、增溶劑、分散或共研磨劑、活性成分穩(wěn)定劑等。PVP按其平均分子量大小分為四級(jí)，用K值表示，K值實(shí)際上是與PVP水溶液的相對(duì)粘度有關(guān)的特征值，而粘度又是與高聚物分子量有關(guān)的物理量，一般K值越大，其粘度越大，粘接性越強(qiáng)。熒光PCR凍干時(shí)，PVP能夠增強(qiáng)PCR產(chǎn)物生成量，其中PVP也能有效提高PCR效率和特異性。PVP作為PCR增強(qiáng)劑時(shí)，應(yīng)選用合適

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