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Elisa常見樣本處理方法

來源:上海撫生實業有限公司   2021年08月11日 14:40  

Elisa是一種快速、靈敏、準確可靠的定量分析方法。樣本的處理對于 Elisa 實驗的成功有舉足輕重的作用。

利用 ELISA 進行檢測的樣本類型包括:血液(血清、血漿),組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清,皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、陰道分泌物等。

下面我們就常見的樣本處理方法:

血液采取后應盡快進行處理,使血清(漿)從與血細胞接觸的全血中分離出來。

Q: 血清與血漿的區別?

A: 血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿,故血漿中除尚含有纖維蛋白原和 抗凝劑外,其他成份均等同于血清。

Q: 選擇血清還是血漿樣本?

A: 由于血清中缺乏很多的凝血因子,但有凝血產物。如果測凝血因子建議選擇血漿樣本;同時血漿中有纖維蛋白原,如果纖維蛋白原對待檢測指標有影響,建議選擇血清樣本。

大多數情況下二者均可以選擇。

處理方法:

1、血清:將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4 度過夜,然后1000×g 離心20分鐘,取上清即可。這是一個讓血液自然凝固的過程,溫度越低,凝集越緩慢,可根據需要添加促凝劑。

2、血漿:血漿樣本需要抗凝,一般建議用2.0%EDTA,1%肝素,3.8%枸櫞酸鈉作為抗凝劑采集標本,并將標本在采集后的30分鐘內于2~8度1000g離心15分鐘,取上清即可檢測。根據待檢測目標物的性質不同選取不同的抗凝劑。

3、枸櫞酸鈉(檸檬酸鈉):Ca2+有凝血作用,枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物,從而阻止血液凝固。配成 109mmol/L的濃度和血液1:9, 106mmol/L的濃度和血液1:4

缺點:血液中溶解度低,抗凝作用較弱。

優點:對凝血因子有很好的保護作用,大部分凝血試驗都可用枸櫞酸鈉抗凝。

4、二胺四乙酸(EDTA)鹽:與血液中的鈣離子結合形成配位化合物, 從而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10

優點:對紅細胞和白細胞形態影響小。

缺點:影響血小板的聚集。不適用于凝血實驗和血小板功能相關實驗的檢 測。

5、肝素:通過與抗凝血酶Ⅲ結合,增強抗凝血酶的作用,滅活絲氨酸蛋白 酶,從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集,阻止血液凝固。肝素鈉 1g/L 與血液 1:10

優點:抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫。

缺點:引起白細胞聚集。肝素抗凝血應于短時間內使用,否則放置過久血 液又可凝固。



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