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質(zhì)粒提取鑒定及保存2022/01/27: 1、質(zhì)粒的提取(Tiangen質(zhì)粒提取試劑盒)：a)挑菌：選取培養(yǎng)板中大小中等的單個(gè)菌落，消毒牙簽接種到10ml搖菌管中，其中含有卡那-霉素的LB約5ml，37°C，220rpm恒溫?fù)u床中震蕩培養(yǎng)過夜。b)取上述2.0ml培養(yǎng)液，于常溫下12000rpm離心1分鐘，棄上清，干燥沉淀。c)加入250ul溶液P1(配有去RNA酶，4°C保存)，渦旋振蕩，*懸浮細(xì)菌，不能留有沉淀，否則會(huì)影響裂解。d)加入250ul溶液P2，快速上下顛倒8次，常溫靜置3分鐘，可見混合液逐漸變清、粘稠，表示已充分裂解。e

鑒定血清方法有哪些？2022/01/18: 一、鑒定的方法1、理化性質(zhì)：蛋白含量包括血清總蛋白含量、球蛋白含量、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一項(xiàng)非常重要的指標(biāo)，血清中球蛋白主要是抗體，球蛋白含量越低血清質(zhì)量越高。血紅蛋白也是越低越好。2、微生物檢測(cè)：對(duì)支原體、病毒的檢測(cè)，支原體是一種很小的微生物，可通過孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光學(xué)顯微鏡下難于察覺，細(xì)胞也能生長繁殖，但會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。3、促生長效果：這是血清重要的特性，應(yīng)當(dāng)以培養(yǎng)的細(xì)胞來檢測(cè)。4、對(duì)于使用者：判斷血清質(zhì)量先從外觀入手。好的血清應(yīng)該是透明清亮，土黃色或棕黃色，

歸納造成ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品溢值的原因2022/01/11: ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣，操作者們所犯的問題也各有不同?，F(xiàn)我司技術(shù)就造成ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品溢值的原因解析：1、樣品/標(biāo)準(zhǔn)品不正確稀釋。2、孵育時(shí)間/溫度不正確。3、在孵育時(shí)為蓋上酶聯(lián)板覆蓋物：在孵育時(shí)需蓋上酶聯(lián)板覆蓋物，以防止液體蒸發(fā)或孵育期間的污染。每個(gè)試劑盒內(nèi)均有足夠數(shù)量的酶聯(lián)板覆蓋物。4、檢測(cè)波長不正確：要保證分光光度劑的檢測(cè)波長是正確的。5、TMB底物的顯色時(shí)間過長：請(qǐng)監(jiān)控顯色時(shí)間。說明書中所示的顯色時(shí)間可能因?yàn)闇囟群推渌鼨z測(cè)條件的不同而稍有變化。6、樣品不適合此檢測(cè)：在說明書中

解答ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)白板異常的原因2022/01/05: ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可

?聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方法2021/12/27: PCR實(shí)驗(yàn)原理：聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴(kuò)增反應(yīng)。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當(dāng)濃度的Mg2+存在的條件下，依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應(yīng)。兩個(gè)引物分別位于靶序列兩端，同兩條模板的3’端互補(bǔ)，由此限定擴(kuò)增片段。PCR反應(yīng)由一系列的變性→退火→延伸反復(fù)循環(huán)構(gòu)成，即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈，然后在較低溫度下同過量引物退火，再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進(jìn)行延伸。理論上，經(jīng)過N次循環(huán)可使特定片段擴(kuò)增到2n

抗原抗體反應(yīng)關(guān)鍵三因素2021/12/21: 抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。這種反應(yīng)既可在機(jī)體內(nèi)進(jìn)行，也可以在機(jī)體外進(jìn)行。特點(diǎn)有特異性、比例性、可逆性抗原抗體反應(yīng)的過程是經(jīng)過一系列的化學(xué)和物理變化，包括抗原抗體特異性結(jié)合和非特異性促凝聚兩個(gè)階段，以及由親水膠體轉(zhuǎn)為疏水膠體的變化。抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)主要有三性:即特異性、比例性、可逆性。特異性是抗原抗體反應(yīng)的最主要特征，這種特異性是由抗原決定簇和抗體分子的超變區(qū)之間空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性確定的。影響抗原抗體反應(yīng)的三因素：1、電解質(zhì)：抗原和抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為

?PCR的循環(huán)的參數(shù)2021/12/16: 1.預(yù)變性（Initialdenaturation）模板DNA*變性與PCR酶的*激活對(duì)PCR能否成功至關(guān)重要，建議加熱時(shí)間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時(shí)間為兩分鐘。2.循環(huán)中的變性步驟循環(huán)中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列*變性，可能的情況下可縮短該步驟時(shí)間，變性時(shí)間過長損害酶活性，過短靶序列變性不*，易造成擴(kuò)增失敗。3.引物退火（Primerannealing）退火溫度需要從多方面去決定，一般根據(jù)引物的Tm值為參考，根據(jù)擴(kuò)增的長度適當(dāng)下調(diào)作為退火溫度。然后在此次實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上

ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)未知抗原2021/11/29: 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法:1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌，下同)。2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔)。3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。4

細(xì)胞收到后處理方法2021/11/24: 您需要準(zhǔn)備好細(xì)胞所要用到的培養(yǎng)基和相關(guān)試劑,雖然所有的貼壁,半貼壁或者懸浮細(xì)胞處理方式差不多,但是不同的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在,也會(huì)導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞處理不當(dāng),或者環(huán)境的不適應(yīng)而造成細(xì)胞的死亡。1、收到細(xì)胞,第1時(shí)間要觀察細(xì)胞形態(tài)是否正常,對(duì)于貼壁細(xì)胞則要注意看貼壁情況是否很好,觀察細(xì)胞密度有疑議及時(shí)咨提供細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)輸?shù)臅r(shí)間或者溫度的變化,很多貼壁細(xì)胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時(shí)有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁牢固問冋題。比如29紅,平時(shí)貼壁就不是很牢,在裝滿的培

ELISA試劑盒加樣的具體步驟2021/11/17: ELISA試劑盒加樣的具體步驟，即加標(biāo)本，加酶物，加底物。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)有些濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上激烈振動(dòng)。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝結(jié)、縮短后即可獲得。也可在板孔中參加稀釋液，再在其參加血清標(biāo)本，然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以確?；旌?。通常說來，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超越一星期測(cè)定的需低溫冰存?？捎米鱁LISA測(cè)定的標(biāo)本非常廣泛，體液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、大便)等均可作標(biāo)

了解十五種細(xì)胞染色試劑2021/11/08: 1、酸性品紅：酸性品紅是酸性染料，呈紅色粉末狀，能容於水，略溶於酒精（0.3%）。是良好的細(xì)胞制染色劑，在動(dòng)物制片上應(yīng)用很廣，在植物制片上用來染皮層、髓部等薄壁細(xì)胞和纖維素壁。它跟甲基綠同染，能顯示線粒體。組織切片在染色前先浸在帶酸性的水中，可增強(qiáng)它的染色力。酸性品紅容易跟堿起作用，所以染色過度，易在自來水中褪色。2、剛果紅：剛果紅是酸性染料，呈棗紅色粉末狀，能溶於水喝酒精，遇酸呈藍(lán)色。它能作染料，也用作指示劑。它在植物制片中常作為蘇木精或其他細(xì)胞染料的襯墊劑。用來染細(xì)胞質(zhì)時(shí)，能把膠制或纖維素染

了解ELISA檢測(cè)代測(cè)服務(wù)2021/11/03: 一、ELISA檢測(cè)概述ELISA（酶聯(lián)接免疫吸附反應(yīng)分析）是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測(cè)抗體的間接法、用于檢測(cè)抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原的抗原競(jìng)爭(zhēng)法等等。目前我們對(duì)客戶提供比較常用的

抗體的特異性的選擇需考慮的因素2021/10/26: 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力?？贵w的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。特異性的選擇主要需要考慮因素：蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。1、蛋白特異性針對(duì)需要檢測(cè)的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分：a.重組蛋白如果不是全長表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。b.內(nèi)源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對(duì)，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。c.磷酸化蛋白檢測(cè)需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制

溶解與稀釋ELISA標(biāo)準(zhǔn)品方法步驟2021/10/20: ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱，是一種檢測(cè)方法，而標(biāo)準(zhǔn)品是相對(duì)于具體的物質(zhì)有具體的標(biāo)準(zhǔn)品，所以不存在說ELISA的標(biāo)準(zhǔn)品。ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計(jì)算的尺子，標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品如下：1.粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，讓因運(yùn)輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。2.根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋

組織培養(yǎng)消除污染的實(shí)驗(yàn)步驟2021/10/11: 當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對(duì)一些細(xì)胞系有毒性，因而，做劑量反應(yīng)實(shí)驗(yàn)確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點(diǎn)在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時(shí)尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實(shí)驗(yàn)步驟:（1）在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計(jì)數(shù)和稀釋細(xì)胞，稀釋到常規(guī)細(xì)胞傳代的濃度。（2）分散細(xì)胞懸液到多孔培養(yǎng)

PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶（雜帶）原因與解決方法2021/10/08: 擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶(雜帶)1)引物用量偏大，引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。2)循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量，減少循環(huán)次數(shù)。3)酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好。應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。4)退火溫度偏低，退火及延伸時(shí)間偏長。應(yīng)提高退火溫度，減少變性與延伸時(shí)間，也可采用二種溫度的PCR擴(kuò)增。以2度為梯度設(shè)計(jì)梯度PCR反應(yīng)優(yōu)化退火溫度。5)樣品處理不當(dāng)。6)Mg2+濃度偏高。因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。7)若為PCR試劑盒。也可能時(shí)試劑盒本身質(zhì)量有問題。8)復(fù)制提前終止。使用非熱

抗體的免疫學(xué)五大功能2021/09/24: 1、中和（Neutralization）這是抗體最基本的功能?？贵w的中和指的是抗體和抗原結(jié)合后，抗原失去原有的功能。比如病毒的糖蛋白無法和細(xì)胞受體結(jié)合，酶無法進(jìn)行催化，轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白無法轉(zhuǎn)運(yùn)等等。中和是抗體自身的功能，僅由抗體的分子結(jié)構(gòu)決定，不需要免疫系統(tǒng)的其它部分參與。2、凝集（Agglutination）抗原和抗體結(jié)合后會(huì)凝集成一團(tuán)，失去行動(dòng)力，有利于免疫系統(tǒng)的清除。3、調(diào)理（Opsonization）抗體和抗原結(jié)合會(huì)促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)抗原的吞噬。由于細(xì)胞膜帶負(fù)電會(huì)互相排斥，被抗體覆蓋的細(xì)菌或細(xì)胞更易

探討熒光定量PCR中的Ct值2021/09/15: 熒光定量PCR（qPCR）是目前病原檢測(cè)領(lǐng)域使用最為廣泛的核酸檢測(cè)方法（PCR檢測(cè)技術(shù)概述）。尤其是非洲豬瘟發(fā)生后，qPCR檢測(cè)得到了極大的普及，對(duì)于剛剛進(jìn)入qPCR檢測(cè)領(lǐng)域的人，很容易鉆入了“唯Ct值”的牛角尖，今天我們就聊聊qPCR中的Ct值。一、Ct值的基本概念1、什么是Ct值閾值循環(huán)數(shù)Thresholdcycle(Ct)也寫作Cq值，熒光信號(hào)大于熒光閾值時(shí)PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個(gè)循環(huán)的熒光值設(shè)為基線（baseline），是由于測(cè)量的偶然誤差引起的。閾值（threshold

實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫技術(shù)的質(zhì)量控制要點(diǎn)2021/09/07: 實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫技術(shù)的質(zhì)量控制：1.測(cè)定模式的影響ELISA測(cè)定模式包括：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法因受操作時(shí)差所引起的bu公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。2.ELISA試劑的準(zhǔn)備不同批次的試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*一致，即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購長批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對(duì)

單克隆抗體與多克隆抗體的區(qū)別2021/09/02: 克?。褐笩o性繁殖細(xì)胞系，是由單一的祖先細(xì)胞分裂繁殖而形成的一簇細(xì)胞純系。在這個(gè)家族的所有成員中，如無突變發(fā)生，基因是*相同的。單克隆抗體（monoclonalantibodies,mAb）：由一個(gè)識(shí)別一種抗原表位的B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體。高度均一、特異性強(qiáng)、效價(jià)高、少或無交叉反應(yīng)性。多克隆抗體（polyclonalantibody,pAb）：用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè)B細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對(duì)多種抗原表位的不同抗體。所獲得的免疫血清實(shí)際上是含有多種抗體的混合物。多克隆抗體與

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