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培養(yǎng)基制備常用的8個步驟過程2021/08/25: 培養(yǎng)基(Medium)是供微生物、植物組織和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽(包括微量元素)以及維生素和水等。不同培養(yǎng)基可根據(jù)實(shí)際需要，添加一些自身無法合成的化合物，即生長因子。培養(yǎng)基的制備程序不同類型培養(yǎng)基制備的程序也不盡相同。但一般培養(yǎng)基的程序主要可分為：配料、溶化、矯正pH、澄清過濾、分裝、滅菌及檢定等8個步驟。1，配料：按培養(yǎng)基處方準(zhǔn)確稱取各種成分，先在三角燒瓶中加入少量蒸餾水，再加入各種成分，以防蛋白胨等粘附于瓶底，然后再以剩余的水沖洗瓶壁。

?ATCC菌種四種的保存方法2021/08/19: 1、傳代保存法有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時，會很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行ATCC菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存，它是基本的微生物保存法，例如酸奶等常用菌種的保存。傳代保存時，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸ATCC菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。一般地，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5℃為好，像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用3

血清的五大主要功能2021/08/03: 血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理?xiàng)l件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子

流式抗體保存注意事項(xiàng)2021/07/28: 1.流式抗體應(yīng)該如何保存？流式抗體一般都是直接帶熒光標(biāo)記的，一般情況下4°C避光可以保存一年，勿-20°C保存，熒光基團(tuán)在反復(fù)凍融之后會從抗體上脫落。2.流式抗體過了一年還能用嗎？一般來說，流式抗體還是比較穩(wěn)定的，如果說明書上寫4°C避光可以保存一年，大部分情況下，過了一年還是可以使用的，有些流式抗體甚至可以4°C避光保存2-3年。3.不能及時檢測的樣本應(yīng)該如何保存？流式實(shí)驗(yàn)建議是用新鮮細(xì)胞做，樣本如果不能及時上機(jī)檢測，可以在得到單細(xì)胞懸液后就立即放到4°C冰箱中，到第二天早上做流式，或嘗試抗體

介紹按用途分類的三種培養(yǎng)基2021/07/21: 根據(jù)培養(yǎng)基的用途來區(qū)分，可分為選擇培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等。一、選擇培養(yǎng)基在培養(yǎng)基中加入某種物質(zhì)以殺死或抑制不需要的菌種生長的培養(yǎng)基，稱之為選擇培養(yǎng)基。如鏈霉素、氯霉素等抑制原核微生物的生長；而制霉菌素、灰黃霉素等能抑制真核微生物的生長；結(jié)晶紫能抑制革蘭氏陽性細(xì)菌的生長等。二、增殖培養(yǎng)基在自然界中，不同種的微生物常生活在一起，為了分離我們所需要的微生物，在普通培養(yǎng)基中加入一些某種微生物特別喜歡的營養(yǎng)物質(zhì)，以增加這種微生物的繁殖速度，逐漸淘汰其它微生物，這種培養(yǎng)基稱為增殖培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基

生物素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)指南2021/07/14: 生物素標(biāo)記反應(yīng)原理：NH2-ReactiveBiotin專一的與伯胺反應(yīng)（N-末端及賴氨酸殘基側(cè)鏈）形成穩(wěn)定的酰胺鍵一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：仔細(xì)閱讀使用說明書。計(jì)算待使用NH2-ReactiveBiotin的量。1.提前20min從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫（注：不需要用到的NH2-ReactiveBiotin繼續(xù)放置冰箱中）。2.溶解NH2-ReactiveBiotin：加入30μLDMF至NH2-ReactiveBiotin瓶中，靜置10min，待其充分溶解，此時生物素的濃度為10mM。二、操作步

牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)說明2021/07/07: 牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)說明需要自備的器材：1．方法儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光PCR擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20℃冰箱、可調(diào)移液器（2µL、20µL、200µL、1000µL）。2．耗材：熒光PCR專用反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5mL經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水處理的滅菌離心管、吸頭（10µL、200µL、1000µL）、滅菌雙蒸水。樣本采集、存放及運(yùn)輸：1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存

介紹生物素親和素ELISA系統(tǒng)2021/07/01: 生物素親和素(又稱抗生物素)系統(tǒng)(biotinavidinsystem,BAS)標(biāo)記抗體的技術(shù)是20世紀(jì)70年代后期發(fā)展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與生物素間的親和力*，結(jié)合迅速，且極其穩(wěn)定，生物素標(biāo)記抗體和酶的標(biāo)記率高，又不影響蛋白的活性，使BAS標(biāo)記技術(shù)比常規(guī)酶聯(lián)免疫、放射免疫及熒光免疫技術(shù)有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測開辟了新的途徑。近年來，在BAS檢測中多用鏈霉親和素“streptavidin,SA”，它是鏈霉菌培養(yǎng)過程中的分泌物，完整的鏈霉親和素和從卵白中提取的親和

免疫熒光技術(shù)實(shí)驗(yàn)說明2021/06/23: 免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。一、傳統(tǒng)的免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟1、實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞樣品試劑、試劑盒：多聚甲醛、70%甲醇、丙酮、PBS、Triton、BSA、DAPI染液、DABCO、Tris、甘油儀器、耗材：玻片2、實(shí)驗(yàn)步驟細(xì)胞爬片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟：第一

標(biāo)記基因和報(bào)告基因的區(qū)別與關(guān)聯(lián)2021/06/17: 標(biāo)記基因和報(bào)告基因的概念標(biāo)記基因(markergene)，是一種已知功能或已知序列的基因，能夠起著特異性標(biāo)記的作用。標(biāo)記基因是選擇標(biāo)記基因的簡稱，是指其編碼產(chǎn)物能夠使轉(zhuǎn)化的細(xì)胞、組織具有對抗生素等的抗性，或者使轉(zhuǎn)化細(xì)胞、組織具有代謝的*性。在培養(yǎng)基中加入抗生素等選擇試劑的條件下，非轉(zhuǎn)化的細(xì)胞死亡或生長受到抑制，而轉(zhuǎn)化的細(xì)胞能夠繼續(xù)存活，從而將轉(zhuǎn)化的細(xì)胞、組織從大量的細(xì)胞或組織中篩選出來的一類基因。在基因工程意義上來說，它是重組DNA載體的重要標(biāo)記，通常用來檢驗(yàn)轉(zhuǎn)化成功與否；在基因定位意義上來說，

細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟2021/06/09: 一、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。二、取材在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞，經(jīng)過一定的處理后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的第一次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實(shí)際上幼體組織比成年個體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容易培養(yǎng)，腫瘤組織比正常組織容易培養(yǎng)。取材后應(yīng)立即處理，盡

如何正確溶解與稀釋ELISA標(biāo)準(zhǔn)品？2021/05/26: ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線是結(jié)果計(jì)算的尺子，標(biāo)準(zhǔn)品是ELISA實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵點(diǎn)。怎樣正確溶解、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品呢？1.粉末標(biāo)準(zhǔn)品短暫離心，讓因運(yùn)輸沾到管蓋、管壁的標(biāo)準(zhǔn)品沉到管底。2.根據(jù)瓶標(biāo)簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待*溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:（1）標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。若細(xì)胞上清樣本，建議

用鑒定試劑盒做微生物生化鑒定操作流程與注意事項(xiàng)2021/05/17: 生化鑒定試劑盒HiBio-ID™，試劑盒包含生化鑒定卡、輔助試劑、結(jié)果詮釋表和標(biāo)準(zhǔn)菌種表。一個生化鑒定卡上集成了12種或24種生化試驗(yàn)，將反應(yīng)后的顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》、《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》比對后，從而對菌種作出鑒定。操作流程：1，準(zhǔn)備接種液①待測菌株需要先分離純化。只有純化的菌株才能用于檢測?？捎闷胀ㄅ囵B(yǎng)基如營養(yǎng)瓊脂（#M001）或適合的鑒別培養(yǎng)基分離菌株。（具體培養(yǎng)基以說明書為準(zhǔn)）②挑取單個菌落，接種到5ml腦心浸出液肉湯，在35-37℃培養(yǎng)4-6小時，直到菌液濁度達(dá)到產(chǎn)品說明書上的要求。一些苛

人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟及優(yōu)點(diǎn)2021/05/11: 人ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟:1.以稀釋液將待檢標(biāo)本做適當(dāng)稀釋（預(yù)試中確定）加入包被有已知抗原的酶標(biāo)板中（50ul/孔），加封口膠帶于37℃作用30min。2.棄反應(yīng)液，以沖洗液連續(xù)洗板5次并于吸水紙上拍干。3.加入酶標(biāo)抗體（濃度在預(yù)試中確定）。加封口膠帶后于37℃作用30min。4.重復(fù)第2步。5.加底物（濃度在預(yù)試中確定），加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60min，其間不時觀察，顯色滿意后加終止液50ul/孔。6.于酶標(biāo)儀測定OD值，OPD用492nm測定，TMB用450nm測定。人ELIS

熒光核酸試劑儲存條件及探針法2021/04/28: 熒光核酸試劑儲存條件：14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。5.保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻

標(biāo)準(zhǔn)品儲存及使用方法2021/04/27: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)》技術(shù)規(guī)范，隨機(jī)抽取分裝后的樣品，采用高效液相色譜法（DAD檢測器）對純度進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)、穩(wěn)定性考察。檢驗(yàn)結(jié)果表明均勻性和穩(wěn)定性良好。本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)zui小取樣量為5mg。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)穩(wěn)定性跟蹤考察，有效期為自定值日期起2年。研制單位將繼續(xù)監(jiān)測該標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的穩(wěn)定性，有效期內(nèi)如發(fā)現(xiàn)量值變化，將及時通知用戶。包裝、儲存及使用1、包裝：本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)采用螺口小玻璃瓶包裝，每瓶不少于500mg。2、儲存及使用：冷藏、避光、干燥條件下保存。使用前，在P2O5干燥器中干燥48小時以上，以除去水分。3、本標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

人ELISA試劑盒操作步驟事項(xiàng)2021/04/22: 人Elisa試劑盒操作步驟：1．用蓋片鑷人Elisa試劑盒將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30厘米處照射2-3小時；4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；5．將人Elisa試劑盒培養(yǎng)板在5%CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快

生化試劑類使用方法2021/04/21: 生化試劑類作用：1、蛋白酶K：能水解消化蛋白質(zhì)，特別是與DNA結(jié)合的組蛋白，在尿素和SDS中穩(wěn)定。一般工作濃度是50—100μg/ml，推薦反應(yīng)緩沖液：50mMTris-HCl（pH7.5）,10mMCaCl2。2、SDS：十二烷基硫酸鈉，溶解細(xì)胞膜上的脂類與蛋白質(zhì)，因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜，并解離細(xì)胞中的核蛋白，SDS還能與蛋白質(zhì)結(jié)合而沉淀。3、IPTG：異丙基-β-D-硫代半乳糖苷，常用于藍(lán)白斑篩選及IPTG誘導(dǎo)的細(xì)菌內(nèi)的蛋白表達(dá)等。IPTG和乳糖的結(jié)構(gòu)相似，所以它和乳糖一樣，可以與乳糖操

其他生化試劑特點(diǎn)與自備的器材方法2021/04/16: 其他生化試劑自備的器材：1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光PCR擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20℃冰箱、可調(diào)移液器（2µL、20µL、200µL、1000µL）。2．耗材：熒光PCR反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5mL經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水處理的滅菌離心管、吸頭（10µL、200µL、1000µL）、滅菌雙蒸水。其他生化試劑特點(diǎn)：1.即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。2.引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的PCR產(chǎn)物長度為560bp。3.PCRmix中含上樣染料，P

大鼠ELISA檢測試劑盒標(biāo)本要求與操作步驟2021/04/13: 大鼠ELISA檢測試劑盒操作步驟：產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。1.加樣：分別設(shè)空白孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔加待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。2.棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記抗小鼠IgG工作液100μl（取1μl

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