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高效C端測序策略:提升準確性與靈敏度檢測技術服務詳情介紹
dànbáizhì的C端(C-terminus)不僅決定了其在細胞內的定位、穩定性及活性,還參與多種關鍵生物過程,如泛素化降解、信號轉導調控、剪切激活等。相較于蛋白N端,C端的結構更為多樣,且常常涉及翻譯后修飾或與其他分子相互作用,是探索新型藥物靶點、揭示疾病機制的重要入口。然而,C端肽段的檢測一直面臨技術瓶頸。傳統dànbáizhì組學方法難以有效富集和解析C端信息,原因包括酶解位點分布不均、肽段長度短、質譜響應性低等。如何構建一套高靈敏、高特異、高通量的Cduāncèxù策略,成為當前dànbáizhì組學領域的重要課題。
一、Cduāncèxù的技術難點
1、非特異性酶解干擾C端識別
常用的yídànbáiméi(Trypsin)在堿性氨基酸殘基(K、R)處切割,產生的肽段常包含中間區域信息。由于C端多為酸性或非極性殘基,缺乏特異性酶切位點,導致測序過程中C端肽段容易被其他中間肽段“淹沒”,影響識別效率。
2、C端肽段性質復雜,質譜響應性低
C端肽段常常短小、疏水,或者存在翻譯后修飾(如羧基酰胺化、磷酸化),這使得其在質譜中離子化效率差、信噪比低,即便被捕獲也難以高置信度鑒定。
3、缺乏靶向富集策略
大多數dànbáizhì組學策略依賴全肽段非選擇性分析,缺乏專一富集C端的手段,導致覆蓋率和特異性難以兼顧。
二、化學標簽策略:實現C端肽段高效富集
為解決上述挑戰,研究者開發了多種基于化學標記與純化的C端富集方法,主要分為以下兩類:
1、羧基選擇性修飾與阻斷
利用羧基選擇性反應(如2-PCA、EDC/NHS耦合)可在蛋白C端或肽段羧基位置添加特定標簽。這些標簽可進一步用于純化、富集、或者阻斷非目標位點的反應,從而提高C端特異性。
2、固相結合與選擇性洗脫
通過化學修飾后將C端肽段固定于固相載體(如親和樹脂、磁珠),在酶解或洗脫過程中選擇性釋放C端肽段。這種方法可有效剔除背景中間肽段,提高目標識別率。
??這些策略不僅提升了C端肽段的相對豐度,還大大增強了質譜檢測靈敏度,為下游高通量分析創造條件。
三、質譜平臺升級:從DDA到DIA的跨越
1、DIA模式下C端識別更全面
Data-Independent Acquisition(DIA)技術近年來快速發展,其全譜采集模式顯著提升了低豐度肽段的檢測能力。相比傳統的Data-Dependent Acquisition(DDA),DIA不再依賴采集強度選擇目標,而是對所有肽段信號一網打盡。結合針對C端肽段構建的特征譜圖庫,DIA可實現jīngzhǔn識別與定量,尤其適合復雜樣本中的C端特異性檢測。
2、高分辨質譜平臺帶來jīngzhǔn測序
如Orbitrap Exploris 480、Q Exactive HF-X等gāoduān質譜儀具備更高分辨率、更快掃描速度和更寬動態范圍,能清晰分辨低豐度、相似質量的C端肽段。配合納流LC系統,極大提升了整體靈敏度與數據重現性。
四、生信算法與數據庫優化:補齊識別盲區
1、自定義數據庫匹配提高準確性
傳統數據庫多以全蛋白序列構建,針對C端位點的識別靈敏度不足。通過引入特定“decoy”序列、模擬C端剪切形式,可提升搜索引擎對真實C端的識別能力。
2、AI算法提升譜圖識別率
隨著機器學習與深度神經網絡的引入,生信平臺可對弱信號譜圖進行智能二次打分。即便是低質量、弱響應的C端肽段,也可通過模型識別出潛在結構,從而顯著降低假陰性率。
??這些策略為Cduāncèxù提供了數據層面的保障,使整個流程更智能、高效。
隨著dànbáizhì組學技術的不斷演進,Cduāncèxù正逐步從“小眾難題”邁向“大規模應用”。通過整合化學富集策略、優良質譜平臺與智能算法支持,研究者得以實現對蛋白C端的高靈敏、高通量解析。百泰派克生物科技構建了標準化、高通量的Cduāncèxù平臺,已服務于多家科研院所與生物醫藥企業,為蛋白功能研究與藥物開發提供有力支持。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!