如何確定N或C末端？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在dànbáizhì研究中，N端（氨基末端）和C端（羧基末端）的jīngquè定義是理解dànbáizhì結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)步驟。無(wú)論是進(jìn)行翻譯起始位點(diǎn)驗(yàn)證、信號(hào)肽識(shí)別、翻譯后修飾研究，還是構(gòu)建表達(dá)載體或開(kāi)發(fā)靶向藥物，末端信息的正確注釋都至關(guān)重要。本文將系統(tǒng)解析N/C末端的生物學(xué)意義與實(shí)驗(yàn)鑒定策略，幫助科研人員設(shè)計(jì)更jīngzhǔn的研究方案。

一、為什么要鑒定N端或C端？

dànbáizhì的兩個(gè)末端往往承載重要的功能信息與調(diào)控信號(hào)，例如：

• N端可能包含信號(hào)肽、定位序列或起始?xì)埢揎棧ㄈ缫阴；⒓柞；?/p>

• C端常涉及泛素化識(shí)別序列、酶解位點(diǎn)或跨膜結(jié)構(gòu)域；

• dànbáizhì的翻譯起始點(diǎn)與剪接變體差異，常常體現(xiàn)在N端；

• 某些蛋白活性依賴于N/C端的剪切或特定結(jié)構(gòu)構(gòu)象。

??準(zhǔn)確識(shí)別dànbáizhì的起始和終止位點(diǎn)，是從序列注釋邁向功能解析的關(guān)鍵一步。

二、如何確定N端或C端？

1、質(zhì)譜法（Mass Spectrometry-Based Terminomics）

質(zhì)譜是目前靈敏度zuì高、通量zuì高、信息zuì豐富的末端鑒定技術(shù)，已廣泛用于各類(lèi)樣本的dànbáizhì起始/終止位點(diǎn)解析。

?? N端鑒定策略：

• 陽(yáng)性選擇法（Positive Selection）：利用化學(xué)標(biāo)記手段（如TMT、Dimethyl標(biāo)簽）特異性標(biāo)記天然N端，抑制中間肽段干擾；

• 陰性選擇法（Negative Selection）：先封閉所有游離N端，酶解后僅釋放天然N端肽段供富集和鑒定。

?? C端鑒定策略：

• 相對(duì)復(fù)雜，通常采用羧基特異性標(biāo)記劑（如2-pyridinecarboxaldehyde）與特異性酶切（如Lys-C）結(jié)合，富集C端肽段；

• 也可通過(guò)質(zhì)譜數(shù)據(jù)中“無(wú)下游殘基”的肽段推斷終止位點(diǎn)。

2、Edman降解法（傳統(tǒng)手段）

Edman降解是化學(xué)方法逐個(gè)識(shí)別N端氨基酸的經(jīng)典技術(shù)，適用于高純度蛋白樣品。但其操作復(fù)雜、通量低、不能用于Cduāncèxù，在復(fù)雜樣本和大規(guī)模分析中已被質(zhì)譜法替代。

3、生物信息學(xué)預(yù)測(cè)（輔助驗(yàn)證）

借助已有數(shù)據(jù)庫(kù)與算法（如SignalP、TopFIND、Gencode），可預(yù)測(cè)信號(hào)肽剪切位點(diǎn)、翻譯起始點(diǎn)或C端結(jié)構(gòu)域位置。但需注意：

• 預(yù)測(cè)工具只能作為參考，無(wú)法代替實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；

• 建議結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合注釋?zhuān)蕴岣咦⑨寽?zhǔn)確性與生物學(xué)解釋力。

三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)

為了提升N/C端鑒定的準(zhǔn)確性與覆蓋率，建議在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中考慮以下因素：

• 樣本處理：避免末端降解，采用yìtàiméi預(yù)處理；

• 蛋白酶選擇：使用Lys-C、Glu-C等切割特異性強(qiáng)的酶，有助于末端肽段保留；

• 數(shù)據(jù)分析策略：構(gòu)建定制數(shù)據(jù)庫(kù)、啟用非典型起始位點(diǎn)搜索、整合翻譯后修飾位點(diǎn)信息；

• 富集策略匹配研究目標(biāo)：根據(jù)項(xiàng)目重點(diǎn)選擇陽(yáng)性/陰性選擇策略或不同修飾標(biāo)簽。

四、N/C端信息如何應(yīng)用于科研或產(chǎn)業(yè)？

• 翻譯起始位點(diǎn)確認(rèn)：用于驗(yàn)證不同剪接體或可變起始密碼子；

• 信號(hào)肽與定位序列識(shí)別：支持膜蛋白、分泌蛋白功能研究；

• 藥物靶點(diǎn)設(shè)計(jì)與抗體修飾：確保修飾位點(diǎn)不干擾功能區(qū)域；

• 蛋白降解通路解析：識(shí)別泛素化、N-degron等末端信號(hào)結(jié)構(gòu)；

• 重組蛋白表達(dá)驗(yàn)證：確認(rèn)表達(dá)產(chǎn)物是否完整、起止位點(diǎn)是否準(zhǔn)確。

確定dànbáizhì的N端與C端，不僅是基本結(jié)構(gòu)注釋的需求，更關(guān)乎功能解析、機(jī)制研究乃至臨床開(kāi)發(fā)。選擇合適的實(shí)驗(yàn)策略、平臺(tái)能力與數(shù)據(jù)分析流程，將直接決定末端信息的解讀深度。作為zhuānyè的蛋白組學(xué)服務(wù)提供者，百泰派克生物科技結(jié)合豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)與高性能儀器平臺(tái)，致力于為科研人員提供高覆蓋、高精度的dànbáizhìN/Cduāncèxù服務(wù)，加速科學(xué)問(wèn)題的深入解析。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問(wèn)題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專(zhuān)有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

如何確定N或C末端？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹