產品編號：

RC200108-100ML

存儲條件：

2-8 ℃避光保存，有效期12個月。

產品簡介：

本產品專為貼壁培養的人間充質干細胞傳代設計，是即用型間充質干細胞消化液。主要功能成分為重組胰蛋白酶、EDTA。該產品消化人間充質干細胞較為溫和，避免細胞因為劇烈的消化而發生老化和分化，與無血清培養基配合，在間充質干細胞治療用研究中能有效保持細胞生物學特性。

適用于人間充質干細胞hMSCs，包括人骨髓間充質干細胞hBMSCs、人脂肪間充質干細胞hAMSC、人羊膜間充質干細胞hAD-MSCs、人臍帶間充質干細胞hUMSCs等。同樣適用于其他貼壁培養的哺乳動物細胞消化傳代，包括293、Hela、NIH3T3等，具體使用時請自行分析判斷對細胞類型的影響。

適用實驗與操作過程：

1. 間充質干細胞消化
   1. 細胞準備：將待消化的貼壁人間充質干細胞培養器皿置于超凈工作臺。
   2. 90%左右，密度過大會導致細胞分化或老化。
   2. 細胞清洗：吸棄培養上清，加入與培養液等量的PBS洗細胞一次。
   3.  
   3. 細胞消化：棄去清洗細胞的PBS，加入適量的間充質干細胞消化液，輕輕搖動以使消化液均勻分布，室溫水平靜置消化1-2分鐘。
   4. 2/5，如T25細胞培養瓶加入2 ml，請以*覆蓋細胞為準。間充質干細胞消化液使用前必須室溫復溫。消化過程中可以進行顯微鏡觀察，可見細胞很快回縮成圓形，輕輕震動培養器皿大多數細胞即可脫落。
   4. 終止消化：加入2倍體積的間充質干細胞無血清培養基（RC200101），快速混勻以終止細胞消化。
   5. 細胞收集：輕輕吹打細胞，使細胞從培養表面脫落。將細胞懸液移入離心管中，200 g離心5分鐘，獲得細胞沉淀。
   6. 1-2分鐘便可很容易脫壁，某些不易吹打脫壁的細胞建議舍棄。
2. 其他實驗應用
   1. 本產品可適用于組織細胞消化。如配合組織細胞消化液（RC200104）消化人羊膜，獲取羊膜上皮細胞與羊膜間充質干細胞。
   2. 本產品可適用于貼壁不牢的細胞消化。如用于消化293T、NIH2T2等細胞，可以更好保護細胞活性。

注意事項與常見問題：

1. 適用的細胞類型？

本產品為人間充質干細胞消化傳代設計，經過驗證能很好保護hMSCs活性。本產品消化較溫和，貼壁不牢固的間質類細胞同樣適用。一些貼壁不牢的細胞，如293T也較為適用。

2. 間充質干細胞的消化時長？

人間充質干細胞貼壁較上皮細胞松散，消化時較容易脫壁。無血清體系培養的人間充質干細胞更容易脫壁。所以，建議消化時間為1分鐘，務必控制在2分鐘以內。時間以消化液接觸細胞的時間開始計算。

3. 間充質消化時一些細胞不脫壁？

首先，確定消化液分布是否均勻，消化液的量是否足夠，消化過程中是否有些細胞未被消化液覆蓋。排出以上因素后，看細胞是少部分還是大多數未脫壁，若絕大多數未脫壁，可能是消化前細胞清洗不夠。若僅有部分未脫壁，可能是此部分細胞不是目標間充質干細胞，建議放棄此部分細胞。

4. 消化后是否要快速終止？

間充質干細胞極易消化，消化結束建議快速終止消化。消化時間過長可能導致細胞老化、分化，或者會使得一些非間充質干細胞類型的細胞混入而導致細胞純度降低。終止時可以使用含血清的*培養基；建議使用人間充質干細胞無血清培養基（RC200101）終止消化，這樣可以在終止消化的同時保護細胞的狀態。