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熒光定量PCR檢測

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上海基屹生物科技有限公司成立于2013年6月,位于上海周浦時代醫創園,是一家銳意進取的生物高科技創新型企業,集生物技術研發、支持和服務為一體,為生命科學領域的科研人員,臨床醫學人員等提供TA克隆,亞克隆,質粒構建,RNAi干擾,miRNA定量,熒光定量PCR,SNP分型,STR檢測,基因編輯,基因敲除,動物造模等相關的技術服務的同時,我們也在不斷摸索,積極研發自己的試劑產品,如分子,蛋白,細胞等方面的常規試劑,提供給我們的敬愛的科研工作者,并且我們與國內外具有競爭力的耗材儀器廠家達成協議,保持長期穩定的合作,秉承在技術方面提供支持的同時,也同樣提供國內外優質的試劑,耗材,常規儀器、分析儀器,滿足客戶的不同需求,一站式的服務是我們經營的理念,我們將不斷提高技術人員的技術水平,銷售人員的業務能力,圓滿完成技術服務項目及產品銷售,同時,并為廣大的科研工作者提供可靠的產品和全面的技術服務,用我們過硬的技術,優質的產品,完善的服務獲得每個客戶信任,支持和厚愛,最后感謝各位的支持和幫助。
公司技術平臺特色:
分子生物學技術服務項目包括
TA克隆,亞克隆;質粒構建,熒光定量PCR檢測;RNAi干擾;miRNA檢測;SNP分型;STR檢測等;文庫構建;高通量測序。

蛋白組學技術服務項目包括:
蛋白抽提,蛋白純化,WB,Elisa,免疫組化,質譜鑒定,N端測序等。

細胞生物學技術服務項目包括:
細胞培養,細胞轉染;慢病毒包裝;腺病毒包裝; 基因編輯;基因敲除;動物造模等;

代理銷售產品:

儀器類:移液器:Eppendorf移液器、吉爾森移液器,銳寧移液器,大龍移液器,寶予德移液器

離心機:Eppendorf離心機,盧湘儀離心機,蜀科離心機,安亭離心機,ABSON迷你離心機

PCR儀:賽洛捷克PCR儀,ABI普通PCR儀、ABI 7500/ 7500Fast實時定量PCR儀

Bio-rad產品:凝膠成像系統、Bio-rad電源,Bio-rad電泳槽、Bio-rad轉移槽,玻璃板

箱體產品:一恒培養箱、一恒干燥箱,一恒恒溫搖床,安泰超凈臺,中科美菱超低溫冰箱

試劑類:

gegenetech醫藥中間體全線產品:總代理

Abbkine全線產品:上海區域一級代理

MCE小分子抑制劑,激動劑全線產品:上海區域一級代理

Bioteke核酸提取及分子試劑全線產品:上海區域一級代理

Thermo scientific部分產品:上海區域特約經銷商

NEB全線產品:上海區域特約經銷商

耗材類:

Axygen全線產品:全國特約經銷商

Corning全線產品:全國特約經銷商

BD 耗材產品:上海區域特約經銷商

NEST耗材產品:上海區域特約經銷商








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 熒光定量PCR技術與普通PCR的區別:
  理論上PCR是一個指數增長的過程,但是實際的PCR擴增曲線并不是標準的指數曲線,而是S形曲線。
  這是因為隨著PCR循環的增多,擴增規模迅速增大,Taq酶、dNTP、引物,甚至DNA模板等各種PCR要素逐漸不敷需求,PCR的效率越來越低,產物增長的速度就逐漸減緩。當所有的Taq酶都被飽和以后,PCR就進入了平臺期。由于各種環境因素的復雜相互作用,不同的PCR反應體系進入平臺期的時機和平臺期的高低都有很大變化,難以精確控制。所以,即使是96次PCR重復實驗,各種條件基本*,所得結果有很大差異,所以在實驗過程中我們不能根據zui終PCR產物的量直接計算出起始DNA拷貝數。


  熒光定量PCR的方法:
  熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種:熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類,特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物;而非特異性檢測方法是在在PCR反應體系中,加入過量熒光染料,熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射出熒光信號。前者由于增加了探針的識別步驟,特異性更高,但后者則簡便易行。
  熒光定量PCRzui常用的方法是DNA結合染料SYBR GreenⅠ的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法,在這里主要介紹這2種方法,其它方法請參考其它熒光定量PCR資料。
  1、非特異性SYBR Green I染料法
  SYBR Green I是一種結合于所有dsDNA雙螺旋小溝區域的具有綠色激發波長的染料(結合示意圖),在游離狀態下,SYBR Green I發出微弱的熒光,但一旦與雙鏈DNA結合后,熒光大大增強(作用機理圖)。因此,SYBR Green I的熒光信號強度與雙鏈DNA的數量相關,可以根據熒光信號檢測出PCR體系存在的雙鏈DNA數量。
  2、特異性Taqman水解探針法
  Taqman熒光定量技術是以Taqman熒光探針為基礎,Taqman熒光探針為一寡核苷酸,兩端分別標記一個熒光發射基團和一個熒光淬滅基團。探針完整時,發射基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;
  PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使熒光發射基團和熒光淬滅基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成*同步。從而實現定量(如下圖)。常用的熒光基團是FAM, TET, VIC, HEX。


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