熒光定量PCR檢測技術服務-Taqman探針法
- 公司名稱 上海基屹生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產地 上海
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2024/5/13 9:06:59
- 訪問次數 7363
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實時熒光定量PCR技術（Real Time Quantitative PCR）
在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
相對定量應用（Relative Quantification，RQ）
特異性熒光標記：
TaqMan法
TaqMan探針的特性：
（1）5′端標記有報告基團（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端標記有熒光淬滅基團 （Quencher, Q）
（3）探針完整，R所發射的熒光能量被Q基團吸收 ，無熒光， R與Q分開，發熒光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探針
相對定量通過內標定量：
內標（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在細胞中的表達量或在基因組中的拷貝數恒定，受環境因素影響小，內標定量結果代表了樣本中所含細胞或基因組數量。
相對定量分析方法 ：
2-ΔΔCt
前提：目標序列和內參序列的擴增效率接近100％且偏差在5％以內
1、用內參基因的CT值歸一目標基因的CT值：
ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator）
2、用校準樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值：
ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
3、計算表達水平比率：
2 –ΔΔCT=表達量的比值
服務流程：
步驟 | 客 戶 提 供 | 服 務 內 容 | 基 屹 提 供 |
1 | 新鮮的且盡量多的材料；已知的全長基因序列；盡可能詳細的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等。 | DNA/RNA提取，根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。 | |
2 | 純化好的DNA/RNA（大于5 ug/樣品）；已知的全長基因序列；盡可能詳細的背景資料：DNA/ RNA來源、豐度等。 | 根據基因序列設計特異性的引物和熒光探針。 | |
3 | 以DNA為模板，對目的基因進行熒光定量PCR檢測分析 | 提供完整的定量分析結果、實驗熒光定量擴增曲線及詳細的實驗步驟。 |
注意：客戶可根據所能提供的起始材料不同，選擇從步驟1或2啟動項目。
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