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上海科博瑞生物科技有限公司
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酶聯免疫吸附實驗(ELISA)基本原理2023/01/03
一、基本原理1971年Engvall和Perlmann發表了酶聯免疫吸附劑測定(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)用于IgG定量測定的文章,使得1966年開始用于抗原定位的酶標抗體技術發展成液體標本中微量物質的測定方法。這一方法的基本原理是:①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同
常用中性紅染色液的濃度及作用2022/12/27
不同濃度中性紅染色液的區別中性紅(Neutralred),學名“3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪鹽酸鹽”,深綠色、棕色或淺黑色粉末。溶解度為水4.0%,無水乙醇1.8%,乙二醇yi醚3.75%,乙二醇3.0%;幾乎不溶于二甲苯,其水溶液或乙醇溶液呈紅色是細胞活體染色和酸堿性指示劑的一種堿性吩嗪染料。細胞染色原理:中性紅是一種弱堿性pH指示劑,變色范圍pH6.4~8.0之間(由紅變黃)。在中性或微堿性環境中,植物的活細胞能大量吸收中性紅并向液泡中排泌,由于液泡在一般情況下呈酸性反應,因此,進入液
科博瑞淺談PCR試劑盒的使用2022/12/20
PCR檢測步驟1.將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質粒載體上,構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品,并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線;2.待測樣本與步驟1所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后,目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數,計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值,即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。其中步驟1為:將參照基因與待測目的基因片段等比例連接,克隆到同一個質粒載體上
科博瑞平板計數簡便方法2022/12/14
細菌計數細菌細胞計數是建立或監測細菌生長速度、確定種群倍增時間所必需的。細菌培養物可以通過測定活細胞數來確定,活細胞數是每mL的菌落形成單位數(CFU/mL),或者通過使用分光光度計測量600nm處的光密度(OD600)來間接分析細胞總數。必須指出的是,細菌的生長速度和培養要求在不同菌種之間可能有很大的差異,因此很難用同一種方式量化所有的細菌。下面,科博瑞提供了一個關于如何確定細菌細胞計數的一般程序。活體計數:為了計數細菌懸浮液中的CFU,從活躍的細菌液體培養物中吸取一定的體積在適當的液體介質中
大鼠(Rat)蘇氨酸(Threonine)ELISA檢測試劑盒簡介2022/12/09
檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被蘇氨酸(Threonine)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蘇氨酸(Threonine)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3
小鼠麥胚凝集素elisa試劑盒操作注意事項2022/12/07
小鼠麥胚凝集素elisa試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA),已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育,洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。1、靈敏度:最小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。2、特異性:不與其它細胞因子反應。3、重復性:板內、板間變
植物細胞色素P450(CYP450)試劑盒使用說明書,科博瑞品牌2022/12/07
檢測范圍:96T25IU/L-800IU/L使用目的:本試劑盒用于測定植物組織,細胞及其它相關樣本中細胞色素P450(CYP450)活性。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物細胞色素P450(CYP450)水平。用純化的植物細胞色素P450(CYP450)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入細胞色素P450(CYP450),再與HRP標記的細胞色素P450(CYP450)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過che底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的
科博瑞告訴你酶聯免疫試劑盒操作的通用的規則2022/12/02
酶聯免疫試劑盒是較普遍常用的藥物殘留檢測方法,與儀器分析技術相比具有快速、簡便、準確和靈敏度高等特點,但對實驗操作條件的要求比較嚴格。實驗條件主要由實驗室的操作環境和操作人員的操作熟練程度兩方面組成,但ELISA試劑盒對實驗室操作環境的要求是幾種藥物殘留檢測方法中相對較低的。由于大部分的試驗操作步驟都是由實驗人員來完成的,人為的誤差相對嚴重一些。本人結合幾年的工作實踐介紹一下進行ELISA操作的時候應該注意的問題。酶聯免疫試劑盒操作的通用的規則1.要確保微量加樣器的準確性,可以使用蒸餾水和電子天
大鼠(Rat)瓜氨酸化組蛋白H3(CH3)ELISA檢測試劑盒簡介2022/11/28
檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被瓜氨酸化組蛋白H3(CH3)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并ce底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瓜氨酸化組蛋白H3(CH3)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。樣品收集、處理及保存方法1.血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3
原代細胞培養、傳代、凍存、復蘇、分離、鑒定2022/11/25
原代細胞培養技術一、組織塊直接培養法1、取材,用Hank's液洗滌三次,并剔除脂肪,結締組織,血液等雜物。2、用手術剪將組織剪切成1mm3左右的小塊,再用Hank's液洗三次。3、將組織塊轉移至培養瓶,并貼附于瓶底面。4、輕輕將培養瓶翻轉,瓶底朝上,向瓶內注入適量的培養液,將培養瓶放置在37℃恒溫箱內培養。5、放置待組織小塊貼附后,將培養瓶慢慢翻轉平放,使組織浸入培養液中(勿使組織漂起),37℃繼續培養。二、消化培養法1、取材,用Hank's液洗滌三次,并剔除脂肪,結締組織,血液等雜物。2、用手
LCMS檢測合格譜圖的標7個標準是什么?2022/11/22
LCMS合格譜圖的標準:1、UV譜圖主峰的保留時間應大于2T0(進樣峰時間),并小于全部運行時間的4/5。2、UV譜圖的吸收波長以客戶指ding波長為準(一般為220nm),弱紫外樣品(紫外吸收在220nm是波谷,MS信號相對較強)可用ELSD譜圖交貨或以客戶要求為準。3、UV譜圖主峰吸收一般應高于100mau。對信噪比良好的樣品,可以適當降低峰高要求到高于50mau,當所有可見的UV峰都積分后仍合格的,可認為合格。4、UV譜圖中,主峰理論塔板數在10000以上(即峰寬小于0.5分鐘),峰對稱因
淺談保存胎牛血清的正確的方式2022/11/21
胎牛血清從上市以來一直備受爭議,從廠家,價格,鑒別到產品質量,產品如何正確的保存都是些大問題,今天科博瑞生物就帶領大家一起來學習如何正確的使用和保存血清。標準血清的鑒別方法:血清凝固析出的淡黃色透明液體,如將血液自血管內抽出,放入試管中,不加抗凝劑,血液迅速凝固,形成膠凍。其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清,也可于凝血后經離心取得。在凝血過程中,纖維蛋白原轉化成維蛋白塊,所以血清中無纖維蛋白原,這一點是與血漿的區別。而在凝血反應中,血小板釋放出許多物質。這些成分都留在血清中并繼續發生變化,并隨
植物組織樣本的前處理2022/11/18
一、勻漿介質一般采用0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據樣本及測定指標的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環境。二、組織勻漿的制備1、取組織塊(0.2g~0.5g)最少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭干,準確稱重,放入5ml的勻漿管中。2、按重量(g):體積(ml)=1:4的比例加入4倍體積的勻漿介質于勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。3、勻漿的方式:手工勻漿,機器勻漿。①手工勻漿:左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的
常用的培養基耗材和細胞接種量2022/11/17
我們常用的細胞培養容器有T25培養瓶、10cm培養皿、多孔板等,尤其是是多孔板,需要加多少培養基,很多同學不太確定,下面小編為大家整理了常見的培養容器的加液體積和建議接種量:耗材名稱規格培養面積(cm^2)加液體積(ml)建議接種量(×10^6)T25培養瓶底面積25cm^22551.25T75培養瓶底面積75cm^27515~303.75T175培養瓶底面積175cm^217535~408.756cm培養皿直徑6cm21.251.0610cm培養皿直徑10cm60.88~103.0415cm培
細胞傳代操作步驟2022/11/16
一、貼壁細胞傳代(以一個T25瓶為例)1、吸出原培養液;2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動培養瓶潤洗細胞,吸出PBS丟棄;3、加入1ml左右胰酶,輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞,放入培養箱消化;4、消化時間跟據細胞特性有所不同,顯微鏡下看到細胞塊中間的細胞明顯分離變圓,側立培養瓶細胞可以滑落時可終止消化,全程不要拍打培養瓶;5、加入3ml含血清的培養基終止消化,吹打細胞使之脫落并在液體里反復吹打使細胞,使之盡量呈單顆細胞的懸浮液,這時可以在顯微鏡看下;6、收集細胞懸液離心,1200rpm(約25
常用的分子生物學基本技術簡介2022/11/15
核酸分子雜交技術由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學中常用的基本技術,被廣泛應用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強度等)可按堿基互補原成雙鏈。雜交的雙方是待測核酸序列及探針(probe),待測核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因組DNA和細胞總RNA。核酸探針是指用放射性核素、生物素或其他活性物質標記的,能與特定的核酸序列發生特異性
上海科博瑞生物凍存的原代細胞應該如何培養2022/11/11
上海科博瑞生物凍存的原代細胞應該如何培養,我司以客戶為核心,以產品質量求生存,以售后服務求信譽,原代細胞通過不斷改進來提高效率,絕不以犧牲品質作為代價。原代細胞是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學和生物醫學基礎研究,如蛋白質組學、基因組學、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學研究等。一、凍存原代細胞的培養1.將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并
11條PCR引物設計原則2022/11/08
1、引物最好在模板cDNA的保守區內設計。DNA序列的保守區是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因,通過序列分析軟件(比如DNAman)比對(Alignment),各基因相同的序列就是該基因的保守區。2、引物長度一般在15-30堿基之間。引物長度(primerlength)常用的是18-27bp,但不應大于38bp,因為過長會導致其延伸溫度大于74℃,不適于TaqDNA聚合酶進行反應。3、引物GC含量在40%~60%之間,Tm值最好接近72℃。GC含量(compos
什么是人細胞ELISA試劑盒的基質效應呢?2022/11/07
在人細胞ELISA試劑盒實驗中,我們或多或少會遇到樣本濃度接近試劑盒靈敏度,樣本OD450值低于空白值的現象,尤其是血清和血漿樣本,這可能是基質效應的結果。那么什么是基質效應呢?基質是指除目標分析物之外的樣品部分。因為基質成分會顯著干擾分析過程,影響分析結果的準確性。這些效應在業內統稱為矩陣效應。這是人細胞ELISA試劑盒研發和使用中需要避免的雷。當單個樣品或少量樣品的數值低于空白值時,可能是實驗操作中出現了問題。這時候就要增加重復,提高操作技術。當許多樣品低于空白值時,應考慮基體效應的影響,建
什么是細胞凋亡,它與細胞壞死有什么區別?2022/11/01
細胞凋亡(apoptosis)指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用,它并不是病理條件下,自體損傷的一種現象,而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。細胞凋亡與壞死的區別:雖然凋亡與壞死的最終結果極為相似,但它們的過程與表現卻有很大差別。壞死(necrosis):壞死是細胞受到強烈理化或生物因素作用引起細胞無序變化的死亡過程。表現為細胞脹大,胞膜破裂,細胞內容物
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