在人細胞ELISA試劑盒實驗中,我們或多或少會遇到樣本濃度接近試劑盒靈敏度,樣本OD450值低于空白值的現象,尤其是血清和血漿樣本,這可能是基質效應的結果。那么什么是基質效應呢?
基質是指除目標分析物之外的樣品部分。因為基質成分會顯著干擾分析過程,影響分析結果的準確性。這些效應在業內統稱為矩陣效應。這是人細胞ELISA試劑盒研發和使用中需要避免的雷。
當單個樣品或少量樣品的數值低于空白值時,可能是實驗操作中出現了問題。這時候就要增加重復,提高操作技術。當許多樣品低于空白值時,應考慮基體效應的影響,建立校正曲線進行修正。基質效應的原因很復雜,有可能是樣品中的基質導致原抗體的結合能力下降,導致樣品值低于空白值的現象。因此,無法計算樣本值,該值可能為負值。
雖然原因復雜,但有方法可以用來評估基質效應。
1、線性稀釋。一般來說,抗原與捕獲抗體和檢測抗體的結合作用是很強的。樣品濃度的稀釋不影響它們的結合,但引起基質效應的非特異性結合力要弱得多。如果樣品被連續稀釋,非特異性結合將導致干燥。干擾會逐漸減少,測量值會更接近真實值。當沒有基體效應時,無論如何稀釋,測得的值都與真實值一致。但當存在基質效應時,稀釋會引起非特異性結合率的降低,測得的值會相應發生較大變化。
2、摻入回收率實驗,在該實驗中,將低、中、高濃度的分析物摻入到已測量濃度的樣品中。摻入前后測得的濃度增加與摻入濃度的比率是回收率,回收率以百分比表示。回收率在80%-120%之間才能達標。
那么我們如何避免人細胞ELISA試劑盒中的基質效應呢?
通過優化產品開發階段,可以盡可能消除基質效應。在ELISA試劑盒的研制過程中,不使用人或動物的血清和血漿作為標準曲線的稀釋劑,只能使用仿制品。我們定制的緩沖系統,這些優化的緩沖系統可以很好地消除基質效應。在檢測一種分析物時,如果其他相關因素或類似的結構因素有非特異性結合,也會導致基質效應。所以我們做了很多交叉反應,保證沒有明顯的交叉反應和干擾。而且我們的試劑盒必須通過嚴格的基質效應測試,包括線性稀釋和摻入回收率測試,并在說明書中記錄測試結果。
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