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關于SDS-PAGE凝膠電泳的常見問答2022/04/08

電泳是分離蛋白質和其他物質如核酸、嘌呤、嘧啶、一些有機化合物甚至無機離子的主要技術。目前的大部分電泳是將樣品分離到固定介質中的流動相中。聚丙烯酰胺凝膠是主要介質之一。它是一種多孔凝膠，其孔徑接近蛋白質分子的大小，提高了蛋白質的分辨率。此外，聚丙烯酰胺凝膠化學穩定性好，重復性強，對pH和溫度變化穩定，顏色觀察容易。SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）在蛋白質分子量測定、特異性蛋白質檢測、菌種鑒定等方面具有操作簡單、重現性好等特點，因此廣為使用。電泳SDS-PAGE的工作原理是什么？聚丙烯酰

Western Blot實驗步驟2022/03/31

本文摘要蛋白質印跡技術（免疫印跡實驗）又稱為WesternBlot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。WesternBlot主要用于檢測或分析蛋白，應用領域集中在基因表達研究、抗體活性檢測和疾病診斷等。01蛋白質印跡基本流程圖02westernblot步驟樣品準備：Tanon連續梯度預制膠（4-20%10孔/15孔/17孔）；（4-12%10孔/15孔/17孔）TanonMops/MES電泳緩沖液（粉劑）Tanon預染蛋白MarkerTanon4×LDSLoadingBu

熒光定量PCR實驗中CT值出現異常的原因分析2022/03/30

熒光定量PCR是生物醫學中常用的檢測核酸病毒的方法之一，由此，這幾年PCR儀也成了近幾年臨床檢測和分子生物學研究的主要實驗室設備。我們知道CT值是PCR擴增曲線中的重要參數，那么CT值是什么？它與PCR擴增存在什么關系？為什么有的時候基因擴增實驗中會出現CT值異常甚至缺少CT值的情況？什么是CT值？在熒光定量PCR擴增實驗中，當擴增產物的熒光信號（Fluorescencesignal）達到設定的熒光閾值（FLUORESCENCEthreshold）時的所對應的擴增循環數（CycleThresho

細胞培養中常見的問題解答2022/03/30

標簽：細胞細胞培養液氮培養基細胞培養是生命科學實驗中的基礎實驗，在細胞生長過程中，很多因素都會造成細胞生長不良。下面簡單歸納一下細胞生長不良的原因及對應的解決方案。常見問題一：為什么細胞解凍后缺少活力，活細胞占比較低？這種現象可能主要由以下幾種原因所導致：1.培養物凍存液等質量欠缺。解決方案：a.確保用來制備儲存物（凍存液）的起始培養物需要保證其健康、無微生物污染、處于生長對數期后期狀態。b.收獲細胞時需要小心翼翼，避免細胞損傷。2.儲存物凍存方法不當解決方案：a.在液氮冷凍細胞時，確保細胞、培

真空離心濃縮儀的原理和應用2022/03/29

溶劑去除是制藥、化學和生物技術行業廣泛應用中的過程。盡管使用了多種樣品形式和溶劑，但沒有一種單一的溶劑去除技術可以提供通用的解決方案。隨著冷凍干燥和離心濃縮技術的不斷成熟，結合真空泵、冷阱和加熱蒸發設備，所開發的新一代高功率冷阱、真空離心濃縮儀等儀器，既提高了蒸發性能又改善了樣品完整度，這類儀器還進一步地提升了溶劑回收率，從而減少了蒸發-濃縮過程對環境的影響。只有充分了解離心濃縮儀的基本原理與應用才能更好地在實驗中發揮它的作用。溶劑去除的原理在溶劑去除過程中，以熱量的形式施加能量，使液體蒸發成氣

細胞周期檢查點及其調節機制2022/03/25

細胞周期檢查點：§細胞通常在體積翻倍時進行分裂，但實際上細胞分裂過程的控制非常復雜且精確。細胞分裂的所有過程或步驟都是按順序發生的，并且細胞知道何時進行以及何時等待和停止細胞分裂。稱為細胞周期。§在DNA復制完成之前或當染色體或紡錘體纖維受損時，連續的細胞分裂會給細胞甚至有機體帶來災難性的后果。因此，在進行細胞分裂之前，細胞的各個方面都要通過其內部機制進行檢查。§檢查點是真核細胞周期中的幾個點之一，在這些點上，可以停止細胞向細胞周期下一階段的進程，直到條件有利。§在循環期間會發生許多停止，以評估

Southern Blot原理和實驗步驟2022/03/25

SouthernBlot印跡定義：涉及將凝膠上分離的特定DNA、RNA或蛋白質轉移到載體膜上以進行檢測或鑒定的分析技術稱為印跡。變性片段從凝膠中轉移到載體膜上的過程使其易于使用探針或抗體進行分析。根據要分離的物質，印跡技術可能是——Southern印跡、Northern印跡或Western印跡，它們分別分離DNA、RNA和蛋白質。SouthernBlot是一種用于分子生物學、免疫遺傳學和其他分子方法的分析技術，用于從DNA樣品的混合物或DNA鏈中的特定堿基序列中檢測或鑒定感興趣的DNA。該技術由

實驗室細胞培養的儀器和實驗室耗材有哪些？2022/03/25

用于動物細胞培養的實驗室儀器設備和實驗室耗材有很多種，進行動物細胞培養所需的基本設備如下：設備有益設備有用的附加設備振蕩培養箱生物安全柜低溫冷凍柜顯微鏡細胞計數儀玻璃器皿清洗機滅菌器真空泵菌落柜臺清洗儀器二氧化碳培養箱共聚焦顯微鏡殺菌干燥箱制備和質量控制熒光激活細胞分選儀離心機溫度記錄純水機細胞生物反應器液氮罐移液器和自動移液器水浴鍋動物細胞培養實驗室所需基本設備清單：1.無菌工作區/細胞培養罩（即層流罩或生物安全柜）2.培養箱（推薦使用潮濕的二氧化碳培養箱）3.水浴4.離心機5.冰箱和冰柜(–

關于蛋白電泳中的SDS聚丙烯酰胺凝膠2022/03/24

蛋白電泳是研究蛋白質性質的一種相對簡單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學、生物化學和分子生物學的主要工具。通過電泳分離蛋白質是基于這樣一個事實，即帶電分子將在施加電場時通過基質遷移。蛋白質電泳分離的基質是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內部的聚合形成了一個交聯的微孔網絡。這種孔隙網絡允許小蛋白質分子快速通過，同時減緩較大蛋白質的遷移。這導致基于其分

紫外光譜的原理及其應用2022/03/23

紫外光譜是紫外分光光度計等分析化學中的重要工具。UV（紫外線）光譜的另一個名稱是電子光譜，因為它涉及將電子從基態提升到更高的能量或激發態。在本文中，我將解釋紫外光譜的基本原理、工作原理和所有應用。一、紫外光譜簡介紫外光譜是一種吸收光譜，其中紫外線區域（200-400nm）的光被分子吸收。紫外輻射的吸收導致電子從基態激發到更高能態。被吸收的紫外線輻射的能量等于基態和高能態之間的能量差（deltaE=hf）。通常，有利的躍遷是從MAX占據分子軌道(HOMO)到LOW未占據分子軌道(LUMO)。對于大

ISS原位測序原理和方法應用2022/03/23

原位測序(ISS)是一種新方法，通過該方法直接在固定組織或細胞樣品的切片中對mRNA進行測序。原位測序原理關鍵是測序信息與其位置之間的聯系—在一些情況下，是亞細胞位置。這與傳統測序不同，后者在將樣本從內源環境中移除后分析樣本，從而丟失位置信息。ISS由斯德哥爾摩大學開發，可同時量化數百個mRNA轉錄本，并以單細胞分辨率在空間上解析它們。該方法使用四種熒光染料來指示核酸堿基、RNA掛鎖探針和催化在掛鎖探針位置形成環化DNA的酶，這種機制稱為滾環擴增。使用成像技術讀取產生的熒光DNA。空間檢測技術斯

什么是生物安全柜？2022/03/17

生物安全柜是一種通風的外殼，可保護用戶、產品和環境免受因處理潛在危險微生物而產生的氣溶膠的影響。連續氣流通過HEPA過濾器排放到大氣中。三種保護狀態對柜內有害物質的個人防護避免樣品污染的產品保護。環境保護，防止機柜內的污染物。生物安全柜在處理生物制劑時根據其容納能力分為三類。1級機柜提供個人和環境保護。用于處理低到中等風險的生物制劑。生物安全等級：1、2和3類2機柜提供人員、環境和產品保護。用于處理低到中等風險的生物制劑。生物安全等級：1、2和3級3級機柜一個高度專業化的實驗室“手套箱”。3級機

RFID標簽在實驗室中的應用2022/03/15

對于依賴速度和準確性來掃描大量庫存的實驗室來說，RFID標簽代表了對大多數傳統標簽方法的巨大改進。RFID技術最初是在二戰期間構思的，已被用于各種行業，從防盜檢測和可掃描房間鑰匙到核對材料的跟蹤。實驗室中的RFID標簽在實驗室中，RFID標簽具有許多優勢，包括能夠從遠處同時跟蹤樣品，而無需直接視線。這項技術通過使用無源RFID嵌體來實現，該嵌體由嵌入在標簽中的集成電路（芯片）和天線組成，標簽發出無線電信號以響應讀取器，然后讀取器處理所有樣品的相關信息。從而可以輕松地通過這些標簽來節省時間并提高跟

實驗室移液器使用10種技巧2022/03/15

毫無疑問，移液器是生物學研究的重要的工具之一。它們有多種設計，用于無數研究領域。雖然許多液體處理指南都強調移液器維護的重要性，但移液器技巧同樣重要。下面，我們分享一些移液器的使用方法，移液操作的10種技巧，以改進您的移液技術。1.選擇合適的移液槍和吸頭：移液槍與移液器吸頭的匹配度是移液準確度的關鍵。如果吸頭和移液槍不匹配，或使用質量差的吸頭，可能會影響到吸頭和移液槍之間的密封性能。良好的移液器吸頭可確保適當的密封，從而最大限度地減少因泄漏引起的樣品損失。2.根據液體密度適當校準移液器：如果液體的

二代測序降低實驗成本方案2022/03/15

隨著成本穩步下降，二代測序NGS變逐漸增多，但如果經常使用，它仍然是一種成本昂貴的工具。其實在實驗室中，掌控好以下幾個環節也是可以節省NGS的總體成本的。這里提供一些關于降低二代測序-NGS成本的方法可供參考。1.樣品質量控制樣本的質量直接關乎到二代測成本，質量較差的樣本，會間接增加測序步驟和處理時間。所以，降低成本的簡單方法之一就是從樣品提取開始，通過部署于樣品類型和目標核酸的樣品純化方法，來確保用于下游分析的核酸純度和產量。NGS文庫制備過程中發生的酶促反應對所用樣品的數量和質量較敏感。因此

生物反應器培養中支原體污染對細胞有什么影響？2022/03/14

支原體抗體又稱Mollicutes，它是一種微小的并可以自我復制的細菌（直徑0.1–0.3µm），一般在生物反應器哺乳動物細胞培養物中很難進行檢測和去除。支原體由于缺乏細胞壁，使它們可以輕易穿過0.1µm–0.22µm的除菌過濾器或濾膜。由于支原體具有較小的基因組，難以進行選擇復制和代謝，所以，通常需要宿主細胞才能生存。某些支原體物種已引起細胞培養物的隱匿性污染，尤其是在基礎研究環境中，對細胞健康或細胞培養性能的可見變化很小。然而，支原體抗體可以通過幾種潛在機制以更微妙的方式改變培養性能和產品質

如何選擇基因測序方法2022/03/14

當今的主要技術基因測序技術相對成熟，DNA測序的主要方法有Sanger測序、下一代測序(NGS)和長讀長測序。如何選擇基因測序方法。以下是對這些方法、優缺點和重要標準的簡要回顧，可幫助您權衡下一個測序選擇。選擇測序方法的標準選擇測序方法的標準很多，取決于研究人員及其項目的性質。正在研究的生物學問題是關鍵。PacificBiosciences副總裁JonasKorlach說：“研究的背景決定了使用哪種類型的測序，因為不同的測序方法具有不同的特征來推動選擇。”常見的標準包括測序時間、通量、成本和準確

吞噬細胞、巨噬細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞的區別與功能2022/03/10

吞噬細胞、巨噬細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞的區別與功能免疫細胞是生物體內所存在的一種重要細胞，它們的主要作用是參與對抗異物或清除死細胞。常見的免疫細胞可以分為以下幾種：吞噬細胞、巨噬細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞三大類。它們的區別與功能分別是什么？吞噬細胞和吞噬作用當身體被傳染性病原體（例如某些微生物）破壞時，它們會遇到免疫系統的各個部分。一般來說，吞噬細胞是一個廣義的術語，指的是任何可進行吞噬作用的細胞。吞噬作用。在吞噬作用中，吞噬細胞吞噬大的原核細胞，如細菌，或真核細胞，如酵母細胞或死細胞

細胞培養自動化的優勢和流程2022/03/10

細胞培養自動化的優勢和流程涉及細胞生物學、細胞信號傳導、藥物、蛋白質表達、癌癥生物學、再生醫學、納米材料等科學領域的實驗室嚴重依賴細胞培養物的使用。已經建立了細胞培養自動化系統的方法，以執行建立、生長和維護細胞培養的過程，取代了以前大量依賴人工的系統。自動化系統可以執行曾經由實驗室技術人員負責的過程的所有關鍵部分，例如在液體中培養培養物、電鍍培養物、稀釋樣品、將培養物放入孔中等等。這些自動化方法因其能夠節省時間和資源以及提高樣品的準確性和質量而廣受歡迎。如果沒有自動化，通過細胞培養生產細胞和細胞

GFP抗體在蛋白質標記應用中的常見問題2022/03/10

GFP抗體在蛋白質標記應用中的常見問題標簽：抗體蛋白質結構科學科普GFP抗體GFP適合于蛋白質標記，這是該抗體的天然優勢。雖然它非常適合實時成像，例如，作為TP53MITE-seq屏幕的報告器，其他應用導致GFP熒光猝滅，這使得有必要使用抗GFP抗體。組織樣本的冷凍保存、組織學制備和固定劑的使用通常會導致GFP熒光*或部分喪失，因此需要使用抗GFP抗體來獲得可靠的結果。通過蛋白質印跡檢測GFP標記的蛋白質和通過免疫沉淀研究蛋白質-蛋白質相互作用也需要使用GFP抗體。抗GFP抗體可用作多克隆或單克