成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產品推薦:氣相|液相|光譜|質譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養箱


化工儀器網>技術中心>操作使用>正文

歡迎聯系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

Western Blot實驗步驟

來源:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司   2022年03月31日 12:08  

本文摘要
      蛋白質印跡技術(免疫印跡實驗)又稱為Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。Western Blot主要用于檢測或分析蛋白,應用領域集中在基因表達研究、抗體活性檢測和疾病診斷等。
01  蛋白質印跡基本流程圖
 
 
02 western blot步驟
樣品準備:

  • Tanon 連續梯度預制膠(4-20% 10 孔/15 孔/17 孔);  (4-12% 10 孔/15 孔/17 孔)

  • Tanon Mops/MES 電泳緩沖液(粉劑)

  • Tanon 預染蛋白 Marker

  • Tanon 4×LDS Loading Buffer

  • Tanon 快速蛋白染液

  • 預制膠規格的選擇

 
    在不使用預制膠的情況下,需要自行配置適合蛋白電泳SDS膠,采取自制膠的方法從加入緩沖液到制膠完成這一過程大概需要花費將近1個小時。并且由于配比過程中的認為誤差容易產生濃度不均一,穩定性差,已出現外八型、笑臉型等條帶。采用天能系列預制膠具有較高的穩定性和均一性,使蛋白電泳條帶更清晰銳利,使得條帶更加均勻。還有重要的一點就是可以免去制膠的時間,大大提升了實驗效率。
    蛋白轉印使用天能VE-586轉移電泳槽主要優勢在于:它可以在不埋冰的情況完成的蛋白電泳,如果配合快速轉膜液,整個電泳過程只需不到30分鐘,可同時轉印4塊膠,操作方法也比較簡便。在縮短轉印時間的同時,實現了蛋白樣品的高效轉印。
 
蛋白電泳
目前常用的是SDS-PAGE(十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳),蛋白質會根據分子量大小分開,分子量的蛋白會留在膠的下部,分子量大的會在膠的頂部。
 
 
04轉膜
    轉膜主要是將蛋白質從凝膠轉移到膜上,常用的是NC膜和PVDF(聚偏氟乙烯),由于膜與蛋白質高度親和的能力,所以更容易與蛋白結合。為了便于觀察電泳效果和轉膜效果,可以使用蛋白預染Marker,以方便判斷蛋白分子量大小。
     蛋白預染的傳統方法是膜將置于脫色搖床上,用1×麗春紅染液振蕩預染5min。然后用水沖洗掉沒染上的染液就可看到膜上的蛋白。
     蛋白轉印使用天能VE-586轉移電泳槽主要優勢在于:它可以在不埋冰的情況完成的蛋白電泳,如果配合快速轉膜液,整個電泳過程只需不到30分鐘,可同時轉印4塊膠,操作方法也比較簡便。在縮短轉印時間的同時,實現了蛋白樣品的高效轉印。
 
 
05封閉
     轉印完成后,為阻止抗體的非特異性結合,需要用脫脂牛奶或者牛血清蛋白(BSA)作為緩沖液來填充封閉空白結合位點。
     加入二抗稀釋液(一般1:1000甚至1:10000用TBST稀釋),放在搖床上,室溫下孵育1h后,用TBST在室溫下脫色搖床上洗兩次,每次10min;再用TBS洗一次,10min,即可進行化學發光反應。
      注意:二抗孵育之后也要注意充分洗滌,一般30min左右為宜,如果洗膜不夠充分,顯影時會造成雜色背景。
 
 
06 ECL化學發光反應:
     在工作臺上鋪一張保鮮膜,將PVDF膜置于保鮮膜上。將ECL的A和B兩種試劑在EP管內等體積混合(注意吸完A試劑后吸B試劑前要更換槍頭),然后均勻滴在PVDF膜的蛋白面,反應1~2min后,將PVDF膜上多余的ECL發光液吸干,進行固定。
 
 
07凝膠圖象分析
將膠片進行掃描或拍照,使用凝膠成像儀進行成像分析。常用的凝膠成像儀有天能系列的T4600,T5200等系列。 


蘇州阿爾法生物13年專注于生物實驗室儀器與試劑耗材供應,天能系列產品主要包括Tanon凝膠成像儀,ECL發光液,快速轉印緩沖液,上樣緩沖液,蛋白MARK等。


免責聲明

  • 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
  • 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
  • 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。
企業未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 亚洲中文自拍另类aⅴ片| 男女做哎爱过程图片| 在教室伦流澡到高潮H强圩动漫| 日韩欧美一区二区三区久久| 黄色91破解版| 午夜无码片在线观看影院| 好硬啊进得太深了A片无码公司| 亚洲熟少妇在线播放999| 日韩欧美国产一级片| 调教人妻中文字幕| 在线日韩国产图区精品91| 国内精品51视频在线观看| BT7086福利二区最新| 亚洲看片无码在线视频| A片试看50分钟做受视频| 北条麻妃熟女人妻AV在线| 人妻一区日韩二区国产欧美的无码| 成年免费观看黄页网站| 理论片网站国产麻豆| 韩国一级黄色大片| 欧美人妻激情在线| 午夜神马| 亚洲国产精品久久久久秋霞影院| 亚洲精品久久久久久久蜜桃臀| 国产欧洲野花视频WWW| 国产日韩欧美另类| 秋霞久久精品理论电影| 国产麻豆精品精东影业AV网站| 视频一区国产第一页| 色情无码WWW视频无码小说| 亚洲国产熟妇无码一区二区69| 欧美日韩亚洲综合国产人| 91久久精品国产91久久性色tv| 狠狠色丁香婷婷综合| YY4408理论无码私人青苹果影院| 又硬又粗进去好爽A片免费多人玩| 色爽黄1000部免费软件下载| 国产JLZZJLZZ视频免费看| 久久日本无码一区二区三区| 国产亚洲精品久久AV| 欧美激情久久久久久久久|