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2016
02-24

ELISA檢測的樣本
ELISA試劑盒通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準確性的*步。1、血清血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本，處理也比較簡單。用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上，使血清析出。（將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。
2016
02-22

基因組DNA轉染
本實驗要加入PSV2-neo、DNA與外源DNA共轉染受體細胞，這樣可使受體細胞獲得新霉素(neo)基因的抗藥性，這樣即使癌基因沒有出現明顯的“轉化灶”，也可測出轉入的外源性基因的抗neo的標記。而且還可利用被neo基因導入的受體細胞通過G418選擇培養篩選轉化的細胞建立細胞株。若以獲取“轉化灶”為目的，可不加入PSV2-neoDNA只需將從癌細胞中提取的基因組DNA導入受體細胞即可，其方法如下：1.基因組DNA轉染：(1)配制磷酸轉染液NaCl8.0gHepes5.0g用時現配，pH很重要一定
2016
02-19

制備單抗的方法
獲得穩定的雜交瘤細胞系后，即可根據需要大量單抗，以用于不同目的。一、單抗的大規模制備目前大量制備單抗的方法主要有兩大系統，一是動物體內法，這是國內外實驗室所廣泛采用；另一是體外培養法。1、動物體內單抗的方法迄今為止，通常情況下均采用動物體內單抗的方法，鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得，因此使用的動物當然BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內，在小鼠腹腔內生長雜交瘤，并產生腹水，因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便
2016
02-17

蛋白質沉淀法
其他沉淀法一．等電點沉淀法兩性電解質分子上的凈電荷為零時溶解度zui低，不同的兩性電解質具有不同的等電點，以此為基礎可進行分離。如工業上胰島素時，在粗提液中先調PH8.0去除堿性蛋白質，再調PH3.0去除酸性蛋白質。ELISA試劑盒利用等電點除雜蛋白時必須了解制備物對酸堿的穩定性，不然盲目使用十分危險。不少蛋白質與金屬離子結合后，等電點會發生偏移，故溶液中含有金屬離子時，必須注意調整PH值。等電點法常與鹽析法、有機溶劑沉淀法或其他沉淀方法聯合使用，以提高其沉淀能力。二．生成鹽復合物沉淀法1．金屬
2016
02-15

腫瘤免疫作用
機體對腫瘤的免疫分為先天性免疫及適應性（后天性）免疫。先天性免疫是機體固有的、經遺傳獲得的免疫力，適應性免疫是機體受到抗原刺激后產生的免疫力。先天性免疫由多種細胞及體液因子組成，其中自然殺傷細胞（naturekilercel，NKcel）在腫瘤免疫中發揮著重要作用。后天性免疫有T淋巴細胞和B淋巴細胞組成，T淋巴細胞中的細胞毒T淋巴細胞（cytotoxicTlymphocyte，CTL）在腫瘤免疫中發揮著核心作用。樹突狀細胞（dendriticcel，DC）是專職的抗原遞呈細胞，既參與先天性免疫，
2016
02-03

肝癌干細胞的特性
從肝癌干細胞的zui初報道以來，針對其的研究已經成為研究者熱點關注的領域，相關的報道也逐漸增多。1.高致瘤性事實上，致瘤性是zui令人關心的問題，通常實驗采取將腫瘤細胞移植到免疫缺陷小鼠體內來驗證不同細胞群的致瘤性。一般情況下成瘤實驗需要大于10的腫瘤細胞才能致瘤，而極少量富集的腫瘤干細胞就能在小鼠體內成瘤。因此，腫瘤干細胞有時亦可稱為“腫瘤起始細胞（tumorinitiatingcels）”。值得注意的是，目前各個研究小組的對成瘤所需細胞數的報道并非*一致，Huh7和PLC/PRF/5的SP細
2016
02-01

病毒的致病作用
病毒侵入機體后，必須進入易感細胞內復制增殖。病毒在細胞內增殖，可使細胞出現損傷、死亡、轉化等反應，同時細胞也產生干擾素等抑制病毒復制。病毒在與機體發生相互作用的過程中，能改變或損傷宿主細胞并由此引起疾病，稱為病毒感染。病毒的致病作用（一）病毒對細胞的作用1.病毒對宿主細胞代謝的抑制作用某些病毒主要指DNA病毒感染宿主細胞后，通過與宿主細胞競爭RNA聚合酶和細胞轉錄因子，抑制編碼宿主細胞蛋白質的基因轉錄，但目前對抑制宿主基因細胞轉錄的機制尚不十分清楚。許多病毒包括DNA病毒和RNA病毒均可抑制宿主
2016
01-29

MRD的檢測方法
微小殘留病(minimalresidualdisease，MRD)一般是指白血病患者在經過治療后體內殘存白血病細胞的狀態，被認為是白血病復發及影響預后的主要原因。廣義而言，此含義還可包括其他惡性腫瘤。MRD被認為是在傳統檢測方法所能檢測到的腫瘤細胞水平以下的長期存在的腫瘤細胞，這些腫瘤細胞一旦增殖到一定程度能引起復發。因此，有效利用MRD檢測能夠很好地指導治療以增加*，提高療效，特別是對HSCT的療效評估方面也有重要的意義。MRD的檢測方法MRD的檢測方法很多，主要有細胞形態學、細胞遺傳學、FI
2016
01-27

細菌的形態和大小
細菌細菌是自然界中分布zui廣、數量zui大的一類微生物．也是環境工程中所涉及的zui重要的原核微生物。1．細菌的形態和大小在正常生長條件下，細菌主要有四種形態：球狀、桿狀、螺旋狀、絲狀。據此，細菌可分別命名為球菌、桿菌、螺旋菌、絲狀菌。(1)球菌按分裂后細胞的排列方式不同，球菌可分為單球菌、雙球菌、四聯球菌、八疊球菌、鏈球菌、葡萄球菌。(2)桿萄桿菌有單桿菌(分長桿菌和短桿菌)、雙桿菌和鏈桿菌。桿菌的兩端或一端有平截狀、圓弧狀、分枝狀、膨大呈棒槌狀。(3)螺旋菌螺旋菌呈螺旋卷曲狀。根據其彎曲程
2016
01-25

微生物的呼吸作用
微生物的呼吸作用實質上就是細胞內物質的分解、氧化和釋放能量的過程，是新陳代謝的異化作用。呼吸作用中物質的氧化主要是以脫氫方式(同時失去電子)實現的，即在化學反應中一種物質脫氫同時失去電子被氧化，另一種物質得到氫和電子被還原。在此過程中釋放的能量主要被貯存在ATP(三磷酸腺苷)中，滿足各需能代謝反應的需要，未被貯存的能量則以熱量形式散發掉。根據生物氧化中zui終氫受體(或zui終電子受體)性質的不同，可以把呼吸類型分為發酵、有氧呼吸和無氧呼吸三類。根據微生物與氧氣的關系，微生物可分為好氧微生物、厭
2016
01-22

微生物生長的測定
微生物生長是細胞物質有規律地．不可逆增加，導致細胞體積擴大的生物學過程，這是個體生長的定義。繁殖是微生物生長到一定階段，由于細胞結構的復制與重建并通過特定方式產生新的生命個體，即引起生命個體數量增加的生物學過程。微生物的個體生長特點是時間裉短，很快就進入繁殖階段，生長與繁殖難以分開。因此，常常以群體生長作為細菌生長的指標，除有特定的目的以外．在微生物的研究和應用中，只有群體的生長才有意義，而群體生長常常表現為細胞數目或物質的增加。對細胞物質的增加可以用生物量來表示。對于單細胞微生物生長進行測定時
2016
01-20

轉座因子的轉座過程
轉座因子是存在于染色體DNA上可以自主復制和位移的基本單位。轉座因子不同于質粒等一些可移動的因子，當質粒或某些病毒遺傳物質成為宿主染色體一部分后，它們是隨著染色體復制．是被動的，轉座因子不但可以在一條染色體上移動，而且可以從一條染色體跳到另一條染色體上，從一個質粒跳到另一個質粒或染色體上，甚至可以從一個細胞跑到另一個細胞。轉座因子介導的基因轉移過程稱為轉座作用．在原核生物和真核生物中普遍存在．并通過缺失、插入、移動、交換等形式直接或間接地促進DNA重組事件的發生。因此在代謝工程操作中，常將外源基
2016
01-18

羊水細胞的培養
羊水細胞(amnioticcell)是羊水中胎兒脫落細胞的總稱，可分為上皮樣細胞、成纖維細胞樣細胞、羊水樣細胞。羊水細胞主要用于胎兒染色體疾病和先天性代謝疾病的產前診斷。一、材料與試劑1．培養液PRMI1640、HamF10、HamF、12等培養液均可。一般添加20%胎牛血清或30％小牛血清，谷氨酰胺1mmol／L，青霉素50U／ml，鏈霉素50μg／ml。2．分層液比重為1．077g／ml的Ficoll一Urografin溶液。3．清洗液1：1混合的培養基與胎牛血清。4．消化液0．25％胰酶一
2016
01-15

ELISA試劑盒樣本前處理
ELISA試劑盒樣本前處理是酶聯免疫試驗中關鍵的一步，稍有不慎將導致實驗滿盤皆輸，如何安全，快捷的處理樣本，我們公司是這樣做的。1均質組織樣本：肉、肝食品類切細，用絞肉機反復絞碎，混合均勻。水產樣本：去除樣品的非食用部分，食用部分切細，用均質器均漿；原料表面較臟時,需適當用蒸餾水清洗。蛋類：鮮蛋去殼，蛋黃和蛋白充分混勻。水果、蔬菜類：先用水洗去泥沙，然后除去表面的水分，取食用部分。2振蕩提取將提取溶劑加入到裝有樣品的具塞容器中，振蕩，ELISA試劑盒使提取溶劑與容器內的樣品充分接觸以深入到樣本組
2016
01-13

樣品蛋白含量的測定
測定方法如下：一、制作標準曲線1、從-20℃取出1mg/mlBSA，室溫融化后，備用。ELISA試劑盒2、取18個1.5ml離心管，3個一組，分別標記為0μg，2.5μg，5.0μg，10.0μg，20.0μg，40.0μg。3、按下表在各管中加入各種試劑。4、混勻后，室溫放置2min。在生物分光光度計上比色分析。二、檢測樣品蛋白含量1、取足量的1.5ml離心管，每管加入4℃儲存的考馬斯亮藍溶液1ml。室溫放置30min后即可用于測蛋白。2、取一管考馬斯亮藍加0.15mol/LNaCl溶液100
2016
01-08

培養細胞的分化
(一)培養細胞的分化個體從一個受精卵通過發育形成組織、器官等特殊結構和進行功能的過程，也可看做為細胞分化表達的過程。至動物出生時，機體內的大部分細胞已經完成形態學分化，之后體內每一個細胞都受到體外環境、體內神經一體液因素、細胞與局部微環境相互作用1個方面的影響與調節，共同控制著體內細胞增殖、代謝和功能狀態，維持著細胞的分化特征。細胞離體培養因環境的改變，失掉上述在體內時的關系，細胞的分化可能發生如下的變化：1．不適應(inadaptation)表現為細胞在原體內時所擁有的分化特性減弱或不明顯，如
2016
01-06

Northern雜交的檢測
(一)原理Northern雜交(Northernblotting)是利用DNA可以與RNA進行分子雜交來檢測特異性RNA的技術，首先將RNA混合物按它們的大小和分子量通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，分離出來的RNA轉至尼龍膜或硝酸纖維素膜上，再與放射性標記的探針雜交，通過雜交結果可以對表達量進行定性或定量。Northern雜交是用來測量真核生物RNA的量和大小估計其豐度的實驗方法，可以從大量的RNA樣本同時獲得這些信息。其基本步驟包括：①完整mRNA的分離；②根據RNA的大小通過瓊脂糖凝膠電泳對RN
2016
01-04

白介素一2
(一)3H—TdR摻入法1．原理白介素一2(interleukin一2，IL-2)主要由活化T細胞產生，又為T細胞增殖所必需，故稱T細胞生長因子(Tcellgrowthfactor，TCGF)。IL一2產生的水平反映Tll胞的功能，不僅是免疫調節重要的研究對象，而且與臨床多種疾病密切相關。IL一2依賴細胞株是C578L／6來源的小鼠殺傷性T淋巴細胞(cytotoxicT—lymphocyteline，CTL)細胞系，由Gills，1977年建立，只有在IL-2存在的培養基中才能生長。因此可作為指
2015
12-31

染色體標本制備
細胞遺傳學毒性檢測主要是在分子水平檢測毒性物質對細胞遺傳性的影響；在遺傳性疾病的分子診斷和致病機制研究中，已得到廣泛應用。常用的檢測技術包括染色體畸變分析、微核試驗、基因突變和DNA斷裂檢測等。*節染色體標本制備染色體是在顯微鏡下可見的細胞有絲分裂過程中出現的結構。對染色體檢查分析之前，需要進行染色體標本制備。通常情況下，都是利用外周血淋巴細胞進行染色體核型分析。正常情況下．人體外周血淋巴細胞不再分裂，但植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)可刺激血中的淋巴細胞轉化成淋巴母細
2015
12-28

無菌操作室的注意事項
1)無菌操作室的注意事項①嚴格無菌操作，防止微生物污染；操作人員進入無菌室應先關掉紫外燈。②無菌室應設有無菌操作間和緩沖間，無菌操作間潔凈度應達到10000級，室內溫度保持在20—24℃，濕度保持在45％～60％。超凈臺潔凈度應達到100級。ELISA試劑盒③無菌室應保持清潔，嚴禁堆放雜物，以防污染。嚴防一切滅菌器材和培養基污染，已污染的停止使用。④無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無菌室的潔凈度符合要求。⑤需要帶人無菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，應包扎嚴密，并應經過適宜的方法滅

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