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撫生試劑-小鼠肝糖原合成酶ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)方法2014/06/09: 小鼠肝糖原合成酶ELISA試劑盒1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)

撫生試劑-ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-42014/06/06: ELISA法檢測(cè)白細(xì)胞介素-4白細(xì)胞介素-4(1L-4)是Th2細(xì)胞分泌的一類重要細(xì)胞因子，可促進(jìn)巨噬細(xì)胞的黏附，介導(dǎo)IgE的產(chǎn)生，在局部炎性細(xì)胞浸潤中發(fā)揮作用，同時(shí)IL-4可使IgE受體表達(dá)增強(qiáng)，誘導(dǎo)嗜酸細(xì)胞聚集和遷移。[檢測(cè)方法]ELISA法[方法學(xué)原理]在微孔反應(yīng)板上包被抗人IL-4單克隆抗體，待測(cè)標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的IL-4會(huì)與抗人IL-4單克隆抗體結(jié)合，游離的成分被洗去，同時(shí)加入生物素化的抗人IL-4抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。生物素與親和素特異結(jié)合，抗人IL-4抗體與結(jié)合在單克隆抗

撫生試劑-探針標(biāo)記各種標(biāo)記物及選擇2014/06/05: 探針標(biāo)記各種標(biāo)記物及選擇1．核素標(biāo)記物放射性核素是目前應(yīng)用zui多的一類探針標(biāo)記物。放射性核素的靈敏度*，可以檢測(cè)到10-14～10-18克的物質(zhì)，在zui適條件下可以測(cè)出樣品中少于1000個(gè)分子的核酸含量。常用標(biāo)記核酸探針的核素有32P、3H、35S，在Southern印跡雜交中以“Pzui常用。還應(yīng)根據(jù)標(biāo)記方法的不同選擇相應(yīng)標(biāo)記方位的核素，一般情況下，大多數(shù)標(biāo)記方法需要的是a—32P，而5，末端標(biāo)記必須是r-32P。2．非放射性標(biāo)記物多年來，科學(xué)家們致力于尋找一些安全、可靠、靈敏度高的物質(zhì)代

撫生試劑-酶標(biāo)記熒光信號(hào)放大技術(shù)的基本原理2014/06/04: 酶標(biāo)記熒光信號(hào)放大技術(shù)的基本原理酶標(biāo)記熒光(enzyme-labeledfluorescent)信號(hào)放大系統(tǒng)是另一種*的免疫熒光信號(hào)放大技術(shù)。其原理是酶促反應(yīng)(酶+底物)過程中在酶活性部位產(chǎn)生熒光沉積物，這樣一個(gè)過程稱為酶標(biāo)熒光。目前可獲得許多產(chǎn)生熒光和發(fā)光的酶底物，例如ELF-97磷酸鹽、X—Gal、BCIP／NBT、堅(jiān)固紅、堅(jiān)固藍(lán)等。圖3—11顯示水溶性的ELF-97磷酸鹽底物通過磷酸酶的作用，轉(zhuǎn)為它的水解產(chǎn)物ELF-97乙醇。這種高度不溶性的二維分子在磷酸酶活性部位形成一種強(qiáng)黃綠色熒光沉積

撫生試劑-免疫酶細(xì)胞化學(xué)酶標(biāo)抗體法2014/05/30: 免疫酶細(xì)胞化學(xué)酶標(biāo)抗體法酶標(biāo)抗體的染色可分為直接法和間接法。直接法是將酶直接標(biāo)記在每一種抗體上，間接法是將酶標(biāo)記在第2抗體上，檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)的特定抗原物質(zhì)。間接法所用的第l抗體是對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)某種抗原的特異性抗體(80％～90％的抗血清系由家兔制得，而絕大多數(shù)單克隆抗體系由小鼠制備)；第2抗體則為第1抗體[家兔和(或)小鼠的IgG]的抗體。所以，只要不同的第1抗體均來自同一種屬，同一標(biāo)記的第2抗體就能用來顯示不同特異性抗原的存在，這樣可避免直接法中標(biāo)記每一種第1抗體的麻煩，并且提高了敏感度。目前的

撫生試劑-酵母菌免疫染色的操作步驟2014/05/29: 酵母菌免疫染色的操作步驟(1)在細(xì)胞染色之前，制備溶于蒸餾水的lmg／m1多聚賴氨酸溶液(平均分子質(zhì)量400kDa)。將多聚賴氨酸涂于載玻片上，孵育15min。用水沖洗玻片，干燥后將玻片保存在室溫。(2)建立對(duì)數(shù)生長期的酵母菌細(xì)胞。取出生長培養(yǎng)的樣品。(3)加入5倍體積的新鮮配制的4％多聚甲醛(見附錄Ⅳ，但不溶于PBS中而用0．1mol／L磷酸鉀溶解，pH6．5)。(4)混均后于室溫下孵育90min。(5)用0．1mol／L磷酸鉀(pH6．5)洗細(xì)胞3次。(6)zui后將沉淀重懸于1．2m01／

撫生試劑-抗神經(jīng)元細(xì)胞核抗體自身抗原2014/05/28: 抗神經(jīng)元細(xì)胞核抗體自身抗原ANNA—l靶抗原是一組特異地表達(dá)于神經(jīng)元和相關(guān)腫瘤上的35—40kD堿性蛋白。分子克隆研究提示，這組蛋白抗原由三種*的基因：HuD、HuC／ple21和Hel—N1編碼。其中HuD基因位于lp34，HuC／ple21和Hel-N1分別位于19和9號(hào)染色體上。ANNA-2靶抗原分別為55k．D和80kD的兩種神經(jīng)元蛋白。Hu抗原是果蠅基因Elav的一種同源基因產(chǎn)物，Elav與果蠅神經(jīng)元分化密切相關(guān)。Elav表達(dá)于神經(jīng)母細(xì)胞的細(xì)胞周期末期，其突變會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)元分化的停滯和神

撫生試劑-AP融合蛋白的測(cè)定2014/05/27: AP融合蛋白的測(cè)定A．酶裂解測(cè)定法1．在離心管中加入恒定濃度(1—5ug)的AP融合蛋白以及相應(yīng)的能夠結(jié)合此融合蛋白的抗親和性結(jié)構(gòu)域標(biāo)簽樹脂。室溫反應(yīng)2小時(shí)，溫和搖動(dòng)。2．5000g離心1分鐘，棄去上清。用1mlTE重懸并再次離心。以TE和蛋白酶反應(yīng)緩沖液分別洗滌樹脂一次。3．以200ul蛋白酶反應(yīng)緩沖液重懸此洗滌過的樹脂。為達(dá)到一個(gè)適合的反應(yīng)速率所需的蛋白酶的量需要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行測(cè)定。對(duì)于一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)，陽性對(duì)照和陰性對(duì)照的底物融合蛋白應(yīng)該用一系列濃度的蛋白酶進(jìn)行處理。4．在不同的時(shí)間間隔，從反應(yīng)

撫生試劑-抗原和免疫原、抗體和免疫球蛋白的區(qū)別2014/05/26: 抗原和免疫原、抗體和免疫球蛋白的區(qū)別抗原和免疫原的區(qū)別這兩個(gè)概念很相似，經(jīng)常作為同義詞使用。抗原和免疫原是對(duì)分子從不同角度所作的定義。免疫原是指任何外來的并能刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)。抗原是指能與抗體或T細(xì)胞受體結(jié)合的物質(zhì)。在免疫反應(yīng)中免疫原和抗原可互換，因?yàn)檎T導(dǎo)免疫反應(yīng)的關(guān)鍵步驟就是結(jié)合抗體和T細(xì)胞受體。然而在提到依賴于抗體的免疫組化技術(shù)時(shí)則只使用抗原這個(gè)概念。抗體和免疫球蛋白的區(qū)別由于免疫學(xué)在不同領(lǐng)域的應(yīng)用導(dǎo)致這兩個(gè)概念的出現(xiàn)，但它們指的是同一類蛋白。盡管有時(shí)在某種情況下更傾向于使用其中的

撫生試劑-ELISA試劑組成2014/05/23: ELISA試劑組成1．抗原在ELISA中應(yīng)用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有3類，即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。自然抗原的純度不高，特異性不強(qiáng)；合成抗原一般為多肽片段，缺乏天然抗原所具有的立體結(jié)構(gòu)表位，親和力不高，可能導(dǎo)致相應(yīng)表位的抗體漏檢；基因重組抗原具有安全、特異性強(qiáng)、親和力高、產(chǎn)量大等特點(diǎn)，是一種比較理想的抗原，但其純化比較困難。2．抗體在ELISA中應(yīng)用的抗體可分為多克隆抗體(多抗)和單克隆抗體(單抗)。多抗取白免疫動(dòng)物的抗血清，制備較簡單，但抗血清成分復(fù)雜，除含

撫生試劑-單克隆抗體技術(shù)概念、原理、基本方法和操作流程2014/05/22: 單克隆抗體技術(shù)概念、原理、基本方法和操作流程骨髓瘤細(xì)胞及飼養(yǎng)細(xì)胞的制備選擇瘤細(xì)胞株的zui重要的一點(diǎn)是與待融合的B細(xì)胞同源。如待融合的是脾細(xì)胞，各種骨髓瘤細(xì)胞株均可應(yīng)用，但應(yīng)用zui多的是Sp2/0細(xì)胞株。該細(xì)胞株生長及融合效率均佳，此外，該細(xì)胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重鏈或輕鏈。細(xì)胞的zui高生長刻度為9×105/ml，倍增時(shí)間通常為10～15h。融合細(xì)胞應(yīng)選擇處于對(duì)數(shù)生長期、細(xì)胞形態(tài)和活性佳的細(xì)胞（活性應(yīng)大于95％）。骨髓瘤細(xì)胞株在融合前應(yīng)先用含8-氮鳥嘌呤的培養(yǎng)基作適應(yīng)培養(yǎng)，在細(xì)胞融合的

撫生試劑-蛋酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體自身抗原2014/05/21: 蛋酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體自身抗原1．定義PR3是cANCA的主要靶抗原，為一種陽離子蛋白(等電點(diǎn)，pH9．4)，含有228個(gè)氨基酸屬于絲氨酸蛋白酶中的色氨酸家族，僅在靈長類和人類表達(dá)，是多種功能蛋白如彈性蛋白、血紅蛋白、黏蛋白、層黏蛋白、Ⅲ型膠原的蛋白水解酶，對(duì)Calbicans大腸桿菌具有抗菌作用并參與骨髓細(xì)胞分化等。2．來源PR3見于多核細(xì)胞、單核細(xì)胞的MPO陽性顆粒中以及人類內(nèi)皮細(xì)胞、早幼粒細(xì)胞株(HL-60)和人腎癌細(xì)胞株(SK—RCll)中。通常PMN是天然PR3的惟一來源。利

撫生試劑-免疫復(fù)合物的測(cè)定2014/05/20: 免疫復(fù)合物的測(cè)定免疫復(fù)合物(immunecomplex，IC)或抗原抗體復(fù)合物是抗原與其對(duì)應(yīng)抗體相結(jié)合的產(chǎn)物。在正常情況下，機(jī)體內(nèi)的游離抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成IC，可被機(jī)體的防御系統(tǒng)清除，作為清除異物抗原的一種方式，對(duì)機(jī)體有利。但在某些情況下，體內(nèi)形成的IC不能被及時(shí)清除，則可在局部沉積，通過激活補(bǔ)體，并在血小板、中性粒細(xì)胞等參與下，引起一系列連鎖反應(yīng)而導(dǎo)致組織損傷，出現(xiàn)臨床癥狀，稱為免疫復(fù)合物病(immunocomplexdisease，lCD)。由于抗原與抗體比例不同，所形成的IC分子大小各

撫生試劑-膠體金標(biāo)記蛋白的制備2014/05/16: 膠體金標(biāo)記蛋白的制備膠體金對(duì)蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結(jié)合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，則會(huì)聚集而失去結(jié)合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強(qiáng)度、蛋白質(zhì)的分子量等都影響膠體金與蛋白質(zhì)的結(jié)合。1．待標(biāo)記蛋白溶液的制備將待標(biāo)記蛋白預(yù)先對(duì)0.005Mol/LpH7.0NaCl溶液中4℃透析，以除去多余的鹽離子，然后100000g4℃離心1h，去除聚合物。2．待標(biāo)膠體金溶液的準(zhǔn)備以0.1Mol/LK2CO3或0.1Mol/LHCl調(diào)

撫生試劑-表皮生長因子（EGF）的測(cè)定方法2014/05/15: 表皮生長因子(EGF)的測(cè)定方法EGF主要來源于頒下腺。成年人許多組織中也表達(dá)EGF。人成纖維細(xì)胞、唾液腺癌細(xì)胞等也可產(chǎn)生EGF。EGF的作用沒有種屬特異性，人和小鼠的EGF對(duì)人成纖維細(xì)胞的作用相同。1．Swiss3T3細(xì)胞增殖法(1)用含5％FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss3T3細(xì)胞調(diào)整成1×104／mL，接種于60mm的培養(yǎng)皿中(5mL)，置37C5％C02溫箱中培養(yǎng)4～5d，待細(xì)胞匯合后，更換上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d，此時(shí)細(xì)胞數(shù)不再增多。(2)分別加入200ral系列稀釋的待測(cè)樣品或

撫生試劑-免疫組織化學(xué)組織細(xì)胞的組織切片2014/05/14: 免疫組織化學(xué)組織細(xì)胞的組織切片一、載玻片的處理免疫組化染色時(shí)間長，特別是雙PAP、免疫金銀染色等方法，所需時(shí)間更長，并要反復(fù)洗滌，切片在試劑中長時(shí)間浸泡，經(jīng)多次洗滌，極易造成脫片而影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。需采用以下方法處理：載玻片先置于洗潔液(或洗衣粉溶液)中煮沸30min，清水洗干凈后放人清潔液中浸泡12—24h，漂洗，用蒸餾水清洗后置于烤箱內(nèi)干燥，然后涂以切片黏合劑。切片黏合劑的配制方法如下。(1)明礬—明膠的配制方法明礬、明膠各1g，加入到100ml1％甘油中，加熱至70~C熔化，并攪拌混合至*透

撫生試劑-酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISPOT）2014/05/13: 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(ELISPOT)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)(enzyme-linkedimmunosorbentspot,ELISPOT)檢測(cè)技術(shù)是通過兩種高親和力的特異性抗細(xì)胞因子抗體來檢測(cè)淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子情況的一種方法。淋巴細(xì)胞在體內(nèi)被抗原激活后，或者在體外培養(yǎng)中被培養(yǎng)液中含有的特異性抗原或刺激劑激活后，將這些細(xì)胞轉(zhuǎn)入ELISPOT培養(yǎng)板中。這些活化的淋巴細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子，在孵育的過程中可在分泌細(xì)胞原位被ELISPOT培養(yǎng)板上包被的特異性細(xì)胞因子抗體所捕獲。將細(xì)胞和過量的細(xì)胞因子洗除后，加入生物素標(biāo)

撫生試劑- 抗Clq抗體自身抗體2014/05/12: 抗Clq抗體自身抗體1．檢測(cè)方法過去通常使用經(jīng)典的：ELISA方法能與Clq的CLR區(qū)結(jié)合的自身抗體，但條件是必須有足夠濃度的CLR(1～10ug／ml)以保證與抗CLR抗體結(jié)合，因?yàn)檠逯锌乖瓭舛鹊牟煌瑫?huì)導(dǎo)致不同的結(jié)合程度，比如，SLE中抗體與抗原的結(jié)合力就要低于HUSV中的結(jié)合力。另一種檢測(cè)方法是利用在1．0MNaGl的緩沖液中IgG與Clq的球形區(qū)的結(jié)合會(huì)大大減少，但抗CLR．與Clq的結(jié)合物穩(wěn)定存在的原理。這種利用Clq固相分析法檢測(cè)復(fù)合物的方法的特殊之處就在于在血清的溫育和洗脫過程中使

撫生試劑- 結(jié)核病的病理變化2014/05/09: 結(jié)核病的病理變化結(jié)核病由于牲畜種類和感染途徑不同，其病變發(fā)生部位和表現(xiàn)形式也有差異，分述如下。(1)豬結(jié)核病宰后檢驗(yàn)時(shí)比較常見的是頭頸部淋巴結(jié)結(jié)核，尤以頜下淋巴結(jié)和咽后淋巴結(jié)zui為常見；其次是腸系膜淋巴結(jié)和支氣管淋巴結(jié)結(jié)核。患病淋巴結(jié)呈不同程度的腫大、堅(jiān)實(shí)、切面有粟粒大小至高梁米粒大結(jié)節(jié)，中心干酪化或鈣化。因病變表現(xiàn)略有不同，所以常見有：結(jié)核性干酪性淋巴結(jié)炎(因淋巴組織除殘存固有的小粱外，都發(fā)生干酪樣壞死，故切面見干酪樣壞死呈放射狀，此時(shí)，整個(gè)淋巴結(jié)表現(xiàn)高度腫大)，彌漫性、增生性、結(jié)核性淋巴結(jié)

撫生試劑-夾心ELISA檢測(cè)與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素2014/05/08: 夾心ELISA檢測(cè)與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素此法的包被物可用抗LT抗體或LT受體成分(GM神經(jīng)節(jié)背脂)兩種。試驗(yàn)時(shí)，先用1：5O稀釋的粗制兔抗LT血清或5O／lg／mlGM神經(jīng)節(jié)背脂包被塑料板。包被后，加入待檢菌的37℃振搖培養(yǎng)18h的腦心浸液培養(yǎng)物濾液2OOμL，每份樣品平行加2孔，按常法溫育，洗滌后，加1：500稀釋的粗制羊抗LT血清，孵育，洗滌，再加1：4OO的兔抗羊IgG堿性磷酸酶復(fù)合物，以六水合物(hexahydrate)作底物顯色，測(cè)OD450值，以O(shè)D450≥0．2O判為陽性。據(jù)Klip

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