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ELISA試驗操作過程注意點匯總2024/04/01

ELISA技術原理將抗原抗體的特異性免疫反應與酶的催化反應相結合的免疫檢測技術，利用酶標技術標記抗原或抗體，通過顯色反應，用以檢測相應的抗體或抗原，對其進行定性或定量分析。ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。下面一步步分析ELISA試驗操作中可能影響結果因素。1、標本的選擇與準備用于ELISA測定的臨床標本最為常用的是血清(漿)，有時因為特定的檢測目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等

PCR引物設計詳述2024/03/25

PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此，引物的優劣直接關系到PCR的特異性與成功與否。要設計引物首先要找到DNA序列的保守區。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結構。如這個區域單鏈能形成二級結構，就要避開它。如這一段不能形成二級結構，那就可以在這一區域設計引物。現在可以在這一保守區域里設計一對引物。一般引物長度為15~30堿基，擴增片段長度為100~600堿基對。讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%~60%。而且四種堿

抗原抗體反應反應關鍵方面闡述2024/03/18

抗原抗體反應是指抗原與相應抗體之間所發生的特異性結合反應。這種反應既可在機體內進行，也可以在機體外進行。抗原抗體反應的過程是經過一系列的化學和物理變化，包括抗原抗體特異性結合和非特異性促凝聚兩個階段，以及由親水膠體轉為疏水膠體的變化。由于抗體主要存在于血清中，在抗原或抗體檢測中多以血清為試驗材料，故將體外抗原抗體的免疫學反應也稱作血清學反應(serologicalreaction)。該反應既可用已知的抗原檢測未知的抗體，這是臨床上常用的血清學診斷方法；也可用已知的抗體檢測未知的抗原，如微生物及其

ELISA實驗標準品使用說明2024/03/11

ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。正確溶解、稀釋標準品尤其重要，以下一起了解下：1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。3.標準品梯度稀釋:（1）標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀釋標準品。若細

細胞的主要組成部分詮釋2024/03/04

一、細胞的基本結構：細胞的基本結構是細胞質、細胞核、細胞膜。細胞分為動物細胞、細菌和真菌和植物細胞。細胞是生物體基本的結構和功能單位。已知除病毒之外的所有生物均由細胞所組成，但病毒生命活動也必須在細胞中才能體現。動物細胞結構：動物細胞有細胞膜、細胞質、細胞核。動物細胞的細胞質包括細胞質基質和細胞器。動物細胞的細胞器包括內質網、線粒體、高爾基體、核糖體、溶酶體、中心體。動物細胞與植物細胞相比較，具有很多相似的地方，如動物細胞也具有細胞膜、細胞質、細胞核等結構。但是動物細胞與植物細胞又有一些重要的區

ELISA檢測實驗樣本稀釋問題解讀2024/02/26

一個準確的ELISA檢測實驗，必須包含三大要素：性能可靠的試劑盒、造模成功并準確采集的樣本、可控環境且嚴謹實驗操作，三者缺一不可。在操作過程中，經常遇到樣本稀釋問題，需要進行樣本稀釋。一、在ELISA實驗過程中，超過試劑盒檢測范圍的，一般有這幾種情況。樣本值高的可能情況:1、樣本中待測物含量過高。一些高豐度蛋白來說，比如免疫球蛋白、脂聯素、C肽、載脂蛋白等，在樣本中本身含量就很高，有的達到mg/mL濃度。2、一些受誘導表達的細胞上清中，大量表達，比如小鼠細胞誘導后，大量表達腫瘤壞死因子α（TNF

PCR反應的五要素剖析2024/02/18

熒光定量PCR(realtimefluorescencequantitativePCR，RTFQPCR)是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產物進行標記跟蹤，實時在線監控反應過程，結合相應的軟件可以對產物進行分析，計算待測樣品模板的初始濃度。PCR原理：PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;剛開始時,探針結合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴增時，T

細胞培養用液具體步驟2024/02/05

器材與試劑：干粉型培養基、胰蛋白酶，青霉素、鏈霉素.純凈水系統、電子天平、PH計、磁力攪拌器。具體步驟：一、水的制備：細胞培養用水必須非常純凈，不含有離子和其他的雜質。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水.二、PBS的制備與消毒(也可用于其它BSS，如：Hanks，D-Hanks液的配制)：1.溶解定容：將藥品（NaCl8.0g，KCl0.2g，Na2HPO4·H2O1.56g，KH2PO40.2g）倒入盛有雙蒸水的燒杯中，玻璃棒攪動，充分溶解，然后把溶液倒入容量瓶中準確定容至1000ml，搖勻即

普通PCR和熒光定量PCR的引物設計方面對比2024/01/29

引物，在核苷酸聚合作用的起始時，可以刺激合成另一種大分子，并與反應物以共價鍵形式連接的序列。在核酸化學中，引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結合在核酸鏈上與之互補的區域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點，核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。無論是做普通PCR還是熒光定量(Realtime)PCR，設計合適的引物是非常關鍵的一步。普通PCR和熒光定量PCR的檢測方式具有較大的差別。熒光定量PCR實時監測與DNA結合的熒光染料激發的熒光，普通PCR通過檢測插入DNA中核酸染料的量來測定

逆轉錄-聚合酶鏈反應 (RT-PCR)實驗步驟詳述2024/01/22

逆轉錄-聚合酶鏈反應(ReverseTranscription-PolymeraseChainReaction，RT-PCR)的原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。實驗步驟：一、總RNA的提取總RNA提取可以：（1）獲得高純度、高質量的總RNA；（2）可以滿足生物學下游實驗NorthernBlot、核酸酶保護實驗、RT-PCR、qRT-PCR和陣

化學試劑管理注意事項參考2024/01/08

實驗室化學試劑的種類繁多，化學藥品大多具有一定的毒性和危險性，對其加強管理無疑是實驗室管理人員的首要工作。接下來一起了解化學試劑管理注意事項參考。1、易燃易爆化學試劑一般將閃點在25℃以下化學試劑列入易燃化學試劑，它們多是極易揮發的液體，遇明火即可燃燒。閃點越低，越易燃燒。使用易燃化學試劑時絕不能使用明火，加熱也不能直接用加熱器，一般不用水浴加熱。在使用易燃化學試劑的實驗人員，要穿好必要的防護用具，最好戴上防護眼鏡。2、有毒化學試劑一般化學試劑對人體都有毒害，在使用是一定要避免大量吸入;在使用完

小鼠ELISA檢測試劑盒實驗中血清樣本處理過程2024/01/02

酶聯免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯yi烯等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。它是應用最多的一種免疫酶技術。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學研究中的常用診斷工具，是檢測組織提取液、血清和細胞培養液中目標抗體/抗原的理想工具，也是重要的質量控制手段。通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細胞培養上清或組織勻漿液等，不同

土壤微生物（細菌、霉菌）實驗原理步驟2023/12/26

一、實驗原理：1.細菌簡單染色利用單一染料對菌體進行染色的方法叫做簡單染色。2.細菌的革蘭氏染色經此法染色后，細胞保留初染劑藍紫色的細菌為革蘭氏陽性菌；細胞中初染劑被脫色劑洗脫而染上復染劑的顏色（紅色）的細菌為革蘭氏陰性菌。3.細菌芽孢染色首先用著色能力較強的染料，如孔雀綠（malachitegreen）或堿性品紅（basicfuchsin）在加熱條件下進行染色時，此染料不僅可以進入菌體，而且也可以進入芽孢，進入菌體的染料可經水洗脫色，而進入芽孢的染料則難以透出。再用對比度大的復染劑（如番紅液）

標準物質的基本條件歸納2023/12/18

標準物質是以特性量值的均勻性、穩定性和準確性等特性為主要特征的。為獲得這些基本特征，標準物質起碼應滿足以下基本條件的要求。1、材質均勻從理論上講，如果物質的一部分（單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值沒有顯著差異，則該物質的該特性是均勻的。但是，全均勻的物質是不存在的，物質內部和單元之問或多或少會存在有不均勻性，在貯存過程中，也會發生層析、偏析、聚集等不均勻的傾向，因而，均勻是相對的，而不均勻是絕對的。如果物質的一部分(單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值之間的差異不能被實驗檢測出來，或

牛血清功能用途總結2023/12/11

血清是指血液凝固后，去除血漿中纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色澄清液體，內含有血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等多種成分。這些成分對促進細胞生長、保護細胞不受損傷等起到重要作用。牛血清作為細胞培養中較為普遍的添加組分之一，在細胞培養中占據關鍵地位。牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必需的營養成分，常用于動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供

熒光定量PCR(SYBR Green)總RNA提取方法步驟2023/12/04

總RNA提取：A組織樣本：迅速將新鮮的組織切成合適的大小，在液氮中充分研磨后加裂解液裂解，或直接加入裂解液后用勻漿器勻漿。每30-50mg組織加1mlTrizol。B全血樣品：加入3-5倍體積的紅細胞裂解液到血樣中，室溫孵育10min，室溫3500rpm離心6min。棄上清，原每2-3ml全血樣品加1mLTrizol。C細胞樣品：懸浮液中生長的細胞，通過離心收集細胞后，每1×105?106細胞加入1mLTrizol，移液器吹打混勻，直接裂解或-80℃儲存一個月。貼壁生長的細胞，有兩種處理方法。一

ELISA實驗標準品正確溶解與稀釋2023/11/28

ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。標準品正確溶解：1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末全溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋白未溶解，槍頭帶出部分蛋白，待全溶解后可吹吸或渦旋振蕩混勻。標準品梯度稀釋:1、標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀釋標準品。若細胞上清樣本，建議用細胞培養基梯度稀

ELISA試驗陰性與陽性對照平均值計算與判斷2023/11/20

陰性與陽性對照平均值計算與判斷：1．陰性對照平均值NCx有效性計算判斷舉例：（1）第一類NCx計算與評價：以HBsAg為例Ⅰ.設置3孔的NCx計算：NCx=（0.011+0.010+0.090）/3=0.010Ⅱ.任一個NC值應≤0.100至≥－0.010；Ⅲ.各NC值也應介于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之間。此時各孔的NC值均處于NCx±0.006范圍內，其中遇有一孔NC值偏離該范圍時，則棄去該NC值，再計算NCx。如有2孔NC值超出該范圍時，本次試驗（無效）應予復試。Ⅳ.不同廠牌對NC

原代培養操作步驟與注意事項2023/11/13

原代分離細胞培養是指從供體內取出組織后，經機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環境，在無菌、適當溫度和一定的營養條件下，生存、生長和繁殖。原代培養細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。利用原代細胞培養做各種實驗，如藥物測試、細胞分化及病毒學方面的試驗效果很好。操作步驟：1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術鑷去除黏附的結締組織等非培養所需組織。再次清洗后，用手術刀

ELISA實驗標準品溶解與稀釋介紹2023/11/06

ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡稱，是一種檢測方法，而標準品是相對于具體的物質有具體的標準品，所以不存在說ELISA的標準品。ELISA標準曲線是結果計算的尺子，標準品是ELISA實驗成功與否的關鍵點。正確溶解、稀釋標準品如下：1.粉末標準品短暫離心，讓因運輸沾到管蓋、管壁的標準品沉到管底。2.根據瓶標簽加入一定體積的蒸餾水，加水后輕柔渦旋震蕩，室溫靜置溶解10-30min，讓粉末*溶解。注意：加水后暫不用移液槍吹吸，避免蛋