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酶聯免疫吸附實驗（ELISA）測定技術要點匯集2024/08/29

酶聯免疫吸附實驗（Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）是將抗原或抗體結合在固相載體表面，利用抗原抗體的特異性結合以及抗體或者抗原上標記的酶催化特定底物發(fā)生顯色反應，實現目標物檢測的免疫分析方法，可測至皮摩爾（pmol）級別。技術原理：ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。（1）、將已知的抗體或抗原結合在某種固相載體上，并保持其免疫活性。（2）、測定時，將待檢樣本和酶標抗原或抗體按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應。（3）、用洗滌的方法分離抗

大鼠 SCUBE1ELISA試劑盒試驗操作步驟及注意事項2024/08/19

試驗原理：大鼠SCUBE1ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關系。大鼠SCUBE1ELISA試劑盒操作步驟：1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標準品100μl，然

ELISA實驗出現灰區(qū)結果分析2024/08/12

酶聯免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結合專一性進行免疫反應的定性和定量檢測方法。它是應用最多的一種免疫酶技術。ELISA測定的陽性判斷值,通常是將大量陰性和陽性人群的測定數據進行統計分析后確定的,其確定依據為判斷結果的假陽性和假陰性率最di。在陽性判斷值周圍一定范圍內之外的測定結果可歸為可疑,亦即ELISA測定的“灰區(qū)"。“灰區(qū)"的大小可用統計學方法確定。測定結果處于“灰區(qū)"的樣

酶聯免疫檢測儀應用常見問題解析2024/08/05

酶標儀即酶聯免疫檢測儀，是酶聯免疫吸附試驗的專用儀器。。可簡單地分為半自動和全自動2大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計，即用比色法來分析抗原或抗體的含量。酶標儀檢測技術是一種高通量微孔板檢測技術，操作簡便，被廣泛應用各領域。任何儀器在使用時往往都會出現一些小故障，酶標儀儀器也一樣，下面將與大家分享酶標儀的一些常見故障及處理方法：1、打印機不工作⑴、酶標儀后部DIL開關設置不正確。DIL標準設置:左下下下下下下上下上上下下上下上上右(人站在儀器后部，面向儀器)。⑵、酶標儀內置

微生物培養(yǎng)基滅菌實驗方法匯總2024/07/30

培養(yǎng)基是將微生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質，用人工方法配制而成的各種營養(yǎng)基質。培養(yǎng)基為微生物的生長提供營養(yǎng)物質和生存空間。滅菌的方法，通常可以分為四大類：1、加熱滅菌：包括直接灼燒滅菌、干熱滅菌、加壓蒸汽滅菌、間歇滅菌和煮沸消毒；2、過濾去菌；3、射線滅菌和消毒；4、化學藥劑滅菌和消毒。在本實驗中，介紹與培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌有關的部份滅菌方法。1.干熱滅菌法（即熱空氣滅菌法）干熱滅菌一般是利用電熱烘箱作為干熱滅菌器。前面所包裝好的玻璃器皿，如帶棉塞的三角瓶，試管、包裝好的吸管、培養(yǎng)皿等，放入電

實時熒光定量PCR技術實驗準備與步驟2024/07/22

實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。PCR實驗是分子生物學中常見用的實驗之一，在基因擴增、核酸檢測、基因檢測等方面廣泛應用。一、PCR實驗前的準備:在開始PCR實驗之前，必須準備好DNA模板（基因組DNA或逆轉錄制備的cDNA）、特異性引物（自己設計或用軟件設計），并選擇合適的商業(yè)酶（選擇符合您實驗目的的酶)1、DNA聚合酶。有許多商業(yè)DNA聚合酶，它們具有不同的特性。一般分為兩類：高保

ELISA試劑盒中HRP底物使用操作步驟2024/07/15

ELISA試劑盒中HRP底物范圍較廣，HRP即辣根過氧化物酶（HorseradishPeroxidase）比活性高，穩(wěn)定，分子量小，純酶容易制備，所以zui常用。過氧化物酶作為多個試劑盒顯色體系的關鍵成分，對試劑盒的質量有重要影響。HRP底物主要包括二氨基聯苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。一、二氨基聯苯胺／金屬鹽DAB是辣根過氧化物酶最敏感、常用的底物。它產生強烈的棕色產物，在水和醇中不溶解。多數情況下，推薦在DAB中加入不同的金屬離子。當加入金屬鹽如鈷、鎳至底物液中，辣根過氧化物酶可以更

細胞的凍存與復蘇技術操作步驟2024/07/09

細胞的凍存與復蘇技術操作步驟：一、原理在不加條件下直接凍存細胞時，細胞內和外環(huán)境中的水都會形成冰晶，能導致細胞內發(fā)生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養(yǎng)液加入保護劑，可使冰點降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在－130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。細胞復蘇時速度要快，使之迅速通過細胞易受損的－5～0℃，細胞仍能生長，活力受損不大。目前常用的保護劑為二甲亞砜（DMSO）和甘油，它們對細胞無毒性，分子量小，溶解度大，易穿

PCR反應條件溫度和時間選擇2024/07/01

PCR反應條件的選擇技巧主要體現在溫度、時間和循環(huán)次數上，溫度過高，延伸時間不夠都會對實驗結果有很大的影響，以下總結方法技巧。溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100～300bp時)可采用二溫度點法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94

ELISA試驗重點操作步驟闡述2024/06/28

酶聯免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)是一種特殊的試劑分析方法，在免疫酶技術的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術，其試劑易于保存、結果判斷較為客觀，是目前實驗室檢測抗原抗體經濟、普遍的試驗診斷方法。ELISA試驗重點操作步驟闡述如下：1、試劑的準備試劑的質量如抗原抗體的純度及親和力、標記物的比活性、滴度及特異性等直接影響檢測結果，為保證檢測質量，所有試劑必需經國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準、批檢測合格，臨床評估特異性、敏感性、穩(wěn)定性較高且

常見污染培養(yǎng)細胞的類型探究2024/06/12

由于缺乏機體免疫系統等的保護，體外培養(yǎng)的細胞沒有對微生物的防御能力。在體外培養(yǎng)環(huán)境中，有些微生物在攝取營養(yǎng)物質方面有競爭優(yōu)勢，并在短時間內排出大量代謝產物；有些微生物則附著在細胞表面或進入細胞內部。因此，微生物污染會對體外培養(yǎng)細胞的正常生存、生長及功能活動造成極大干擾，嚴重的可致細胞死亡。同時，實驗結果的準確性和可靠性也大打折扣。所以，保持細胞生存環(huán)境無微生物污染是體外實驗的前提條件。良好的無菌操作可大大降低細胞培養(yǎng)中的微生物污染風險。微生物對細胞的影響因污染物和細胞種類的不同而表現各異，一般當

PCR引物是如何合成？2024/06/03

PCR引物合成是指通過測定引物的OD值，溶解引物，最終合成引物的一個完善的過程。目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速的偶聯以及起始反應物比較穩(wěn)定的特點。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相鄰的核苷酸通過3′→5′磷酸二酯鍵連接。合成四步驟:第一步,是將預先連接在固相載體上的活性基團被保護的核苷酸與三氯yi酸反應，脫去其5′-羥基的保護基團DMT，獲得游離的5′-羥基。第二步

細胞凍存實驗重點干貨分享2024/05/27

細胞凍存是指將細胞放在低溫環(huán)境，以達到減少細胞代謝的作用，從而達到對細胞進行長期儲存進行保種的目的，以供后續(xù)實驗或臨床使用。細胞凍存一般采用慢凍原則，慢凍可使細胞逐步脫水，細胞不會因為產生大的冰晶而收到損害。一、原理當溫度低至-70℃時，細胞內的代謝活動及酶活性幾乎全部停止，低于-130℃時，細胞能達到最佳存活率。液氮可實現細胞的長期保存。冷凍保護劑二甲基亞砜（DMSO）能快速穿透細胞膜進入細胞，降低冰點，延緩凍存過程，同時增加細胞膜的通透性，提高細胞內離子濃度，減少細胞內冰晶的形成，從而達到保

ELISA試驗常見標本收集介紹2024/05/20

酶聯免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術，在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應結合在固相載體上。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據，為了保證實驗數據的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面的質量控制和全過程質量控制，

蛋白質鹽析法全方面分析2024/05/13

蛋白質通過鹽析的辦法沉淀的原理是降低蛋白質的溶解度，使蛋白質凝聚而從溶液中析出。一般來說，所有固體溶質都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出，這一過程叫鹽析。在生化制備中,許多物質都可以用鹽析法進行沉淀分離，如蛋白質、多肽、多糖、核酸等，其中以蛋白質沉淀最為常見，特別是在粗提階段。鹽析法分為兩類，第一類叫Ks分段鹽析法，在一定PH和溫度下通過改變離子強度實現，用于早期的粗提液；第二種叫b分段鹽析法，在一定離子強度下通過改變PH和溫度來實現，用于后期進一步分離純化和結晶。一．影響鹽析的若干因素1．蛋白

各種細胞培養(yǎng)基類型概述2024/05/06

細胞培養(yǎng)基既是培養(yǎng)細胞中供給細胞營養(yǎng)和促使細胞生殖增殖的基礎物質，也是培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。常見的種類如下：1、無機鹽培養(yǎng)液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細胞調節(jié)細胞膜功能。培養(yǎng)液的滲透壓是一個非常重要的因素，細胞通常可耐受260mOsm/kg320mOsm/kg。標準培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內波動。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質有可能會明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強酸或強堿中的物質。向培養(yǎng)液中添加HEPES時需按以下方法調節(jié)鈉離子濃

全方面闡述血清和血漿的關聯2024/04/28

血清和血漿均是不含細胞（包括血小板）等有形成分的血液液體部分，其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板，血漿則含有凝血因子，它們的制備方法如下：1、血清的制備：獲得的血液不能抗凝，盛于離心管或可以離心的器皿中，靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固，待血液凝固后，將其平衡后離心（一般為3000rpm，離心5～10min），得到的上清液即為血清，可小心將上清吸出（注意切勿吸出細胞成分），分裝備用。2、血漿制備：在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑（抗凝劑：血液=1：9，將血液加到一定量后顛倒混勻，離心（離心條件

ELISA免疫檢測顯色與比色詳情2024/04/22

酶聯免疫吸附測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay，ELISA）是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術ELISA檢測是一種免疫檢測方法，通常用于測量生物樣品中的抗體或抗原，包括蛋白質或糖蛋白。像其他免疫檢測法一樣，它們依靠抗體與目標的結合來促進檢測。一、顯色ELISA試劑盒里的顯色液A和B成分：如果你是HRP的二抗，顯色液A、B的成分一般是H2O2和TMB（或OPD），至于具體A是那一個B是那一個你要看說明書。HRP催化過氧化物H2O2，其反應式如下：D＝TM

PCR反應各種類掌握指導2024/04/16

聚合酶鏈式反應PCR（polymerasechainreaction），主要由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟反復的熱循環(huán)構成：即模板DNA先經高溫變性為單鏈，在DNA聚合酶和適宜的溫度下，兩條引物分別與兩條模板DNA鏈上的一段互補序列發(fā)生退火，接著在DNA聚合酶的催化下以四種脫氧核苷酸三磷酸（dNTPs）為底物，使退火引物得以延伸，如此反復，使位于兩段已知序列之間的DNA丨片段呈幾何倍數擴增。PCR的分類：PCR有很多種，核心就是用引物擴增特定的DNA，以指數方式倍增的DNA達到可以觀察到

雙抗夾心ELISA法重點分析2024/04/16

酶聯免疫吸附分析Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA是以體外抗原抗體反應為基礎，將抗原抗體特異性反應與酶的高效催化作用相結合的一種檢測方法，靈敏度可達皮克(pg/mL)水平。常見的ELISA類型雙抗體夾心法，其基本原理是將定量的包被抗體以物理吸附的方法固定于微孔板表面，然后加入待檢標本，通過加入檢測抗體，酶標記第二抗體后用TMB底物顯色，微孔板中顏色的深淺與待測物的濃度呈正相關。1、包被抗體許多物質可作為固相載體，如聚丙酰胺和纖維素等，在進行抗體固定化之前，