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如何選用特殊細胞系培養基？2013/06/13

培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做粘附細胞培養"細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養"細胞培養是一個好的開始，各種目的無血清培養AIMV（12005）培養基（SFM）。L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解，但是確切的降解率一直沒有zui終定論。

影響ELISA試驗效果常見分析,和解決思路2013/06/13

ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）；3

ELISA的精點摘要,不要錯過奧2013/06/13

的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照規定操作，必能得出準確的結果。4.1標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標本可直接進行測定（如

免疫熒光制血樣品與視覺享受2013/06/13

一、原理（一）什么是熒光，簡單地講，當用一定波長的光（如紫外光）照射某種物質時，經過照射的物質在極短時間內即可發射出一種可見的光，這種光即為熒光。在生物中，由于產生熒光的方式不同，可以概括地歸納為以下幾種：1．自發熒光：在生物的某些組織中，經紫外線照射后能直接發射出熒光的稱為自發熒光（或直接熒光）。如植物組織中的葉綠素，經紫外線照射后，即可發出紅色熒光。2．次生熒光：有些生物組織經紫外線照射后，并不能發出熒光，但是當它吸收熒光染料后也可以產生熒光，這種稱為次生熒光（或間接熒光）。如吖啶橙，DAP

免疫組化實驗的小竅門2013/06/13

1．固定：用4%的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好；但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。有時候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液，請于購置前注意說明書。BouinS固定液：飽和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對組織的穿透力較強，固定較好，結構完整，但因偏酸，對抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標本的長期保存。PLP液：即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對超微結構及許多抗原的抗原性保存較好。2．組織脫水，

酶聯方法的標本收集與實驗準備2013/06/13

臨床檢驗常見的標本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。（一）臨床標本的收集A、血液標本有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應在標本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無名指內側采血，該部位應無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他手指部位代替。對燒傷

ELISA 方法的實驗原理和操作過程.2013/06/13

ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。（一）原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，

動植物樣品的采集及DNA樣品的提取2013/06/13

動物樣品的采集及處理方法遺傳學數據在野生動物和圈養動物的保護和管理中變得日益重要。在本文中，我們總結了一些能簡便而有效地獲得樣品及數據的方法。我們在采集樣品之前，對將要進行的遺傳學分析有所了解。然而，采集者并非都是研究者，當采集地與實驗室有相當距離時，采集者常常要保存好樣品直到有合適的接受者或存放地，這就要求采集者應具備一定的經驗。首先，所有樣品均應以個體序號進行標注，并且應寫上種名、性別、采樣者姓名以及采集日期，越詳盡越好，以便同一個體的不同類數據可以相互引用，另外，地理來源的標注也很重要，需

實驗室常用細胞目錄名詞大全2013/06/13

3T3swissSwiss小鼠胚胎成纖維細胞A549人肺癌細胞（能產生Keratin）CHOdhfr二氫葉酸缺陷型中國倉鼠卵巢細胞CHO-K1中國倉鼠卵巢細胞Cyc-tAg小鼠T淋巴細胞瘤（SV40T抗原轉染）DU145人前列腺癌細胞FDC-P1小鼠正常骨髓細胞GH3大鼠垂體瘤細胞GT1.1人垂體瘤細胞（分泌促生長激素分泌激素）HEK-293人胚腎細胞Hela人宮頸癌細胞MC3T3-E1小鼠胚胎成骨細胞MCF7人乳腺癌細胞MDA-MB-231人乳腺癌細胞MDA-MB-435s人乳腺癌細胞MDA-

質粒提取簡介及問題分析2013/06/13

一、導論質粒提取的原理:轉自復旦大學一位老師的帖子，后面是方法介紹堿裂解法從大腸桿菌制備質粒，是從事分子生物學研究的實驗室每天都要用的常規技術。可是我收研究生十幾年了，幾乎毫無例外的是我那些給人感覺什么都知道的學生卻對堿法質粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因為《分子克隆》里面只講實驗操作步驟，而沒有對原理進行詳細的論述。這是導致我的學生誤入歧途的主要原因。后來我發現其實是整個中國的相關領域的研究生水平都差不多，甚至有很多“老師”也是這個狀態。這就不得不讓人感到悲哀了。我想這恐怕和我們的

常用熒光染料的激發和發射波長2013/06/13

FluorescentDye（熒光染料）Excitation（激發波長，nm）Emission（發射波長，nm）Cy2489506GFP（RedShifted）488507YO-PRO-1491509YOYO-1491509Calcein494517FITC494518FluorX494519Alexa488490520Rhodamine110496520ABI,5-FAM494522OregonGreen?500503522OregonGreen?488496524RlboGreen?5005

DEAE-Sephadex A-50柱層析純化免疫球蛋白2013/06/13

（一）原理DEAE-SephadexA-50（二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50）為弱堿性陰離子交換劑。用NaOH將CL-型轉變為OH-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白（等電點為PH6.85～7.5），其余均屬酸性蛋白。在PH7.2～7.4的環境中，酸性蛋白均被DEAE-SephadexA-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通過柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從而便可分離獲得純化的IgG。DEAE-sephadexA-50柱層析是離子交換層析的一種。

淋巴細胞雜交瘤單克隆抗體技術2013/06/13

1975年，Kohler和Milstein發現將小鼠骨髓瘤細胞和綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞進行融合，形成的雜交細胞既可產生抗體，又可無限增殖，從而創立了單克隆抗體雜交瘤技術。這一技術上的突破不僅為醫學與生物學基礎研究開創了新紀元，也為臨床疾病的診、防、治提供了新的工具。制備單克隆抗體包括動物免疫、細胞融合、選擇雜交瘤、檢測抗體、雜交瘤細胞的克隆化、凍存以及單克隆抗體的大量生產，要經過幾個月的一系列實驗步驟，下面按照制備單克隆抗體的流程順序，逐一介紹其實驗方法。細胞融合前準備細胞融合，選擇雜交瘤抗

免疫血清的制備2013/06/13

撰稿李恩善免疫血清的制備是一項常用的免疫學實驗技術。價、高特異性的免疫血清可作為免疫學診斷的試劑（如用于制備免疫標記抗體等），也可供特異性免疫治療用。免疫血清的效價高低取決于實驗動物的免疫反應性及抗原的免疫原性。如以免疫原性強的抗原刺激高應答性的機體，常可獲得價的免疫血清。而使用免疫原性弱的抗原免疫時，則需同時加用佐劑以增強抗原的免疫原性。免疫血清的特異性主要取決于免疫用抗原的純度。因此，如欲獲得高特異性的免疫血清，必須予先純化抗原。此外，抗原的劑量、免疫途徑及注射抗原的時間間隔等，也是影響免疫

薄基底膜腎病Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究2013/06/13

薄基底膜腎病Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究張承英朱世樂章友康鄭欣鄂潔侯平薄基底膜腎病（TBMN）是以持續性鏡下血尿為主要表現的一種遺傳性腎病，腎小球基底膜（GBM）彌漫性變薄為該病惟一重要的病理學特征。既往關于Alport綜合征（Alportsyndrome,AS），另外一種以持續性鏡下血尿,GBM變薄增厚、撕裂、分層為特征的遺傳性腎病，Ⅳ型膠原α鏈分布的免疫組化研究較多，眾多研究表明,AS患者腎小球基底膜Ⅳ型膠原α3、α4、α5鏈表達缺陷［1］,而關于薄基底膜腎病Ⅳ型膠原α鏈分布的研究甚少。本

聯合檢測血清和腹水IL-6、IL-2、TNF-α對肝硬化合并SBP的診斷價值2013/06/13

趙彩彥劉金星王淑琴甄真周俊英采用ABS-ELISA法（藥盒由比利時Innogentics公司提供）和雙抗體夾心ELISA法（藥盒由法國Immunotech公司或軍事醫學科學院提供）對46例肝炎肝硬化進行了血清和腹水中IL-6、IL-2、TNF-α的測定。與正常對照組比較，肝炎肝硬化患者血清和腹水IL-6、TNF-α水平明顯升高，IL-2水平明顯降低。合并自發性腹膜炎（SBP）患者血清IL-6、TNF-α水平為（33.19±12.31）ng/L,（11.73±4.21）μg/L,腹水為（1420±

白細胞介素-2的研究進展及應用2013/06/13

隨著分子生物學、免疫學理論和技術的發展，運用重組表達技術來生產預防和治療疾病的制品已成為近幾年研究的熱點。白細胞介素-2是一種具有廣泛生物學活性的細胞因子，它能夠有效地提高免疫功能，醫學上已用于預防和治療一些常規方法難以治療的疾病，如腫瘤等；在獸醫方面因其能提高疫苗的免疫效果，尤其是在基因工程亞單位苗的免疫效果而倍受重視，展現出廣闊的應用前景。一、白細胞介素-2的受體及其生物學功能：白細胞介素-2（IL-2）是一種zui早發現的具有廣泛生物活性的細胞因子，在1979年第二屆淋巴因子會議上正式命名

先天愚型產前篩查的原理？2013/06/13

經過近20年的產前診斷經驗，發現染色體異常的胎兒檢出率并不理想，如羊水細胞培養結果只有2-3%，孕早期的絨毛細胞檢查發現異常率為7.5-10%左右。這說明原有高危人群的定義范圍還有待改進。例如目前產前診斷適應仍以高齡孕婦占絕大多數，國外為80-90%，國內高齡者較少，但在產前診斷中也占1/3左右。而先天愚型兒中只有20%是由高齡孕婦所生。因此如何從普通人群中，特別是年紀小于35歲的人群中篩選出高危者的問題已經引起許多學者的關注，并進行了有關研究。近年來已有不少國家采用在孕中期（懷孕15-20周）

為什么選擇ELISPOT?2013/06/13

ELISPOT斑點酶聯免疫分析使細胞因子分泌過程更加形象。因為細胞因子圍繞在細胞周圍，在被上清液稀釋之前，會和鄰近細胞表面的受體結合，或者降解。細胞因子和GranzemyBELISPOT實驗是zui有效的體外監控CD4或CD8T細胞抗原的方法。通過測定單個細胞因子信號及其頻率，可以建立具有不同集落大小的特殊T細胞庫。ELISPOT實驗檢測細胞因子的*優勢☆從1到10，000，000，可以測量體外細胞因子的分泌頻率，和ELISA以及四聚體染色、細胞內細胞因子染色相比，具有靈敏度高、特異性好的特點。

Tumor M2-PK 丙酮酸激酶PK盒子2013/06/13

ELISA檢測試劑盒操作說明書簡介：丙酮酸激酶PK是糖酵解途徑的一個關鍵酶，目前研究表明，幾乎所有不同組織來源的腫瘤均伴有丙酮酸激酶的異構重整體M2-PK的過度表達,故稱為腫瘤型M2-PK（TumorM2-PK，TuM2-PK）。在正常細胞中，M2-PK主要以三聚體的形式存在，而在腫瘤細胞中，M2-PK大量表達并轉變為主要以二聚體的形式存在。三聚體的M2-PK與磷酸烯醇丙酮酸PEP親和力很高，而二聚體的M2-PK與PEP的親和力則低的多，后者因此導致磷酸烯醇類物質的堆積，這有利于腫瘤細胞進行無氧