成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>技術(shù)參數(shù)>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

DEAE-Sephadex A-50柱層析純化免疫球蛋白

來源:北京博蕾德生物科技有限公司   2013年06月13日 14:08  

(一) 原理

  DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基-葡聚糖A-50)為弱堿性陰離子交換劑。用NaOH將CL-型轉(zhuǎn)變?yōu)镺H-型后,可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白(等電點為PH6.85~7.5),其余均屬酸性蛋白。在PH7.2~7.4的環(huán)境中,酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附,只有γ球蛋白不被吸附。因此,通過柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從而便可分離獲得純化的IgG。DEAE-sephadexA-50柱層析是離子交換層析的一種。

  (二)試劑和器材

  1、試劑:

  (1)鹽析提取的人γ球蛋白;

  (2)0.5N NaOH,0.5N HCl 2M NaCl,10%NaN3;

  (3)DEAE-Sephadex A-50,聚乙二醇(PEG);

  (4)0.1M, PH7.4 PB(配制見鹽析部分);

  2、器材:

  (1)層析玻璃柱(1.3×40cm),滴定鐵架,自由夾,螺旋夾,尼龍紗(200目);

  (2)普通冰箱,751桮型紫外分光光度計,電導儀、抽濾裝置(包括抽氣機、干燥瓶、布氏漏斗、橡皮墊圈、抽濾瓶),PH計;

  (3)透析袋、座標紙、濾紙、PH精密試紙;

  (4)量筒、燒杯、試管、吸管、滴管、滅菌小瓶等。

  (三) 操作步驟

  1、DEAE-Sephadex A-50預(yù)處理

  稱DEAE-Sephadex A-50(下稱A-50)5克,懸于500ml蒸餾水,1小時后傾去上層細粒。按每克A-50加0.5N NaOH 15ml的比例,將A-50浸泡于0.5N NaOH中,攪勻,靜置30分鐘,裝入布氏漏斗(墊有2層濾紙)中抽濾,并反復用蒸餾水抽洗至PH呈中性;再以0.5N HCl同上操作過程處理,zui后以0.5N NaOH再處理一次。處理完后,將A-50浸泡于0.1M,PH 7.4 PB中過夜。

  2、裝柱

  (1)將層析柱垂直固定于滴定鐵架上,柱底墊一園尼龍紗,出水口接一乳膠或塑料管并關(guān)閉開關(guān)。

  (2)將0.1M,PH7.4 PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度,再倒入經(jīng)預(yù)處理并以同上緩沖液調(diào)成稀糊狀的A-50。待A-50凝膠沉降2-3cm厚時,啟開出水口螺旋夾,控制流速1ml/分鐘,同時連續(xù)倒入糊狀A(yù)-50凝膠至所需高度。

  (3)關(guān)閉出水口,待A-50凝膠*沉降后,柱面放一園形濾紙片,以橡皮塞塞緊柱上口,通過插入橡皮塞之針頭及所連接的乳膠或塑料管與洗脫液瓶相連接。

  3、平衡:啟開出水口螺旋夾,控制流速12-14滴/分鐘,使約2倍床體積的洗脫液流出。并以PH計與電導儀分別測定洗脫液及流出液之PH值與離子強度是否相同。達到一致時關(guān)閉出水口,停止平衡。

  4、加樣及洗脫:

  啟開上口橡皮塞及下口螺旋夾,使柱中液體緩慢滴出,當柱面液體與柱面相切時,立即關(guān)閉出水口,以毛細滴管沿柱壁加入樣品(體積應(yīng)<床體積的2%,蛋白濃度以<100mg為宜)。松開出水口螺旋夾使柱面樣品緩慢進入柱內(nèi),至與柱面相切時,立即關(guān)閉下口,以少量洗脫液洗柱壁2-3次;再放開出水口,使洗液進入床柱,隨后立即于柱面上加入數(shù)ml洗脫液,緊塞柱上口,使整個洗脫過程成一密閉系統(tǒng)。并控制流速12~14滴/分鐘。

  5. 收集:開始洗脫的同時就以試管進行收集。每管收集3~5ml。共收集10~15管。

  6. 測蛋白:以751-G型紫外分光光度計分別測定每管OD280nm,與OD260nm,按前述公式計算各管蛋白含量。并以O(shè)D280nm為縱座標,以試管編號為橫座標,繪制洗脫曲線。

  7. 合并、濃縮:將洗脫峰的上坡段與下坡段各管收集液分別進行合并,以PEG(MW6000)洗縮至所需體積,加入0.02%NaN3防腐劑,于4℃保存?zhèn)溆谩?/font>

  8. A-50凝膠的再生:在柱上先以2M NaCl洗柱上的雜蛋白至流出液的OD280nm<0.02,再以蒸餾水洗去柱中鹽。然后按預(yù)處理過程將A-50再處理一遍即達再生。近期用時泡于洗脫緩沖液中4℃保存;近期不用時,以*洗2次,再置50℃溫箱烘干,裝瓶內(nèi)保存。

  (四) 注意事項

  1. 柱的選擇:從理論上說,只要柱足夠長,就得獲得理想的分辨率,但由于層析柱流速同壓力梯度有關(guān),柱長增加使流速減慢,峰變寬,分辨率降低。柱的直徑增加,使液體流動的不均勻性增加,分辨率明顯下降。

  2. 純化過程必須嚴格控制脫緩沖液的PH及離子強度。樣品與A-50凝膠必須用洗脫緩沖液*平衡后,才能進行柱層析。

  3. 所裝的柱床必須表面平整,無溝流及氣泡,否則應(yīng)重裝。

  4. 洗脫過程中應(yīng)嚴格控制流速,且勿過快。

  5. 上樣的體積要小,濃度不宜過高。

  6. 加樣及整個洗脫過程中,嚴防柱面變干。

免責聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負版權(quán)等法律責任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
主站蜘蛛池模板: 翁公的巨物挺进了密进| 美女内射视频WWW网站午夜| 亚洲欧美日韩永久在线| 国产人妻无码一区二区三区不卡| 亚洲精品久久久AV无码专区| 国产精品久久精品久久| 成人无码精品1区2区3区免费看| 欧美激情久久久久久久久| 成人大香蕉在线| 日韩欧美久久久久久| 日韩理论电影免费在线观看| 日本黄H兄妹H动漫一区二区三区| 在线日韩中文字幕| 国产日韩欧美国产欧美日韩| 日韩精品亚洲欧美| 人妻无码AV中文系统久久免费| COM忘忧草WWW日本污污黄| 亚洲国产精品久久久久久| 男人肌肌桶女人肌肌的免费网站| 国产偷人妻精品一区二区在线| 欧洲精品久久久av无码电影| 91福利国产在线观看网站| 欧美成人精品 一区二区三区| 欧美aaa级片一级片网站| 蜜臀久久99精品久久久久| 人妻中文字幕不卡精品| 久久精品国产72国产精福利| 偷拍日本中文字幕| 亚洲区欧美区偷拍区中文字幕| 在线看片国产日韩欧美| 成熟人妻AV无码专区A片| 欧美真人性做爰全过程| 古风一女N男到处做高H| 无码人妻精品一二三区免费| 韩漫漫画在线免费看视频| 国产亚洲精品久久综合阿香蕉| 日本在线观看av| 91香蕉福利一区二区三区| 欧美阿v高清资源不卡在线播放| 国产人成无码视频在线观看| 韩国年轻的妈妈|