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李記生物細胞轉染試劑常見問題（一）

來源：和元李記（上海）生物技術有限公司 2022年11月07日 14:44

涉及產品

Q1：李記有3款轉染試劑，這3款有什么區別？和Li**對比效果如何？

A1：我司自行測試與收集客戶反饋數據，得到類似結論：

　　效率方面：EZ Trans Plus＞Li**2000≈EZ Trans(高效)＞Li** 3000＞EZ Trans(低毒)

　　毒性方面：EZ Trans(低毒)≈Li**3000＜EZ Trans Plus＜EZ Trans(高效)≈Li**2000

Q2：我們傳的細胞有抗生素，抗生素是絕對會影響轉染效率嗎？

A2：能不加盡量不加，理論上抗生素進不到細胞內，但是在轉染試劑的作用下，細胞的通透性增加，抗生素可能進到細胞內，對實驗結果完成影響。

Q3：protocol提到，要用Opti-MEM稀釋質粒和轉染試劑。不能用1640稀釋么？另外質粒和轉染試劑為什么要先稀釋然后再混合？不能把轉染試劑直接加到質粒溶液中混合，然后再加培養基稀釋么？

A3：EZ Trans細胞轉染液屬于陽離子類型的轉染試劑，它與DNA形成復合物需要一定的條件，在合適的濃度下，有利于陽離子包裹DNA形成良好形態的復合物進入細胞。

　　如果直接把兩者直接混合，兩者容易很快形成聚合物，聚集相態多樣，有可能使DNA暴露在表面，不容易進入細胞，進而降低轉染效率。所以EZ Trans和DNA的混合順序也很重要。

　　培養細胞大多會用到胎牛血清，血清成分復雜，沒有人能說清成分及含量。細胞轉染液成分比較明確，但是不能確定是會不會與胎牛血清的不明成分結合，事實上這種現象在大多數轉染試劑中都會造成不良影響，所以在形成EZ Trans-DNA復合物過程中要避免血清的影響。

Q4：protocol提到，“24-48小時內檢測轉染效率”指的是去除含復合物的培養液換成含血清的培養基之后的24-48h，還是指加入復合物后轉染24-48h？

A4：所有時間都是從EZ Trans-DNA復合物與細胞接觸開始算。

Q5：我就是問的體內直接轉染小鼠。你們現有的protocol是體外實驗的方法?

A5：體內直接轉染目前最多的是腺病毒，慢病毒，腺相關病毒。轉染試劑直接在體內用的報道我們目前沒有聽過。現有的做法是細胞在體外培養，轉染篩選后再打入體內。

文中涉及的生物試劑產品都為上海李記生物科技有限公司提供，還有WB技術服務等竭誠為您服務

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