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化工儀器網>產品展廳>試劑標物>行業專用試劑>生物試劑>AC12L072/AC12L073 JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

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AC12L072/AC12L073 JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

參考價 580.00-1180.00
具體成交價以合同協議為準
規格
20T580.00元999 件 可售
100T1180.00元999 件 可售

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  公司前身為上海李記生物科技有限公司,成立于2015年。和元李記在2023年由和元生物和李記生物合資成立,是集研發、生產、銷售為一體的國產生物試劑公司,專注于生命科學和生物技術領域,致力于為客戶提供技術優秀 、方便易用、經濟高效的產品,產品范圍包括:細胞生物學、分子生物學、免疫學和生物化學相關的實驗試劑及試劑盒。

  目前在全國40余座城市均有授權代理;直接服務終端超千家,涵蓋CRO、藥企、高校、醫院和科研院所;李記產品已幫助客戶發表數百篇SCI,多篇CNS。

  優勢產品:蛋白Marker、EZ Trans細胞轉染試劑、CCK-8、支原體快速檢測試劑盒、核酸染料(GelRed/GelGreen)、EZ Protein any KD PAGE蛋白電泳試劑盒、熒光染料(Alexa Fluor 488, 555, 647,CY3, cy5)、胎牛血清、細胞凋亡檢測試劑盒等。

胎牛血清,轉染試劑(高效),凍存液(普通),cck-8,1640培養基,PBS液體,凋亡試劑盒,熒光素鉀鹽,蛋白Mark,發光液(超敏),快速封閉

供貨周期 現貨 規格 20T
貨號 AC12L072/AC12L073 應用領域 生物產業

JC-1 線粒體膜電位檢測試劑盒

產品描述

線粒體膜電位(ΔΨm)降低是細胞早期凋亡的關鍵標志。這種膜電位的下降源于線粒體膜通透性的改變,主要由促凋亡蛋白(如 Bax 二聚體形成以及 Bid、Bak、Bad 的激活)誘導線粒體外膜形成孔隙所致。伴隨這些蛋白的激活,細胞色素 C 會從線粒體釋放到細胞質中。

JC-1 是一種廣泛應用于檢測 ΔΨm 的理想熒光探針,適用于細胞、組織或純化線粒體樣本。其檢測原理基于膜電位依賴性的熒光狀態轉換:在線粒體膜電位較高時,JC-1 聚集在線粒體的基質中,形成聚合物,產生紅色熒光;在線粒體膜電位較低時,JC-1不能聚集在線粒體的基質中,此時 JC-1 為單體,可以產生綠色熒光。通過 JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉變可以很容易地檢測到膜電位的下降,同時也可以用 JC-1 從紅色熒光到綠色熒光的轉變作為細胞凋亡早期的一個檢測指標。

JC-1單體的最大激發波長為 510 nm,最大發射波長為527 nmJC-1 聚合物的最大激發波長為 585 nm,最大發射波長為 590 nm。這款試劑盒操作簡單快速,可以通過流式細胞儀,熒光顯微鏡或熒光酶標儀檢測。

訂購信息

產品名稱

貨號

規格

JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

AC12L072

20T

JC-1線粒體膜電位檢測試劑盒

AC12L073

100T

產品組分

組分

規格(20T

規格(100T

A. JC-1,100×   in DMSO

100μL

500μL

B. 10×   Assay Bu?er

5mL

25mL

C. CCCP,   50 mM

10μL

50μL

運輸與保存

藍冰運輸。-20℃避光保存,有效期36個月。注:B組份也可以放4℃保存;為避免反復凍融,AC組分建議分裝。

光譜特性

Ex/Em    510/527 nm(單體物,綠色)              585/590 nm(聚合物,紅色)

使用方法

1.試劑準備:

使用前請將產品瞬時離心至管底,再進行后續操作。

1)配制 JC-1 工作液:按如下方案配置1mL 1×JC-1染色工作液:先取10 µL 100×JC-1染色液,加入到890 µL滅菌的ddH2O中,渦旋混勻,再向上述混合液中加入100 µL 10× Assay Buffer,渦旋混勻,即可得到1×JC-1染色液。

注:① 配置體積可同比例擴大或縮小。②JC-1(100× in DMSO)在較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內,可以 20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。③工作液配置完成后,一定要及時孵育細胞,避免工作液產生沉淀。

2)配制1× Assay Buffer:用 ddH2O 91 稀釋檢測緩沖液(如1 mL 10×assay buffer + 9 mL ddH2O)。

2. 染色

開始實驗之前,請確保JC-1CCCP溶液已恢復至室溫。

(1)     按實驗所需,在培養板中接種細胞(懸浮細胞不要超過106/mL)。

(2)     陽性對照組:根據培養基的量加入相應體積50 mMCCCP溶液(如終濃度為50 μM1 mL培養基加入1 μL 50 mMCCCP溶液),37℃ 孵育20 min。對于特定的細胞,CCCP的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關文獻資料確定。

3. 對于貼壁細胞(熒光顯微鏡或熒光酶標儀的檢測流程)

1)對于六孔板的一個孔,吸除培養液,根據具體實驗如有必要可以用PBS 或其它適當溶液洗滌細胞一次,加入1 mL 細胞培養液。細胞培養液中可以含有血清和酚紅。

2)加入1 mL JC-1 染色工作液,充分混勻。細胞培養箱中37℃孵育20min。

3)孵育結束后,吸除上清,加入1 mL 預冷的1×Assay Buffer4℃左右洗滌效果較好),吸除上清,重復一次。

4)加入2 mL 細胞培養液,培養液中可以含有血清和酚紅,用熒光顯微鏡下觀察,也可以用熒光酶標儀檢測。

注:①如果希望采用流式細胞儀檢測,染色前*行消化處理,將其制成細胞懸液,參考懸浮細胞的檢測方法。

JC-1 染色并洗滌完成后盡量在30 min 內完成后續檢測。在檢測前需冰浴保存。

4. 對于懸浮細胞(熒光顯微鏡和流式細胞儀檢測流程)

1)取5×105 個細胞,重懸于0.5 mL 細胞培養液中,細胞培養液中可以含血清和酚紅。

2)加入0.5 mL JC-1 染色工作液,顛倒數次混勻。細胞培養箱中37℃孵育20 min。

3)孵育結束后,1000 rpm 離心5 min,棄上清(注意盡量不要吸除細胞)。

4)加入1 mL 預冷的1×Assay Buffer 重懸細胞(4℃左右洗滌效果較好),1000 rpm 離心5 min,去除上清,重復一次。

5)再用適量預冷的1×Assay Buffer 重懸,用熒光顯微鏡觀察,也可以用流式細胞儀分析。

注:JC-1 染色并洗滌完成后盡量在30 min 內完成后續檢測。在檢測前需冰浴保存。

5. 純化后的線粒體

(1)0.9 mL JC-1 染色工作液中加入0.1 mL 總蛋白量為10~100 μg 純化的線粒體。

(2)熒光分光光度計或熒光酶標儀檢測:混勻后直接用熒光分光光度計進行時間掃描(time scan),

(3)激發波長為485 nm,發射波長為590 nm。如果使用熒光酶標儀,激發波長不能設置為485 nm 時,可以在475~520 nm 范圍內設置激發波長。

(4)用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察。

6. 結果分析

(1)流式細胞儀分析

對于正常細胞,在PE PI(FL2)通道可以檢測到線粒體內的JC-1 紅色聚集物;對于凋亡細胞,在FITC(FL1)通道可以檢測到JC-1 綠色單體物。

(2)熒光顯微鏡分析

1)采用可以同時檢測熒光素和羅丹明,或者熒光素與Texas Red 的雙通道濾波器熒光顯微鏡觀察細胞。

2)對于正常細胞,擁有完整的線粒體膜電位,線粒體在590 nm 處發出紅色熒光;對于凋亡或壞死的細胞,染料以單體形式存在,在530 nm處發出綠色熒光。

(3)熒光酶標儀分析

1)紅色熒光:Ex/Em550/600 nm;綠色熒光:Ex/Em485/535 nm。

2)計算紅綠熒光比值:與正常細胞相比,在凋亡或壞死細胞中,紅綠熒光比值會降低。

方法

細胞類型

貼壁/分散

孵育條件

染料濃度

溫度

時間

顯微鏡

大鼠神經元細胞

貼壁

2.0 μg/mL

37°C

20~30 min

大鼠神經元細胞

分散

1.0 μg/mL

37°C

20 min

大鼠O-2A少突膠質細胞

貼壁

10 μg/mL

37°C

10 min

PC12細胞

貼壁

10 μg/mL

37°C

10 min

大鼠心肌細胞

分散

10 μg/mL

37°C

10 min

流式細胞儀

人成纖維細胞

分散

0.3 μg/mL

37°C

60 min

Colo-205細胞

分散

10 μg/mL

37°C

10 min

U937細胞

分散

10 μg/mL

22°C

10 min

注意事項

1.     本產品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

2.     熒光染料均存在淬滅問題,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。


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