植物原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins, OPC）試劑盒說(shuō)明書
微量法 100T/48S
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一類黃烷醇單體及其聚合體的多酚化合物，廣泛存在于植物的各種器官中，具有ji強(qiáng)的抗氧化性和清除自由基的作用，廣泛的應(yīng)用于醫(yī)藥，食品，化妝品，保健品行業(yè)。
測(cè)定原理：
在酸性條件下，植物原花青素 A 環(huán)上的間苯二酚和間苯san酚與香草醛發(fā)生縮合反應(yīng)，產(chǎn)生有色化合物，在 500nm 處有特征吸收峰，測(cè)定 500nm 光吸收值可計(jì)算原花青素的含量。
組成：
產(chǎn)品名稱 | BD6002-100T/48S | Storage |
提取液： | 60%乙醇，自備 | 4℃ |
試劑一：液體 | 8%鹽酸 10ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 4℃避光 |
說(shuō)明書 | 一份 |
試劑二：粉劑 0.1g×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加 10ml 甲醇溶解。測(cè)定工作液：臨用前按照用量將試劑一和試劑二按照 1:1 混合。
空白工作液：臨用前按照用量將試劑一和甲醇按照 1:1 混合。
自備儀器和用品：
天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水、鹽酸、無(wú)水乙醇和甲醇。
OPC 提取：
稱取約 0.1g 樣本，加入 2ml 提取液，勻漿后，60℃振蕩提取 2h， 10000g，25℃，離心 10min，取上清待測(cè)。
測(cè)定操作表
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 500nm，蒸餾水調(diào)零。
2、操作表
| 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
樣本（μl） | 40 | 40 |
測(cè)定工作液（μl） |
| 160 |
空白工作液（μl） | 160 |
|
混勻，30℃水浴 30min，于微量石英比色皿/96 孔板中檢測(cè) 500nm 處吸光值，ΔA=A 測(cè) 定-A 對(duì)照，每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
OPC 計(jì)算公式：
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0194x+0.0006，R2=0.999
OPC 含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3
= 0.515×(ΔA-0.0006）÷W
V 樣總：加入提取液體積，2ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml；W：樣品質(zhì)量，g
b. 用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0097x+0.0006，R2=0.999
OPC 含量（mg/g 鮮重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)×10-3
= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W
V 樣總：加入提取液體積，2ml； V 反總：反應(yīng)總體積，0.2ml；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，0.04ml；W：樣品質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1、配制好的試劑二應(yīng)盡快使用，4℃保存時(shí)間不超過(guò)一個(gè)月。
2、吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01～0.8 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計(jì)算公式中參與計(jì)算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。
3、*低檢出限為 10μg/g。
