土壤硝態氮試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
硝態氮是指硝suan鹽中所含有的氮元素，土壤中的有機物分解生成銨鹽，被氧化后變為硝態氮。土壤中硝態氮是高等植物吸收氮的主要形式之一，其含量直接關系到作物的產量與品質。
測定原理：
在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH>12）呈黃色，在一定范圍內，其顏色深淺與含量成正比，可比色測定計算得硝態氮含量。
試劑組成和配制：
產品名稱 | BO6055-100T/96S | Storage |
試劑一：粉劑 | 2 支 | 4℃避光 |
試劑二：液體 | 50ml | 4℃ |
說明書 | 一份 |
試劑一：粉劑×2 支，4℃避光保存。臨用前根據用量每支加 1ml 濃硫酸充分溶解。
自備儀器和用品：
蒸餾水、天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、振蕩儀。
樣本處理：
按照土壤質量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 新鮮土樣，加入 1mL 蒸餾水）加入蒸餾水，置于振蕩儀中振蕩提取 1h，25℃，10000g 離心 10min，取上清待測。
測定操作表：
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 410nm，蒸餾水調零。
2、操作表（于EP 管中加入下列試劑）：
| 空白管 | 測定管 |
樣本（μl） |
| 10 |
蒸餾水（μl） | 10 |
|
試劑一（μl） | 20 | 20 |
充分混勻，25℃靜置 30min |
混勻，渦旋振蕩，使出現的沉淀充分溶解，轉移 200uL 至微量石英比色皿/96 孔板中測定 410nm 處吸光值A，△A=A 測定管-A 空白管。
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0156x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N 含量（mg/kg 鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0156÷（W÷V 樣總） =64.1×（△A-0.0073）÷W V 樣總：加入提取液體積，1ml，W：樣本質量，g
b. 用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0078x+0.0073，R2=0.9997
NO3—— N（mg/kg 鮮重）=（△A-0.0073）÷ 0.0078÷（W÷V 樣總）=128.2×（△A-0.0073）÷W V 樣總：加入提取液體積，1ml，W：樣本質量，g
注意事項：
1、硝酸根不為土壤膠體吸附，且易溶于水，很容易在土壤內部移動，所以測定此指標時應注意采樣深度一致。
2、土壤經風干或者烘干很容易引起 NO3—— N 的變化，所以最好采用新鮮土壤進行測定，以準確反映該指標含量。
3、試劑一配制好后盡快使用，4℃可保存一周。
4、試劑一和試劑二均具有強腐蝕性，操作時需做好防護措施。
5、*低檢出限為 100μg/kg。
