土壤總磷/有機(jī)磷/無(wú)機(jī)磷含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書
分光光度法 50 管/48 樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
土壤總磷包括有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷，其中無(wú)機(jī)磷能夠直接被植物利用。土壤有機(jī)磷經(jīng)過(guò)礦化分解而轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷。同時(shí)測(cè)定土壤總磷、有機(jī)磷和無(wú)機(jī)磷，可以全面反映土壤磷營(yíng)養(yǎng)狀況。
測(cè)定原理：
利用鉬藍(lán)法定磷。取一份土樣，通過(guò)浸提法測(cè)定土壤無(wú)機(jī)磷含量；另外取一份土樣，經(jīng)高溫灼燒后，土壤有機(jī)磷轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷，測(cè)得土壤總磷含量；總磷含量減去無(wú)機(jī)磷含量，即可計(jì)算??有機(jī)磷含量。
試劑組成和配制：
產(chǎn)品名稱 | BO6050-50T/48S | Storage |
試劑一：液體 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑二：液體 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1 瓶 | 4℃避光 |
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 | 1 支 | 4℃ |
說(shuō)明書 | 一份 |
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 20 ml 蒸餾水，充分溶解后加入 10 ml 試劑二，混勻。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，20 μ mol/L 無(wú)機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)品，4℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式水浴鍋，分析天平、可調(diào)式移液器、550℃高溫電爐，1ml 玻璃比色皿、蒸餾水、100 目篩子（可更小）。
土壤不同形態(tài)磷提取：
1. 無(wú)機(jī)磷：稱取通過(guò) 100 目篩子的風(fēng)干土樣 0.1g，轉(zhuǎn)移到 10 ml 離心管，加入 10ml 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃離心 10min，取上清液一，用于無(wú)機(jī)磷含量測(cè)定。
2. 總磷提取：取通過(guò) 100 目篩子的風(fēng)干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.1g，轉(zhuǎn)移到 10 ml 離心管，加入 10ml 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000g，25℃，離心 10min，取上清液二，用于總磷含量測(cè)定。
測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。
3. 空白管：取EP 管，依次加入 500μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP 管，依次加入 50μl 標(biāo)準(zhǔn)液，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 測(cè)定管：取 EP 管，依次加入 50μl 上清液一或者上清液二，450μl 蒸餾水，500μl 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測(cè)定吸光度，記為A 測(cè)定管。
注意事項(xiàng):
1、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
2、試劑三配制過(guò)程中，可能會(huì)產(chǎn)生黑色固體，其不影響結(jié)果，注意吸取時(shí)不要將黑色固體吸入。
土壤磷含量計(jì)算：
1. 土壤無(wú)機(jī)磷含量（μmol /g）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷W=0.2×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L； W：土壤樣品質(zhì)量，g； V 總：上清液一總體積，10 ml=0.01 L。
2. 土壤總磷含量（μmol /g 干重）=[C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總
÷W=0.2×(A 測(cè)定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)液：20 μmol/L；V 標(biāo)準(zhǔn)液：50μl=0.05 ml；W：土壤樣品質(zhì)量，g；V 總：上清液二總體積，10 ml=0.01 L。
3. 土壤有機(jī)磷（μmol /g）=土壤總磷-土壤無(wú)機(jī)磷
