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實時熒光定量PCR的優化（四）2021/10/12
這期我們來學習設計TaqMan探針，應該考慮的因素有以下這些......1、TaqMan探針的最佳長度在20bp，不超過30bp，這樣才能實現熒光淬滅。有些情況下超過30bp也是可以的，需要將淬滅基團...
實時熒光定量PCR的優化（三）2021/10/12
本期介紹設計引物，得到實時熒光PCR引物對，這種方法也可以用于普通PCR。1、長度應該在18～30bp，保證結合的特異性。2、熔解溫度（Tm值）應在55～60°C，兩條引物的Tm值應相差2～3°C。3...
實時熒光定量PCR的優化（二）2021/10/12
如果你所研究的靶序列有前人建立過實時熒光定量PCR的方法，就可以在公共數據庫中查找，查看擴增效率、特異性、靈敏度等信息，省去從頭開始的時間。注意，使用前人建立的方法前，需要再次驗證這個方法的參數是不是...
實時熒光定量PCR的優化（一）2021/10/12
如果是病毒定量和SNP基因分型的實時熒光定量PCR，我們需要盡可能高特異性；如果是病原體、mRNA檢測，我們需要高靈敏度。想要提高PCR擴增效率、特異性及靈敏度，我們可以通過一系列措施優化實時熒光定量...
qPCR實驗為什么要制作熔解曲線？2021/10/11
熒光DNA結合染料法的缺點是它們能在反應中結合所有DNA雙鏈，包括在實時熒光PCR中產生的引物二聚體，和其他非特異性產物，引起大量的背景噪聲信號。這種噪聲會影響我們對靶基因產量的評估，甚至熒光強度和靶...
經濟快捷的SNP位點研究方法-SNP基因分型2021/10/11
SNP，全稱SingleNucleotidePolymorphisms，是指在基因組上單個核苷酸的變異。目前很多人仍然使用測序法來進行研究，具有準確、直觀的優點。但有一種方法，能間接的研究SNP，且經...
生化轉染的另一種選擇，磷酸鈣介導的轉染2021/10/11
磷酸鈣介導的轉染方法應用于將外源DNA轉入培養的細胞，已有45年以上的歷史。Graham和vanderEb在磷酸鈣存在下，將病毒DNA導入哺乳動物細胞的這一工作，為基因在多種哺乳動物細胞中進行瞬時表達...
共轉化，篩選轉染細胞的實用工具2021/10/11
想要達到轉染的目的，即分析轉染基因的功能和表達，需要轉染的基因穩定整合進入宿主染色體。根據細胞類型，細胞群體中，最高有80%的細胞，以瞬時表達的方式表達轉染的基因。但對于穩定轉染，好的情況，也只有1/...
如何提高磷酸鈣轉染的效率？2021/10/11
提高磷酸鈣轉染法效率的共通步驟，目的都是為了避免產生會被細胞內吞、加工失效的大顆粒沉淀。提高轉染效率的操作有以下這些：1、將小分子DNA整合在高分子質量基因組DNA上，以大分子作為運載體，能提高轉染效...
怎么提高電穿孔法轉染的效率？2021/10/9
電穿孔法難點在于提高電穿孔的效率。實驗操作者一般能從電轉儀廠家得到轉染的詳細方案和優化指導。當你需要自己優化轉染效率時，可以從以下方面進行：1、外加電場的強度：電壓過低，細胞膜不能形成小孔，使得外源分...
電穿孔法轉染如此“萬能”，為什么還要用其他方法？2021/10/9
同學們在進行轉染時，肯定被各種各樣的轉染試劑挑花了眼吧。商業化的轉染試劑通常針對多重細胞類型、不同的核酸和各種特定的用途，也就是說，你要從種類繁多的試劑中挑選適合你的。這時候，電穿孔法轉染就進入了我們...
我的脂質體轉染實驗效率低，怎么辦？2021/10/9
脂質體介導轉染實驗指的是，脂質包裹待轉染DNA形成復合體，與細胞膜融合或內吞，進入細胞。然而，大量的脂質體-DNA復合體，只有一小部分能運送到細胞質并進入細胞核中。如何提高脂質體介導轉染效率的關鍵，就...
脂質介導的轉染為什么是首先選的轉染方法？2021/10/9
在細胞轉染實驗中，我們常常要根據不同的實驗目的，轉染細胞的不同，選擇我們將要使用的實驗方法。脂質體介導的轉染是我們的首先選擇，他具有易操作，重復性好，低毒性和適用于懸浮培養體系細胞的特點，在很多轉染方...
常用的卵巢癌細胞的培養及細胞表達2021/10/9
整理一篇關于卵巢癌細胞的培養方法和細胞的特征特點，由于卵巢癌早期缺少癥狀，即使有癥狀也不特異，篩查的作用又有限，因此早期診斷比較困難，就診時60%～70%已為晚期，而晚期病例又療效不佳，卵巢癌方向的研...
CCK-8，細胞增殖檢測較為合適的選擇2021/10/8
什么是細胞增殖檢測？細胞增殖是細胞在周期調控的因子下，通過DNA復制等反應，完成細胞分裂的過程。在細胞增殖中，新細胞的產生過程影響著體內所有組織的發育、生長和維持，同時，它也被嚴格調控著，以防失控的細...
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