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共轉化,篩選轉染細胞的實用工具

時間:2021/10/11閱讀:1677
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想要達到轉染的目的,即分析轉染基因的功能和表達,需要轉染的基因穩定整合進入宿主染色體。


根據細胞類型,細胞群體中,最高有80%的細胞,以瞬時表達的方式表達轉染的基因。但對于穩定轉染,好的情況,也只有1/1000的成功率——細胞能穩定表達轉染的基因。


所以,我們需要通過篩選活的新表型(標記)的細胞,來分離穩定轉染體。方法是將標記的基因和待轉染的基因進行重組、連接,共同轉染到細胞核內。這種物理上沒有關聯的基因整合成1個序列,并在同一轉化細胞內表達的這種現象,叫做共轉化。


那么,篩選具體是如何進行的呢?


一般情況下,這個標記是某種編碼抗生素抗性的基因,和待轉染基因一起在細胞上表達,如第一個在哺乳動物細胞上廣泛使用的篩選基因,編碼胸苷激酶(TK)的病毒基因。


待轉染的細胞系,是不含TK的哺乳動物細胞系,在轉染成功后,才會變成含TK的細胞系,才能在氨基嘌呤存在的培養基中生存。


因此,共轉化是一個篩選細胞的實用方法。


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