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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年

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我的脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)效率低,怎么辦?

時(shí)間:2021/10/9閱讀:2141
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脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)指的是,脂質(zhì)包裹待轉(zhuǎn)染DNA形成復(fù)合體,與細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞,進(jìn)入細(xì)胞。然而,大量的脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體,只有一小部分能運(yùn)送到細(xì)胞質(zhì)并進(jìn)入細(xì)胞核中。

 

如何提高脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵,就在這一步:提高復(fù)合體進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)的效率。

 

1、避免使用陰離子試劑,使用新一代聚陽(yáng)離子試劑,適用范圍廣,毒性相較以前的脂質(zhì)試劑小。

 

2、使用陽(yáng)離子脂質(zhì)與DNA的*佳比例,以及一定數(shù)量細(xì)胞的陽(yáng)離子脂質(zhì)用量??上蛸?gòu)買(mǎi)試劑的公司進(jìn)行詢問(wèn)。

 

這是因?yàn)檫^(guò)量的脂質(zhì)容易受到培養(yǎng)皿中其他帶電荷物質(zhì)的干擾,如細(xì)胞外基質(zhì)中的硫酸軟骨素。

 

3、待轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)該從凍存庫(kù)中重新培養(yǎng)。轉(zhuǎn)染過(guò)程中,細(xì)胞在匯合狀態(tài)不應(yīng)超過(guò)24小時(shí),單層細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)中期。

 

4、轉(zhuǎn)染過(guò)程中,培養(yǎng)基不建議加入抗生素。轉(zhuǎn)染試劑使細(xì)胞通透性增加,進(jìn)入細(xì)胞的抗生素濃度增加,會(huì)產(chǎn)生一定的細(xì)胞毒性。

 

5、某些血清蛋白可能會(huì)干擾脂質(zhì)體-DNA復(fù)合體形成,因此應(yīng)在無(wú)血清狀態(tài)下形成復(fù)合體,后續(xù)過(guò)程可添加血清。

 

6、提高待轉(zhuǎn)染基因的純度,DNA的260nm:280nm應(yīng)為1.8 。

 

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