化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的兔脾淋巴采用機械研磨法結合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為1×106cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的兔脾淋巴經過檢測，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 兔脾淋巴原代細胞 | 組織來源 | 脾臟 |
英文名稱 | Rabbit Spleen Lymphocyte Cells | 貨號 | YS-01X7818 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
兔脾淋巴細胞分離自脾臟組織；脾臟是機體大的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細胞和巨噬細胞，是機體細胞免疫和體液免疫的中心。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處，與9－11肋相對，長軸與第10肋一致。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰，前方有胃，后方與左腎、左腎上腺毗鄰，下端與結腸脾溝相鄰，地柔軟的網(wǎng)狀內皮細胞器官。淋巴細胞（lymphocyte）白細胞的一種，由淋巴器官產生，機體免疫應答功能的重要細胞成分。淋巴器官根據(jù)其發(fā)生和功能的差異，可分為中樞淋巴器官（又名初級淋巴器官）和周圍淋巴器官（又名次級淋巴器官）兩類。前者包括胸腺、腔上囊或其相當器官（有人認為在哺乳動物是骨髓）。它們無須抗原刺激即可不斷增殖淋巴細胞，成熟后將其轉送至周圍淋巴器官。后者包括脾、淋巴結等。成熟淋巴細胞需依賴抗原刺激而分化增殖，繼而發(fā)揮其免疫功能。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：懸浮
細胞形態(tài)：圓形
傳代特性：不增殖；不傳代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔脾淋巴細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產品：
A498-EGFP-puro人腎癌細胞 Human renal cell carcinoma A498-EGFP-puro cells DMEM+10% FBS+1%P/S+2ug/ml puromycin | 酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體 |
酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體 | 轉醛醇酶抗體 |
腫瘤抑制基因P53蛋白抗體（野生型P53） | 酸化葡萄糖合成酶1抗體 |
主導控制樣蛋白1抗體 | 酸化細胞分裂周期蛋白25B抗體 |
酸化葡萄糖合成酶1抗體 | 轉醛醇酶抗體 |
GDF15 Protein Human 重組人 GDF-15 蛋白 (Fc 標簽) | 中國倉鼠卵巢細胞;TPO-CHO-I |
SMC-1細胞，胸膜細胞瘤 早幼粒急性白血病細胞系,HL-60細胞 小鼠子細胞;U14 | 小鼠樹突狀細胞肉瘤低轉移細胞(綠色熒光蛋白標記);DG6-GFP |
人子宮內膜上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | CXCL9 Protein Mouse 重組小鼠 CXCL9 / MIG / C-X-C motif chemokine 9 蛋白 |
Caco-2 人結直腸腺癌細胞 | 人肝臟細胞裂解物HHL |
FO細胞，小鼠骨髓瘤細胞 3T6-Swiss albino(胚胎成纖維細胞) 人臍靜脈內皮細胞(人膀胱癌細胞污染);ECV-304 [ECV304;ECV 304] | 兔脾淋巴原代細胞酸化葡萄糖合成酶1抗體 |
人低分化肺腺癌細胞;GLC-82 [GLC82] | PK-15(豬腎細胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured) |
THBD Others Rat 大鼠 Thrombomodulin / THBD 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H129人視網(wǎng)膜色素上皮細胞培養(yǎng)基100mL |
TNFSF11 Protein Mouse 重組小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽) | 酸化腫瘤血管內皮標志物8抗體 |
主導控制樣蛋白1抗體 | L132 人肺上皮細胞 |
酸化核糖體S6蛋白激酶β2抗體 | 腫瘤抑制基因P53蛋白抗體（野生型P53） |
酸化腫瘤血管內皮標志物8抗體 | GDF15 Protein Human 重組人 GDF-15 蛋白 (Fc 標簽) |
化工儀器網(wǎng)