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選對了ELISA試劑盒用對了試驗技巧，就會讓您的試驗功率事半功倍
閱讀：1358 發布時間：2019-1-25
說到ELISA Kit，信任大家都不會陌生。ELISA Kit的誕生，是為了幫助科研作業者省掉繁瑣的試驗過程，進步科研功率。假如選對了試劑盒，用對了試驗技巧，就會讓您的試驗功率事半功倍。
一.如何選購ELISA Kit
市面上任意品牌的一個ELISA Kit售價都在1000元以上假如選錯了試劑盒輕則丟失一筆科研經費重則毀掉整個試驗課題所以選個對的，很有必要！市面上的ELISA Kit質量良莠不齊，想要挑選到適宜的試劑盒還真不是一件很容易的事情。真真假假，難以區分。
1 查找待測樣本的蛋白濃度：能夠通過NCBI的文獻，uniprot，pax-dab上給出的蛋白表達量參閱值來比較ELISA試劑盒中給出的樣本值與報道值是否一致；
2 試劑盒的應用種屬、檢測樣本的品種：除試劑盒特別闡明外，一般不同種屬不能通用。常見待測樣本品種有：血清和血漿（不同抗凝劑），細胞上清，和細胞裂解液，試劑盒中不同樣本的稀釋液不混用；
3 試劑盒的檢測規模：也就是標曲規別要注意待測樣本濃度是否落在標曲規模內，關于濃度很高的樣本，能夠先進行預試驗摸索到比較好的稀釋倍數后再很多測定樣本。
4 試劑盒中的稀釋線性及回收率：
a.稀釋線性一般指樣本稀釋線性，是將樣本梯度稀釋下來，看各稀釋梯度濃度是否成線性；參閱樣本稀釋線性能夠挑選樣本的稀釋倍數；
b.稀釋線性也有做加標稀釋線性的情況，加標稀釋線性是將規范品參加樣本中測定參加的規范品濃度測定是否準確；同樣也是斷定待測樣本稀釋倍數的參閱指標。一般線性和回收率的規模在80%-120%比較適宜；
5 試劑盒的其它指標：
a.靈敏度：試劑盒能夠檢測到的樣本低濃度的才干，假如待檢指標含量很低，需求挑選高靈敏度的ELISA試劑盒；
b.板間和板內的變異系數（CV%）:反映板內和不同板之間是否均勻，CV%一般小于10% 比較好。
6 試劑盒的有效期：試劑盒的有效期一般是半年至一年，樣本準備時刻需求考慮到試劑盒的有效期。
二.ELISA Kit 運用技巧
選對ELISA Kit只是步要想獲得理想的試驗成果還需掌握運用技巧所以用對了，才干事半功倍！Bio-Swamp試劑盒團隊，歷經多年的實踐，總結了ELISA Kit運用技巧，與您分享。
1 樣本的準備：盡量運用新鮮樣本，不運用有溶血，被細菌污染、標本保存時刻過長和標本凝結不全的樣本。ELISA檢測宜采集新鮮標本，如不能立即測定，5天之內應4℃保存，關于1周后檢測的樣本應低溫凍存；做好分裝，長時刻凍存的樣本防止反復凍融。
2 仔細閱讀闡明書，了解整個流程，推薦畫出扼要步驟圖；提早準備試劑，比如常見20X洗滌液是濃縮液，需求用超純水提早稀釋準備好。一般的檢測抗體和酶標二抗需求用對應的稀釋液稀釋至作業濃度。
3 不同批次的試劑不要混用，查看各組分的有效期。
4 預包被的酶標板條和各試劑組份需求室溫平衡30 min以上，這樣做的意圖能使反響微孔內的溫度較快地到達所需溫度，預防后續試驗中由于孵育溫度或是時刻不行充沛，而將一些弱陽性樣本不能檢出。
5 待測樣本加樣：待檢樣本過多時，建議分批操作；需求稀釋的樣本提早做好稀釋，注意選對適宜稀釋液；控制好加樣時刻，防止加樣費時過長造成誤差；注意加樣視點，垂直參加孔底，不要接觸孔壁, 做到一份樣本一個移液頭，防止交叉污染。
6 溫育和洗板：溫育時刻和溫度一般根據試劑盒的闡明書進行挑選。溫育時能夠選用水浴或許濕盒孵育,防止“邊緣效應”。①手工洗板時，拍板時要垂直，防止交叉污染，用力不能過猛，防止抗原抗體復合物脫離；②洗板機洗板時應經常查看沖洗頭是否通暢。
7 顯色：市售ELISA 試劑盒中，一般是以四甲基聯苯胺(TMB)為底物的顯色液，反響條件為37℃或室溫反響15～30 min。顯色反響需求避光。
8 讀數和數據剖析：停止后讀取成果盡量在15min內完成，讀取OD值時酶標儀需先預熱15～30 min再進行。數據剖析一般用四參數和直線擬合法，挑選哪種擬合方式，能夠根據標曲的相關系數（R2）來斷定，R2一般需求大于0.99。