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詳細介紹
兔腸神經(jīng)嵴干原代細胞
兔腸嵴干細胞分離自腸組織；嵴干細胞（neural crest stem cells，NCSC），即外周系統(tǒng)干細胞，起源于胚胎期的管背側(cè)，與中樞系統(tǒng)干細胞在形態(tài)學上有著顯著不同，NCSC可表達低親和力營養(yǎng)因子受體p75NTR而不能分化出少突膠質(zhì)細胞，而中樞系統(tǒng)干細胞與之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多種組織，如元、膠質(zhì)、黑色素細胞、內(nèi)分泌細胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特異性分化出腸系統(tǒng)中元和膠質(zhì)的NCSC，被稱為腸嵴干細胞（gut neural crest stem cells，GNCSC）。
英文名稱 | Rabbit Intestinal Neural Crest Stem Cells | 組織來源 | 腸 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X8331 |
細胞形態(tài) | 球形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔腸神經(jīng)嵴干細胞
組織來源：腸
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：懸浮
細胞形態(tài)：球形
傳代特性：可傳1-3代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔腸嵴干細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔腸嵴干采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔腸嵴干經(jīng)Nestin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
HEC-1A, 人子宮內(nèi)膜癌細胞系 肝細胞,BRL細胞 TE 115.T(人軟組織纖維瘤細胞) | Rhesus antibody Rh GDPD2/GDE3 促進成骨細胞分化因子抗體 規(guī)格 0.2ml |
SP-A(Human Surfactant Protein A) ELISA Kit 人表面活性蛋白AMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的小鼠抗IgG 0.1ml |
Integrin alpha 4/CD49d/Integrin α4： 整合素α4抗體 0.1ml | BP180-Ab(Human anti-Bullous Pemphigoid 180 antibody) ELISA Kit 人抗BP180抗體 96T |
Rhesus antibody Rh Ret/HSCR1 原癌基因酪蛋白激酶受體RET/多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤和甲狀腺髓樣癌蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-Phospho-p90RSK (Ser380) /FITC 熒光素標記0酸化絲/蘇激酶p90RSK蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh phospho-SYN1(Ser553) 0酸化突觸素1抗體 規(guī)格 0.1ml | ACE(Mouse Angiotensin converting enzyme) ELISA Kit 小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 96T |
小鼠淋巴細胞白血病;L1210 | 非洲綠猴腎細胞;CV-1 |
KM小鼠腦膠質(zhì)母細胞瘤瘤株;G422 小鼠膀胱成纖維細胞培養(yǎng)基 100mL | 細胞名稱 種屬 |
人黑色素瘤細胞;A875 | 雜交瘤(B類);C3110D2E11 |
CM-R094大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細胞培養(yǎng)基100mL | 人毛細胞裂解物HHDPCL |
MLTC-1細胞，間質(zhì)細胞瘤細胞 人胃腺癌細胞,NCI-N87細胞 婆羅門牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-4 | 兔腸神經(jīng)嵴干原代細胞BP180-Ab(Human anti-Bullous Pemphigoid 180 antibody) ELISA Kit 人抗BP180抗體 96T |
胃黏膜上皮Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 人干細胞因子單克隆抗體細胞株;AMS2(SCF3) 人子宮頸上皮細胞培養(yǎng)基 100mL |
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/common magpie/Hong Kong/5052/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H085人臍動脈平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL |
中國倉鼠卵巢細胞K1(亞系克隆);CHO-K1 | Rhesus antibody Rh APEX2 嘌呤嘧啶核酸內(nèi)切酶2抗體 規(guī)格 0.1ml |
phospho-Band3 (Tyr21)： 0酸化紅細胞陰離子交換蛋白1抗體 0.1ml | HIT-T15 敘利亞倉鼠胰島β細胞 |
Anti-Sema7A/CD108/FITC 熒光素標記軸突生長因子CD108抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | PCDHGB5： 原鈣粘蛋白γB5抗體 0.2ml |
Anti-CDC42/FITC 熒光素標記細胞分化周期CDC42蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | 小鼠淋巴細胞白血病;L1210 |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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