化工儀器網
詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
?方法簡介
公司實驗室分離的人胃癌組織成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人胃癌組織成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 人胃癌組織成纖維原代細胞 | 組織來源 | 胃癌組織 |
英文名稱 | 見說明 | 貨號 | YS-01X7613 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人胃癌組織源成纖維細胞分離自患有胃癌病人的胃癌組織；胃癌（gastric carcinoma）是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國各種惡性腫瘤中發病率居，胃癌可發生于胃的任何部位，其中半數以上發生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累，絕大多數胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉移的過程中，涉及諸多復雜的過程，如細胞外基質的硬化和降解、新生血管的形成等，而這些過程會直接或間接的引起腫瘤微環境（Tumor mircoenvironment）的改變。腫瘤微環境即腫瘤細胞生存的外部環境，由不同種類的非腫瘤性的細胞與細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）構成，包括纖維細胞，免疫細胞，內皮細胞，間充質干細胞等，腫瘤細胞通過調控這些間質細胞，創造出有利于自身侵襲轉移的條件，從而使得腫瘤得到進展。越來越多的證據表明，腫瘤微環境的改變在腫瘤進展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環境中，研究多也是主要的間質細胞是腫瘤相關成纖維細胞（cancer-associated fibroblasts, CAFs）。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細胞和成纖維細胞樣細胞演化而來。胃癌組織源成纖維細胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的胃癌組織源成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
培養信息：
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產品：
心肌細胞培養基CMM-prf | Anti-TSLP 胸腺基質淋巴細胞生成素-1抗體Multi-class antibodies規格： 0.2ml |
BACE1(Human Beta-site APP-Cleaving Enzyme 1) ELISA kit 人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1 96T | Anti-MMP-1/FITC 熒光素標記基質金屬蛋白酶-1抗體Multi-class antibodies規格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh TIF1 Alpha/TRIM24 轉錄中介因子Tif1α抗體 規格 0.2ml | uPA(Human urokinase plasminogen activator) ELISA kit 人型纖溶酶原激活物Multi-class antibodies規格： 48T |
HES4： 轉錄因子HES4抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh CBFb/PEBP2B 多瘤病毒增強了結合蛋白2β抗體 規格 0.2ml |
FOXO3A： 叉頭蛋白O3A抗體 0.2ml | PGF ELISA Kit 大鼠前列腺素FMulti-class antibodies規格： 48T |
MDK Others Human 人 Midkine / MDK 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | ACE2 Others Human 人 ACE2 / ACEH 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人口腔角質細胞HOK | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/England/195/2009) HA 人細胞裂解液 (陽性對照) |
ESAM Others Human 人 ESAM 人細胞裂解液 (陽性對照) | 大鼠顆粒細胞(RGC)(1×106) |
G1(發綠色熒光的小鼠胚胎干細胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠小膠質細胞RM | SLIK1 Others Human 人 SLIK1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SV40T轉化的人胚腎細胞;293T | 人胃癌組織成纖維原代細胞uPA(Human urokinase plasminogen activator) ELISA kit 人型纖溶酶原激活物Multi-class antibodies規格： 48T |
EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KM9401 人血管內皮細胞培養基 100mL | 非洲綠猴腎細胞;CV-1 |
HCT116, 人結直腸癌細胞 Human | Hs 1.Tes細胞，正常人細胞 人癌細胞,Hs-578T細胞 心肌細胞培養基CMM |
HRAS Others Human 人 HRAS / GTPase Hras 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-PTEN/MMAC1 /FITC 熒光素標記一種抑制基因抗體(C端)IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml |
Orai2： 跨膜蛋白Orai2抗體 0.2ml | EFNA1 Others Mouse 小鼠 EFNA1 / Ephrin-A1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SPANX： /抗原11.3抗體 0.1ml | CATSPER： 陽離子通道相關蛋白1抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh IgG whole serum 驢抗人IgG抗血清 規格 1ml | MDK Others Human 人 Midkine / MDK 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
化工儀器網