人外周血淋巴原代細胞公司出售的產(chǎn)品：人原代腎癌組織源細胞 人非小細胞肺癌細胞 英文名稱： NCI-H1650 CWBRL2 社鼠肺成纖維樣細胞 1ml/T75 人淋巴血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基 100mL MouseM 小鼠肌肉細胞 小鼠原代肺大動脈內(nèi)皮細胞

本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的人外周血淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人外周血淋巴經(jīng)過檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

 

細胞簡介：

人外周血淋巴細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。淋巴細胞（lymphocyte）是白細胞的一種，是體積小的白細胞。其由淋巴器官產(chǎn)生，主要存在于淋巴管中循環(huán)的淋巴液中，是機體免疫應(yīng)答功能的重要細胞成分，是淋巴系統(tǒng)幾乎全部免疫功能的主要執(zhí)行者，是對抗外界感染和監(jiān)控體內(nèi)細胞變異的一線“士兵"。淋巴細胞是一類具有免疫識別功能的細胞系，按其發(fā)生遷移、表面分子和功能的不同，可分為T淋巴細胞（又名T細胞）、B淋巴細胞（又名B細胞）和自然殺傷（NK）細胞。T細胞和B細胞都是抗原特異性淋巴細胞，它們的初來源是相同的，都來自造血組織。T淋巴細胞隨血循環(huán)到胸腺，在胸腺激素等的作用下成熟，而B細胞在骨髓中分化成熟。當受抗原刺激后，T淋巴細胞即轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞，再分化為致敏T淋巴細胞，參與細胞免疫，其免疫功能主要是抗胞內(nèi)感染、瘤細胞與異體細胞等；而B淋巴細胞是先轉(zhuǎn)化為漿母細胞，再分化為漿細胞，產(chǎn)生并分泌免疫球蛋白（抗體），參與體液免疫，其功能是產(chǎn)生抗體，提呈抗原，以及分泌細胞內(nèi)因子參與免疫調(diào)節(jié)；NK細胞不依賴抗原刺激而自發(fā)地發(fā)揮細胞毒效應(yīng)，具有殺傷靶細胞的作用。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：