化工儀器網
詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人外周血來源內皮祖采用采集外周血、密度梯度離心、差速貼壁法結合內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人外周血來源內皮祖經CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 人外周血來源內皮祖原代細胞 | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Human Peripheral Blood-Derived Endothelial Progenitor Cells | 貨號 | YS-01X7499 |
產品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人外周血來源內皮祖細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。內皮祖細胞是血管內皮細胞的前體細胞，亦稱為成血管細胞（Angioblast），是一群具有游走特性，能進一步增殖分化的幼稚內皮細胞，缺乏成熟內皮細胞的特征性表型，不能形成管腔樣結構，其功能主要為參與了出生后缺血組織的血管發(fā)生和血管損傷后的修復。研究顯示，內皮祖細胞在心腦血管疾病、外周血管疾病、腫瘤血管形成及創(chuàng)傷愈合等方面均發(fā)揮重要作用，并為缺血性疾病的研究治療提供了新思路，EPCs生物學特性和治療作用的研究成為這一領域新的熱點。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代；不建議多次傳代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產品：
人癌細胞;MDA-MB-468 大鼠小腦顆粒細胞培養(yǎng)基 100mL | PACAP(Human pituitary adenylate cyclase activating polypeptide) ELISA Kit 人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽 96T |
RBMX2： RNA結合蛋白X-連鎖蛋白2抗體 0.1ml | Rhesus antibody Rh Rab17 RAS癌基因相關蛋白RAB17抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-Phospho-HDAC4(Ser632)/HDAC5(Ser498)/HDAC7(Ser486) /FITC 熒光素標記0酸化組蛋白去乙酰化酶4、5、7抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C17orf97： 17號染色體開放閱讀框97抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BrdU 溴脫氧尿苷抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-COMP/EPD1/FITC 熒光素標記軟骨寡聚基質蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
Ets轉錄因子家族ets1抗體 anti-ets1/E26 0.2ml | ALDH9A1： γ-基醛脫氫酶抗體 0.2ml |
Pcc4 小鼠畸胎瘤細胞 | CM-H021人前列腺平滑肌細胞培養(yǎng)基100mL |
Lncap細胞，前列腺癌細胞 膀胱變移細胞癌細胞,T-24細胞 人胚腎細胞;293 Cells, low passage | 615小鼠癌瘤株;Ca763 |
Hep G2 人肝癌細胞 | 血管內皮生長因子 |
CL-0171NIH/3T3(小鼠胚胎細胞)5×106cells/瓶×2 | CL-0084FRhK-4(恒河猴胚腎細胞)5×106cells/瓶×2 |
SW 982 [SW-982, SW982]人滑膜肉瘤細胞 SW 982 [SW-982, SW982] human synovial sarcoma cells L-15(GIBCO)+10%FBS | 人外周血來源內皮祖原代細胞C17orf97： 17號染色體開放閱讀框97抗體 0.2ml |
二氫還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr- | 7721細胞，7721肝癌細胞 人肺癌細胞(淋巴結轉移),NCI-H292細胞 人間充質干細胞-脂肪 |
HEL(人紅白細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 肝實質細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IL21R Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 蛋白 (His 標簽) |
CM-M025小鼠外周血白細胞培養(yǎng)基100mL | IgM/RBITC 羅丹明標記的兔抗大鼠IgM 0.3ml |
Rhesus antibody Rh GRPP 胰高血糖素相關肽抗體 規(guī)格 0.2ml | 人前脂肪細胞-內臟裂解物HPA-v L |
ENPP7： 堿性鞘0脂酶7抗體 0.1ml | Anti-LRIG3 LRIG3抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
HMGB-1(Mouse High mobility group protein B1) ELISA Kit 小鼠高遷移率族蛋白B1Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | Pcc4 小鼠畸胎瘤細胞 |
化工儀器網