人外周血T淋巴原代細胞公司出售的產品：人原代乳腺癌組織源細胞 人眼脈絡黑色素瘤細胞 英文名稱： MuM－2C Walker/LLC-WRC 256 大鼠腹水癌細胞 1ml/T75 人前列腺平滑肌細胞培養基 100mL PK136 小鼠 X 小鼠 小鼠原代肝實質細胞

人外周血T淋巴原代細胞

人外周血T淋巴細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。外周血單個核細胞（PBMC）即外周血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞。目前，主要的分離方法是密度梯度離心法，因為血液中各有形成分的比重存在差異，因此得以分離出不同的細胞。T淋巴細胞（T-lymphocyte）來源于骨髓的多能干細胞（胚胎期則來源于卵黃囊和肝）。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細胞或前T細胞遷移到胸腺內，在胸腺激素的誘導下分化成熟，成為具有免疫活性的T細胞。成熟的T細胞經血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴區定居，并可經淋巴管、外周血和組織液等進行再循環，發揮細胞免疫及免疫調節等功能。T細胞的再循環有利于廣泛接觸進入體內的抗原物質，加強免疫應答，較長期保持免疫記憶。T細胞的細胞膜上有許多不同的標志，主要是表面抗原和表面受體。這些表面標志都是結合在細胞膜上的巨蛋白分子。多能干細胞轉變為淋巴樣前體細胞（Lymphoid precursor）遷移至胸腺，在的誘導下，經歷一系列有序的分化過程，逐漸在胸腺發育成熟為識別各種抗原的T細胞庫。T淋巴細胞進入胸腺后首先經歷兩個階段：①早期T淋巴細胞發育階段，即始祖CIM和CD8雙陰性T淋巴細胞（double negative cell，DN）分化為CD4和CD8雙陽性T細胞（double positive cell，DP）；②DP細胞分別經歷陽性選擇階段和陰性選擇階段獲取MHC限制性識別能力和對自身抗原的耐受性，發育為其表面標志為CD4或CD8的單陽性T細胞（single positive cell，SP），遷往周圍淋巴器官定居。T細胞是相當復雜的不均一體、又不斷在體內更新、在同一時間可以存在不同發育階段或功能的亞群，但分類原則和命名比較混亂，尚未統一。按免疫應答中的功能不同，可將T細胞分成若干亞群，一致的有：1、輔助性T細胞（Helper T cells,Th），具有協助體液免疫和細胞免疫的功能；2、抑制性T細胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制細胞免疫及體液免疫的功能；3、效應T細胞（Effector T cells,Te），具有釋放淋巴因子的功能；4、細胞毒性T細胞（Cytotoxic T cells,Tc），具有殺傷靶細胞的功能；5、遲發性反應T細胞（Delayed type hypersensitivity T cells,Td），有參與Ⅳ型反應的作用；放大T細胞（Ta），可作用于Th和Ts，有擴大免疫效果的作用；6、原始的或天然T細胞（Virgin or Natural T cells），他們和抗原接觸后分化成效應T細胞和記憶T細胞；7、記憶T細胞（Memory T cell,Tm），有記憶特異性抗原刺激的作用。T細胞在體內存活的時間可數月至數年。其記憶細胞存活的時間則更長。其中，Th細胞又被稱為CD4+細胞，因為其在表面表達CD4（cluster of differentiation 4）。通過與MHCⅡ（主要組織相容性復合體，major histocompatibility complex）遞呈的多肽抗原反應被激活。MHCⅡ在抗原遞呈細胞（antigen presenting cells,APCs）表面表達。一旦激活，可以分泌細胞因子，調節或者協助免疫反應。Tc細胞又名為CD8+細胞，其表面表達CD8。這類細胞可以通過MHCI與抗原直接結合。淋巴細胞主要包括T淋巴細胞（CD3+），B淋巴細胞（CD19+），NK細胞（CD16+CD56+）。

產品名稱：人外周血T淋巴細胞

組織來源：外周血

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基：基礎培養基，含IL-2、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細胞形態：圓形

傳代特性：不建議傳代

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人外周血T淋巴細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

方法簡介

實驗室分離的人外周血T淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法結合磁珠分選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的人外周血T淋巴經CD3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。