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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人腎足突采用機械研磨過不同孔徑不銹鋼網篩結合膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人腎足突經PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 人腎足突原代細胞 | 組織來源 | 腎組織 |
英文名稱 | Human Renal Podocyte Cells | 貨號 | YS-01X7272 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人腎足突細胞分離自腎組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造。血液經由入球小動脈進入腎小球。腎小球內的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行。微血管中的血液經由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。足細胞（podocyte）即腎小囊臟層上皮細胞，它附著于腎小球基底膜（GBM）的外側，連同GBM和毛細血管內皮一起構成了腎小球血液濾過屏障。足細胞特殊的解剖位置，使得其體內研究較為困難；又由于正常成年機體的腎臟足細胞是一種終末分化細胞，體外培養的原代細胞不能增殖。足細胞呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，又稱足突（FP），呈指狀交叉復蓋于GBM外表面，并通過黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分，IV型膠原和纖維連接蛋白（FN）；在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質金屬蛋白酶（MMPs）和組織蛋白酶，從而在GBM的代謝平衡中發揮重要作用。足細胞之間鄰近的足突相互交替，形成了許多30-40nm的裂孔，孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜，即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過脈管系統的后屏障，對于維持腎小球濾過屏障結構與功能完整性發揮關鍵作用。
培養信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 上皮細胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞 腎癌細胞,RCC-krause細胞 SK-HEP-1(肝癌細胞) | C1q rat (ELISA Kit) 大鼠補體片斷C1q 96T |
RanBP2： RAN結合蛋白2/核孔蛋白抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Rab24 ras基因相關蛋白Rab24抗體 規格 0.2ml |
Anti-HDAC2/HD2/FITC 熒光素標記組蛋白去乙酰化酶2抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | C9orf86： 9號染色體開放閱讀框86抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRLF1 EBV立即早期基因BRLF1抗體 規格 0.2ml | Anti-c/Troponin T/FITC 熒光素標記心肌特異性肌鈣蛋白T抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml |
雌激素受體α/β抗體 Anti-ER-α/β Estrpgen Receptor α/β 0.1ml | phospho-AMPK alpha 2 (Ser176)： 0酸化腺苷單0酸活化蛋白激酶α2抗體 0.1ml |
小鼠紅白血病細胞;MEL | CL-0433RWPE-2(人前列腺正常細胞)5×106cells/瓶×2 |
SL-7細胞，胚肺細胞 人前列腺上皮細胞,RWPE2細胞 人上皮細胞;MCF-10A | 魚源細胞 |
巨噬細胞生長添加物MGS | EB病毒轉化的人B淋巴細胞;KMYF |
CL-0025AR42J(大鼠胰腺外分泌細胞)5×106cells/瓶×2 | CL-0076EAC(小鼠艾氏腹水癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
大額牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-1 正常肝細胞，L-02細胞 T24(膀胱移行細胞癌細胞) | 人腎足突原代細胞C9orf86： 9號染色體開放閱讀框86抗體 0.2ml |
二氫還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細胞;CHO/dhFr- | L929細胞，小鼠成纖維細胞 3T3-L1(小鼠脂肪細胞) 小鼠腦瘤細胞;BC3H1 |
PDCD1 Others Mouse 小鼠 PD1 / PDCD1 人細胞裂解液 (陽性對照) | IL5 Protein Human 重組人 IL5 / Ierleukin 5 蛋白 |
人臍帶單核細胞培養基 100mL | IgM/Cy7 Cy7標記的兔抗大鼠IgM 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GSK-3β (NT) 糖原合酶激酶-3β抗體 規格 0.2ml | 人前列腺平滑肌細胞裂解物HPSMCL |
EMP-1： 表皮膜蛋白1抗體 0.1ml | Anti-LPL/PLASTIN2 脂蛋白脂酶抗體Multi-class antibodies規格： 0.2ml |
Beta-CG(Mouse Chorionic Gonadotrophin Beta) ELISA Kit 小鼠絨毛膜βMulti-class antibodies規格： 48T | 小鼠紅白血病細胞;MEL |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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