化工儀器網
詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人肺動脈成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人肺動脈成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 人肺動脈成纖維原代細胞 | 組織來源 | 肺動脈組織 |
英文名稱 | Human Pulmonary Artery Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7023 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人肺動脈成纖維細胞分離自肺動脈組織；肺動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經肺門入肺。肺動脈干位于心包內，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺動脈成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺動脈成纖維細胞在生理條件下的主要功能包括：構造和維持肺動脈的正常形態；合成和釋放細胞外基質；組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
培養信息：
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
人少突膠質細胞 人肺癌細胞，SK-MES-1細胞 P3X63Ag8.653(骨髓瘤細胞) | FE(Mouse ferritin) ELISA KIT 小鼠鐵蛋白 96T |
RDH11： 脫氫酶11/丙型肝炎病毒核心蛋白抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗親和素 規格 0.1ml |
Anti-HBA1/FITC 熒光素標記人類血紅蛋白α1抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | CPB2： 胰羧肽酶B2抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD1 BTB/POZ結構域蛋白1(丙型肝炎病毒的NS5A反轉錄蛋白8)抗體 規格 0.2ml | Anti-CRLR/CALCRL/FITC 熒光素標記降鈣素受體樣蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml |
膠質細胞谷運載蛋白1 抗體 Anti-EAAT1/Glast 0.1ml | Annexin A10： 膜粘連蛋白10抗體 0.1ml |
人結直腸腺癌細胞;Caco-2 | 獼猴肌肉細胞;MMm7 |
615小鼠狀肺腺癌瘤株;P615 小鼠腎動脈內皮細胞培養基 100mL | CSC, 小鼠心肌細胞 Mouse |
人橫紋肌肉瘤細胞;A-204 | 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A |
腸靜脈內皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | CL-0034BHK-21(倉鼠腎細胞)5×106cells/瓶×2 |
MDA-MB-435S細胞，癌細胞 人鼻咽癌細胞,HNE3細胞 CL-0292MKN45(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 人肺動脈成纖維原代細胞CPB2： 胰羧肽酶B2抗體 0.2ml |
大鼠纖維母細胞;1/EJ 1-1 | PC-12細胞，大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化) 22RV1(前列腺癌細胞) 人肝癌細胞;SMMC-7721 |
JAM3 Others Mouse 小鼠 JAM3 / JAM-C 人細胞裂解液 (陽性對照) | 大額牛皮膚成纖維樣細胞;BOS-2 |
人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞;NK-92MI [NK92MI] | Rabbit Anti-IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的兔抗豬IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GZMB/Granzyme B 顆粒酶B抗體 規格 0.1ml | 人臍靜脈內皮細胞RNAHUVEC miRNA5 μg |
ELAVL2： ELAVL2蛋白抗體 0.2ml | Anti-LIX1 LIX1抗體Multi-class antibodies規格： 0.2ml |
E(Mouse estrogen) ELISA Kit 小鼠雌激素Multi-class antibodies規格： 48T | 人結直腸腺癌細胞;Caco-2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網