化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞肺動脈平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實(shí)驗(yàn)室分離的雞肺動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 雞肺動脈平滑肌原代細(xì)胞 | 組織來源 | 肺動脈組織 |
英文名稱 | Chicken Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X7010 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞簡介：
雞肺動脈成纖維細(xì)胞分離自肺動脈組織；肺動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導(dǎo)向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經(jīng)肺門入肺。肺動脈干位于心包內(nèi)，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進(jìn)入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經(jīng)升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進(jìn)入右肺上、中、下葉。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺動脈成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺動脈成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺動脈的正常形態(tài)；合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)；組織損傷后及時大量聚集修復(fù)損傷組織。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
Tsu-Pr1細(xì)胞，非雄激素依賴型前列腺癌 人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞,KLE細(xì)胞 心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHCMEC cDNA | NF-KapB p65 ELISA Kit 大鼠核因子κB亞基p65親和肽 96T |
ROR alpha： 維相關(guān)孤兒受體α抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Cy5 Cy5標(biāo)記的兔抗親和素 規(guī)格 0.1ml |
Anti-H2AX/FITC 熒光素標(biāo)記組蛋白H2AX抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C1orf220： 1號染色體開放閱讀框220抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BTBD7 BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體 規(guī)格 0.2ml | Anti-C-REL/FITC 熒光素標(biāo)記淋巴細(xì)胞衍生C-型凝集素抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
死亡受體4抗體 Anti-DR4/APO2/TRAILR1 0.1ml | Aspartate Aminotransferase： 谷草轉(zhuǎn)酶抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO | C57BL/6小鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞 C57BL/6 mouse adipose mesenchymal stem cells |
FBM細(xì)胞，胎兒骨髓間充質(zhì)細(xì)胞 嬰兒雙歧桿菌 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(拉祜族);KM9406 | U14(小鼠子細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 |
彈(含10mL酶解緩沖液) 1mL | IL2 Protein Human 重組人 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白 |
膽道癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)/1ml | CL-0020Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 |
BxPc-3-EGFP-puro (慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人原位胰腺腺癌細(xì)胞 BxPc-3-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in situ pancreatic adenocarcinoma cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycin | 雞肺動脈平滑肌原代細(xì)胞C1orf220： 1號染色體開放閱讀框220抗體 0.2ml |
大鼠腎小管上皮細(xì)胞RRTEpiC | Hep3B2.1-7細(xì)胞，人肝癌細(xì)胞 人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞,D341Med細(xì)胞 中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CTLA4 Ig-24 |
HFT-8810(人胎兒胸腺細(xì)胞株) 5×106cells/瓶×2 奇異變形桿菌 | IL21 Protein Canine 重組狗 IL21 / Ierleukin 21 蛋白 |
CL-0404NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 | IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh H1N1 matrix protein 2 甲型流感病毒M2抗體 規(guī)格 0.2ml | 人臍動脈平滑肌細(xì)胞總RNAHUASMC NA |
ETS1 associated protein II： ETS1相關(guān)蛋白2抗體 0.1ml | Anti-Lingo-1 Nogo受體反應(yīng)蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
HSP-70(Mouse Heat Shock Protein 70) ELISA Kit 小鼠熱休克蛋白70Multi-class antibodies規(guī)格： 48T | 非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網(wǎng)